外周血染色體核型分析在染色體病診斷中的價值研究

萬濤

【摘要】 目的：探析外周血染色體核型分析在染色體疾病診斷中的應(yīng)用價值。方法：收集2012年7月-2017年11月于筆者所在醫(yī)院進行遺傳咨詢并接受外周血染色體核型分析的1 000例患者作為研究對象，統(tǒng)計遺傳咨詢原因、外周血染色體核型分析結(jié)果。結(jié)果：1 000例遺傳咨詢者因先天愚型、性征異常、男性不育癥、不孕癥、原發(fā)或繼發(fā)性閉經(jīng)、先天性智力低下、習(xí)慣性流產(chǎn)、畸形胎史或死胎史、先天畸形等原因入院就診，外周血染色體核型分析檢查檢出異常56例（5.6%），其中不良孕產(chǎn)組病例染色體全為結(jié)構(gòu)異常，此外不孕不育組、新生兒表現(xiàn)異常組和生產(chǎn)發(fā)育異常組大多數(shù)為染色體數(shù)目異常。結(jié)論：遺傳咨詢者通過外周血染色體核型分析可檢出異常核型，與臨床表現(xiàn)相結(jié)合可診斷染色體病，應(yīng)用價值高，值得推廣。

【關(guān)鍵詞】 外周血； 染色體核型分析； 染色體病； 診斷

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.19.026 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2018）19-00-03

染色體病發(fā)生的原因為染色體結(jié)構(gòu)異常或染色體數(shù)目異常，目前醫(yī)學(xué)對該疾病尚無根治方法，關(guān)鍵在于積極采取有效防御措施，產(chǎn)前指導(dǎo)孕婦定期入院接受孕檢，因為出生個體一旦發(fā)生疾病可能導(dǎo)致先天性畸形、性征異常、智力低下、不孕、流產(chǎn)、生長發(fā)育障礙或異常、影響后代生育等不良后果[1-2]。外周血染色體核型分析是臨床輔助診斷染色體病的重要手段，本文旨在探析外周血染色體核型分析在染色體疾病診斷中的應(yīng)用價值，收集2012年7月-2017年11月于筆者所在醫(yī)院進行遺傳咨詢并接受外周血染色體核型分析的1 000例患者進行了回顧性分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2012年7月-2017年11月于筆者所在醫(yī)院進行遺傳咨詢并接受外周血染色體核型分析的1 000例患者，其中男475例，女525例，年齡1 d～58歲，平均年齡（26.88±5.12）歲；且年齡低于40歲者951例，占總比例95.1%。納入研究者遺傳咨詢就診原因主要有夫妻有畸形兒生育史、有不良孕產(chǎn)史、不孕不育、先天畸形、智力低下、高齡初產(chǎn)婦、染色體平衡易位攜帶者等。所有納入研究者均對此次研究知情，并簽署同意書加入其中，且研究已獲得筆者所在醫(yī)院倫理委員會批準，同時排除對研究不知情者和不愿意配合檢查者。

1.2 方法

1.2.1 外周血標本淋巴細胞培養(yǎng) 嚴格按醫(yī)院無菌操作流程抽取靜脈血3 ml，注入5 ml無菌肝素抗凝管內(nèi)，輕輕顛倒混勻，在超凈工作臺環(huán)境下將大約0.3 ml的全血標本融入到含有外周血核型分析培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶內(nèi)（培養(yǎng)基由北京易世盛達科技發(fā)展有限公司提供），培養(yǎng)瓶接種之后放于溫度在37 ℃，且含有5%濃度二氧化碳的培養(yǎng)箱中，持續(xù)培養(yǎng)72 h[3]。

1.2.2 染色體G顯帶 培養(yǎng)終止前3 h在培養(yǎng)瓶中加入濃度為20 μg/ml的秋水仙素溶液50 μl，細胞懸液接著被移到10 ml容量離心管中，離心處理轉(zhuǎn)速為2 000 r/min，處理10 min后去除上清液再加入6 ml濃度為0.075 mol/L的KCl低滲液，盡可能均勻，之后再放在溫度為37 ℃的水浴箱中，時間約20 min，離心管取出即刻加入新鮮配制的固定液進行預(yù)固定處理，固定液按冰醋酸和甲醇以1∶3的比例配成，劑量為1.0 ml，輕輕吹打混勻，再以2 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，去除上清液后加入新鮮配制的固定液，同上，劑量為5 ml，輕柔充分吹打混勻之后，10 min 2 000 r/min離心處理，棄去上清液后，再重復(fù)固定1次，最后步驟以少量固定液對細胞進行重懸。滴管吸取少許細胞懸液，將其均勻地滴在清潔消毒后的濕潤載玻片上，同樣操作制片2～3張，編號后均放于鼓風(fēng)干燥箱以內(nèi)，持續(xù)60℃干燥過夜處理，取出載玻片使其自然冷卻至室內(nèi)常溫，接著將其放入0.05%濃度劑量約50 ml的胰蛋白酶溶液中，消化留置大約40 s，立即在生理鹽水中漂洗兩次，再經(jīng)吉姆薩染液處理，時間控制在5～8 min，隨后在室溫環(huán)境下放置干片之后進行分析[4-5]。

1.2.3 外周血染色體核型分析 在油鏡下常規(guī)進行外周血染色體核型分析，每位患者計數(shù)20～30個中期分裂相核型，分析3～5個G帶核型，最終畫圖分析3個核型并拍照；若為高疑嵌合體病例，計數(shù)分析中期分裂象擴大到100個或200個，以確定結(jié)果比例。部分患者根據(jù)病情需要還進行了銀染、R帶、C帶、高分辨顯帶等其他針對性輔助檢查[6]。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

1 000例遺傳咨詢?nèi)朐航邮芡庵苎旧w核型分析檢查患者中發(fā)現(xiàn)染色體異常56例，異常檢出率為5.6%。按遺傳咨詢原因?qū)? 000例患者分為不良孕產(chǎn)組、不孕不育組、嬰幼兒表現(xiàn)異常組、生產(chǎn)發(fā)育異常組及其他五組，對應(yīng)病例數(shù)分別為300、400、200、50、50例。1 000例遺傳咨詢者入院接受診斷的原因及和異常染色體檢出情況見表1。

2.2 五組患者染色體異常核型分布情況

56例染色體異常患者中，包括染色體數(shù)目異常39例（69.6%）、染色體結(jié)構(gòu)異常17例（30.4%），不良孕產(chǎn)組染色體全為結(jié)構(gòu)異常，此外不孕不育組、嬰幼兒表現(xiàn)異常組和生產(chǎn)發(fā)育異常組大多數(shù)為染色體數(shù)目異常，五組患者檢出異常類型分布特點見表2。

2.3 染色體核型分析異常及其主要臨床表現(xiàn)情況分析

（1）不良孕產(chǎn)組染色體異常病例異常核型有46，XX，t（1；10）（p21；q25）、46，XY，t（1；13）（q44；q14）、46，XX，t（2；11）（p12；q22）、46，XX，t（2；12）（q33；q24.3）、46，XY，t（3；14）（p10；p10）、46，XX，t（5；12）（q33；q13）、46，XX，t（11；22）（q23；q11.2）、46，XY，inv（2）（p11.2q13）、46，XX，inv（4）（p12q21）、46，XY，inv（Y）（p11.3q12），臨床主要表現(xiàn)有不良孕產(chǎn)史、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、自然流產(chǎn)、先兆流產(chǎn)、畸胎史、死胎史等。（2）不孕不育組染色體異常病例異常核型有mos 45，X/46，XX/47，XXX、45，XX，der（13；14）（q10；q10）、45，XY，der（13；14）（q10；q10）、46，X，i（X）（q10）、47，XXY，臨床主要表現(xiàn)為原發(fā)性不孕、妻子不孕、男性無精子等。（3）嬰幼兒表現(xiàn)異常組異常核型有mos 46，XX/47，XX，+21、46，XX，der（21；21）（q10；q10），+21、47，XX，+21、47，XY，+21、mos 46，XX/47，XX，+mar、46，XX，del（18）（q12q12）、47，XY，+mar，主要臨床表現(xiàn)有三體綜合征，智力和生長發(fā)育落后等。（4）生產(chǎn)發(fā)育異常組異常核型有mos 45，X/46，X，i（X）（q10）、mos 45，X/46，XY、47，XXY，主要臨床表現(xiàn)有身材矮小、甲亢、卵巢早衰、原發(fā)性閉經(jīng)、高泌乳素血癥、月經(jīng)失調(diào)、男性乳房發(fā)育、先天卵巢發(fā)育不全等。

3 討論

染色體核型異常是導(dǎo)致流產(chǎn)的重要因素之一，核型異常主要又分為倒位和平衡易位，因為染色體基本沒明顯或重要物質(zhì)丟失，異常攜帶者可能并無臨床癥狀，而一旦生育就常發(fā)生多次、反復(fù)流產(chǎn)，根據(jù)遺傳學(xué)效應(yīng)解釋主要是減數(shù)分裂時形成了不平衡的配子，受精卵形成之后合子往往為部分三體或染色體單體，進而導(dǎo)致胚胎壞死而發(fā)生流產(chǎn)現(xiàn)象[7]。夫婦中染色體平衡易位是最常見異常核型，有數(shù)據(jù)研究顯示，正常人中該異常核型發(fā)生率大概在0.2%，橫向比較多次流產(chǎn)病例中平衡易位發(fā)生概率高出常人10～20倍[8]。本次研究1 000例遺傳咨詢者中有不良孕產(chǎn)史和不孕不育癥共計700例（70%），其中不良孕產(chǎn)組均為染色體結(jié)構(gòu)異常，臨床主要表現(xiàn)有不良孕產(chǎn)史、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、自然流產(chǎn)、先兆流產(chǎn)、畸胎史、死胎史等；不孕不育組大多數(shù)為染色體數(shù)目異常[9]。

染色體疾病一般涉及多系統(tǒng)、器官、組織，目前臨床對其治療并無有效方法，為降低染色體病發(fā)生率，產(chǎn)前診斷、遺傳咨詢是主要預(yù)防手段。染色體病表現(xiàn)多樣，其中以綜合征最為常見，染色體嚴重畸形者可宮內(nèi)死亡或自然流產(chǎn)，少數(shù)畸變者存活到出生后新生兒易多發(fā)畸形，常發(fā)育異常、智力低下、生長遲緩、多器官及系統(tǒng)功能障礙等，給患兒家庭帶來終身遺憾，有研究顯示染色體病高危因素有高齡、不良物理化學(xué)環(huán)境、病毒感染等，這些特殊群體孕育應(yīng)做好孕前檢查，注意染色體病遺傳咨詢。

性別分化由男性Y染色體決定，有研究發(fā)現(xiàn)該染色體攜帶相關(guān)基因由睪丸決定因子決定，也被稱之為Y染色體性別決定區(qū)（SRY）[10]，它在胚胎原始性腺中表達，性腺再分化成睪丸，睪丸功能正常表達、正常發(fā)育才能決定男性性征表型及生理功能。因此可以說染色體類型并不可完全決定最終社會男性性別，臨床可表現(xiàn)有XX男性，呈現(xiàn)出睪丸小、多年不孕、無精子等表象，這也就是染色體核型異常和性征異常表現(xiàn)之一，而患者臨床性征表現(xiàn)異常又分為第一特征和第二特征兩種，通過外周血染色體核型分析可診斷其相關(guān)隱形染色體病[11-12]。

綜上所述，外周血染色體核型分析檢查可發(fā)現(xiàn)患者核型異常，而且可細化到數(shù)目異常或結(jié)構(gòu)異常分型，是臨床診斷染色體病的重要依據(jù)，應(yīng)用價值高。

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（收稿日期：2018-01-24）