微柱凝膠技術(shù)在新生兒ABO溶血病輸血前檢驗(yàn)中的應(yīng)用

鮑瑞玲，王 閃

新生兒溶血病 （hemolytic disease of newborn，HDN）是母嬰間血型不合引起的同族血型免疫反應(yīng)，胎兒遺傳了母體缺少的紅細(xì)胞血型抗原，抗原通過(guò)胎盤(pán)侵入母體后刺激母體產(chǎn)生免疫抗體，抗體通過(guò)胎盤(pán)絨毛膜進(jìn)入胎兒血循環(huán)，產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，破壞紅細(xì)胞引發(fā)溶血，以ABO血型不合最為多見(jiàn)［1］。ABO溶血病新生兒因體內(nèi)紅細(xì)胞被破壞會(huì)伴有不同程度的貧血，嚴(yán)重者可選擇輸血改善癥狀［2］，為避免血型不適加重溶血，出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，輸血前對(duì)患兒進(jìn)行交叉配血檢測(cè)十分重要。因?yàn)镠DN患兒全部次側(cè)交叉配型均不合，只行主側(cè)交叉配血［3］。目前，HDN患兒實(shí)驗(yàn)室血清抗體檢查主要有三項(xiàng)試驗(yàn)，即直接抗人球蛋白試驗(yàn) （direct antiglobulin test，DAT）、游離抗體試驗(yàn)及抗體釋放試驗(yàn)，抗體釋放試驗(yàn)為確診試驗(yàn)［4］。筆者在ABO溶血病患兒輸血前采用微柱凝膠配血法 （micro－column gel test，MGT）進(jìn)行檢驗(yàn)，觀察檢驗(yàn)效果，探究其臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇筆者所在醫(yī)院2017年5月—2018年1月收治的ABO溶血病新生兒40例作為研究對(duì)象，患兒血清膽紅素水平迅速上升，發(fā)生黃疸，黃疸消退后出現(xiàn)嚴(yán)重貧血。其中男26例，女14例；平均日齡（2.5414±0.72） d；平均出生體重（3.21±0.98） kg。

1.2 方法 （1）對(duì)所有母親及嬰兒進(jìn)行血型鑒定。（2） 使用聚凝胺配血法 （manual polybrene test，MPT）進(jìn)行主側(cè)交叉配血：采集患兒血樣，與標(biāo)準(zhǔn)同型紅細(xì)胞血樣分別進(jìn)行配血。取試管1只加入患兒血清或紅細(xì)胞放散液2滴，配型紅細(xì)胞懸液1滴，低離子介質(zhì) （low ionic medium，LIM）0.7 ml混合均勻，再加入聚凝胺溶液2滴混合均勻，用專用離心機(jī)離心10 s（1000 g離心力），倒掉上清液，輕輕搖動(dòng)試管，觀察紅細(xì)胞是否凝集，無(wú)凝集重做。凝集后加入重懸液2滴，混合后觀察結(jié)果。（3）應(yīng)用MGT進(jìn)行主側(cè)交叉配血。采集患兒血樣，準(zhǔn)備微柱凝膠試劑卡做好標(biāo)記，將血樣分別加入凝膠試管中，用專用離心機(jī)離心 5 min （900 r/min，2 mn；1500 r/min，3 min）后取出觀察結(jié)果。（4）對(duì)患兒行DAT、游離抗體試驗(yàn)及抗體釋放試驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 運(yùn)用SPSS 16.0軟件對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 母嬰血型鑒定結(jié)果 患兒血型A型23例（57.50%），B 型 17 例（42.50%），母親均為 O 型，患兒及其母親Rh D血型均為陽(yáng)性。

2.2 交叉配血及三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果 40例患兒采用MGT、MPT進(jìn)行的主側(cè)游離血清及紅細(xì)胞放散液交叉配血共200次。MPT為陽(yáng)性時(shí)MGT均為陽(yáng)性，MGT血清及放散液出現(xiàn)不合次數(shù)明顯多于MPT（P＜0.05），見(jiàn)表 1。

2.3 交叉配血與DAT結(jié)果 DAT陰性時(shí)MPT血清及放散液均未能檢出陽(yáng)性，MGT血清及放散液檢出部分陽(yáng)性，且使用MGT時(shí)DAT陽(yáng)性血清及放散液不合率（86.25%、75.00%）高于 DAT 陰性（65.00%、53.33%）（χ2=11.128、9.564，P＜0.05），見(jiàn)表 2。

3 討論

發(fā)生ABO溶血病時(shí)以母親血型O型，胎兒A、B型多見(jiàn)［5］，血型為O型者具有較多的抗A或抗B免疫球蛋白抗體，因A抗原較B抗原抗原性強(qiáng)，因此胎兒A型者患病概率更大［6］。該研究中血型鑒定結(jié)果顯示，母親均為O型，患兒A型（57.50%）多于B型（42.50%）。為避免加重溶血反應(yīng)，ABO溶血病患兒輸血前需進(jìn)行血型免疫性抗體檢測(cè)。MGT的本質(zhì)是血凝試驗(yàn)，將抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)結(jié)合，抗原抗體在凝膠介質(zhì)中可發(fā)生肉眼可見(jiàn)凝集反應(yīng)［7］。該試驗(yàn)相較于MPT用時(shí)短，操作便捷。有研究顯示，MGT在紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體檢測(cè)中相較于其余幾種不同方式，對(duì)Rh系統(tǒng)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的敏感度最高［8］。該次研究將MGT應(yīng)用于ABO溶血病患兒輸血前檢驗(yàn)亦取得良好的效果。

表1 交叉配血及三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果

表2 交叉配血與DAT結(jié)果

DAT可檢測(cè)出患兒紅細(xì)胞表面的不完全抗體，陽(yáng)性結(jié)果提示患兒紅細(xì)胞被抗體致敏［9］。該次研究三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果中，DAT陽(yáng)性率最低，因?yàn)锳BO溶血病時(shí)，患兒結(jié)合足夠抗體的紅細(xì)胞大部分已被溶解，剩余紅細(xì)胞上結(jié)合抗體數(shù)目較少，不足以產(chǎn)生明顯凝集反應(yīng)。游離抗體試驗(yàn)檢測(cè)的是血清中游離抗體，陽(yáng)性提示存在抗體但不一定致敏［10］。抗體釋放試驗(yàn)是三項(xiàng)試驗(yàn)中敏感度最高的，該次研究中所有抗體釋放試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性。從表1可知MGT血清及放散液出現(xiàn)不合次數(shù)明顯多于MPT，MPT為陽(yáng)性時(shí)MGT均為陽(yáng)性，說(shuō)明MGT敏感度高于MPT。但MGT中仍存在陰性，因?yàn)榛純杭t細(xì)胞抗原表達(dá)強(qiáng)度存在個(gè)體差異，且機(jī)體代謝變化不同，所以對(duì)交叉配血結(jié)果的準(zhǔn)確性造成了干擾［11］。這也說(shuō)明臨床中不能單一以交叉配血陰性為標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)配合其他項(xiàng)檢查綜合考慮最終確定輸血方案。從表2可知，DAT陰性時(shí)MPT血清及放散液均未能檢出陽(yáng)性，MGT血清及放散液檢出部分陽(yáng)性，說(shuō)明MGT在DAT陰性情況下敏感度比MPT高。使用MGT時(shí)DAT陽(yáng)性血清及放散液不合率高于DAT陰性，說(shuō)明MGT結(jié)果受紅細(xì)胞表面的不完全抗體分子數(shù)影響。

綜上所述，MGT在ABO溶血病新生兒輸血前檢驗(yàn)中相較于MPT靈敏度高且具有方便快捷等優(yōu)點(diǎn)，可以為患兒輸血方案的選擇提供參考信息，值得臨床推廣。