東莞市漢族女性亞甲基四氫葉酸還原酶和甲硫氨酸合成酶還原酶的基因多態(tài)性分布

孫曉巖 韓臨曉 陳博

近年來, 臨床上加強(qiáng)了對(duì)基因多態(tài)性和同型半胱氨酸(Hcy)代謝、葉酸的研究, 但受研究方法與研究對(duì)象影響后,各研究結(jié)果均在不同程度上存在差異性［1,2］。本研究主要針對(duì)東莞市漢族女性MTHFR(hvlenetetrahvdrofolate reductase)和MTRR(methionine synthase reductas)的基因多態(tài)性分布特點(diǎn)進(jìn)行探究, 以此為該地區(qū)心腦血管疾病與出生缺陷預(yù)防方案的制定提供依據(jù), 報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2015年7月～2016年3月在東莞市第三人民醫(yī)院進(jìn)行備孕、孕前和孕期檢查的漢族女性718例為研究對(duì)象, 平均年齡(30.02±1.59)歲。所有女性均自愿簽署知情同意書, 且均接受了口腔黏膜細(xì)胞采樣與遺傳檢驗(yàn), 將DNA抽提不符合要求的女性排除。

1. 2 方法 所有受檢者進(jìn)行空腹抽取外周靜脈血5 ml, DNA提取通過柱式抽提試劑盒進(jìn)行抽提, 提取結(jié)束后并進(jìn)行DNA濃度測(cè)定。MTRR A66G、MTHFR A1298C、MTHFR C677T的基因多態(tài)性采用Mass ARRAY技術(shù)進(jìn)行SNP分型檢測(cè), 利用MASS ARRAY的引物設(shè)計(jì)平臺(tái)設(shè)計(jì)PCR引物, 包括一對(duì)多重PCR擴(kuò)增引物及一條MASS EXTEND延時(shí)引物。然后進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng), 每個(gè)反應(yīng)體系總體積為5 μl, 1 μl包含濃度為 20 ng/μl的 DNA模板 , 1.8 μl無酶水 , 0.5 μl 10× PCR buffer, 0.4 μl 25 μM MgC12, 0.1 μl 25 μM dNTP Mix, 1 μl 0.5 μM Primer Mix, 0.2 μl 5 U/μl PCR Enzyme。設(shè)定反應(yīng)條件為：95℃2 min, 然后再完成20個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增(95℃30 s, 56℃ 30 s, 72℃1 min)與45個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增。結(jié)束整個(gè)反應(yīng)過程之后得到的PCR產(chǎn)物經(jīng)過樹脂純化后在Nanodispenser Spectro CHIP芯片上點(diǎn)樣, 然后進(jìn)行Mass ARRAY 分析, 每個(gè)檢測(cè)點(diǎn)只需3～5 s,全自動(dòng)分析, 通過TYPPER4.0軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù), 采用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算基因頻率, χ2檢驗(yàn)法完成等位基因頻率、基因型、Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn), 相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)采用95%可信區(qū)問(CI)表示, α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2. 1 各地區(qū)基因型頻率與頻數(shù)對(duì)比 MTRR A66G、MTHFR A1298C、MTHFR C677T分別接受H-w遺傳平衡檢驗(yàn)之后,發(fā)現(xiàn)其均能和H-w平衡高度符合, 表示該樣本能夠有效代表本區(qū)域群體。本研究對(duì)東莞市漢族女性MTHFR、MTRR基因多態(tài)性分布情況與海南、德陽、鄭州、濰坊等4個(gè)地方進(jìn)行對(duì)比, MTRR A66G的基因型構(gòu)成和海南對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 和德陽、鄭州、濰坊對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 純合突變基因GG頻率低于海南(P＜0.05)；MTHFR A1298C基因型構(gòu)成和海南、德陽對(duì)比, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 和鄭州、濰坊對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 純合突變基因型CC高于鄭州、濰坊(P＜0.05)；東莞性MTHFR C677T基因型構(gòu)成和海南地區(qū)對(duì)比, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 和德陽、鄭州、濰坊對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),純合突變基因型TT頻率高于德陽, 低于鄭州、濰坊。見表1。

2. 2 各地區(qū)等位基因頻率與頻數(shù)對(duì)比 東莞市漢族女性MTHFR C677T突變等位基因頻率和德陽對(duì)比, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 低于海南, 高于鄭州、濰坊, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；MTHFR A1298C突變等位基因頻率和德陽、海南對(duì)比, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 高于濰坊、鄭州, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；MTRR A66G突變等位基因頻率和德陽、鄭州、濰坊對(duì)比, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 低于海南差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。濰坊、鄭州、德陽、東莞和海南地區(qū)的MTHFR C677T突變等位基因頻率從北到南遞減。見表2。

表1 各地區(qū)基因型頻率與頻數(shù)對(duì)比［n(%)］

表2 各地區(qū)等位基因頻率與頻數(shù)對(duì)比［n(%)］

3 討論

妊娠期高血壓綜合征、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、先天性心臟病、唇腭裂、神經(jīng)管缺陷等疾病發(fā)展過程中, 血漿Hcy均具有十分重要的作用［3］。受到營養(yǎng)因素與遺傳因素的共同作用之后, 便會(huì)促使血漿Hcy水平在一定程度上升高。葉酸代謝中, MTRR與MTHFR屬于兩種關(guān)鍵酶, 編碼酶活性、血漿Hcy濃度、血清和紅細(xì)胞葉酸濃度均會(huì)受到MTRR A66G、MTHFR C677T和MTHFR A1298C的影響。本研究中, 濰坊、鄭州、德陽、東莞和海南地區(qū)的MTHFR C677T突變等位基因頻率從北到南遞減, 可知對(duì)MTRR與MTHFR進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查有利于我國深入化的研究出生缺陷病因?qū)W, 基因多態(tài)性地域分布差異在一定程度上反映了我國出生缺陷發(fā)病率南低北高情況。其次, 東莞市漢族女性具有自身獨(dú)特的MTHFR和MTRR基因多態(tài)性分布特點(diǎn), 為此, 制定健康干預(yù)方案時(shí), 應(yīng)該嚴(yán)格遵循“因人而異、因地制宜”的原則, 最大程度上對(duì)出生缺陷進(jìn)行有效預(yù)防［4-6］。

綜上所述, 東莞市漢族女性具有自身獨(dú)特的MTHFR和MTRR基因多態(tài)性分布特點(diǎn), 要根據(jù)該地區(qū)實(shí)際情況制定針對(duì)性的預(yù)防措施。