高效液相色譜柱后衍生熒光法測定蔬菜中克百威含量

何旭東 李紅梅

摘 要：本文建立了高效液相色譜柱后衍生-熒光法測定蔬菜中克百威含量實驗方法。色譜柱采用安捷倫C18柱（25cm×4.6mm，5μm），以甲醇和水為流動相（80+20，V/V%），柱后衍生后，采用熒光檢測器測定蔬菜中克百威的含量。克百威的線性范圍分別為0.1～1μg/mL，最低檢出限為0.01μg/mL，平均加標回收率為90.8%，相對標準偏差1.1%。該方法適用于蔬菜中克百威含量定量分析。

關鍵詞：克百威；高效液相色譜；熒光檢測器

中圖分類號：S482.3 文獻標識碼：A 文章編號：1671-2064（2018）18-0246-02

克百威[1-5]屬高毒殺蟲劑，是廣譜性殺蟲、殺線蟲劑，具有觸殺和胃毒作用。1986年在我國正式登記使用，而在2002年，我國農業部發布199號公告，禁止在蔬菜中使用克百威農藥，國家標準GB 2763-2017[6]規定蔬菜中克百威限量0.02mg/kg。本文采用乙腈提取蔬菜中克百威，氨基柱凈化定容，柱后衍生高效液相色譜-熒光檢測器定量，適用于蔬菜中克百威含量的測定。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器

克百威標準品（上海安譜科學儀器有限公司）；蔬菜（超市購買）；甲醇（色譜純），美國天地有限公司；實驗用水，超純水；氨基柱（Agela Technologies）。

1200液相色譜-熒光檢測器，安捷倫公司；超純水機，美國Millipore公司；柱后衍生裝置（美國蘭博）。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件選擇

色譜柱：安捷倫C18柱（25cm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇：水=80：20；進樣量10μL；流速0.5mL/min。熒光檢測器：激發波長：330nm，發射波長：465nm。

1.2.2 標準溶液配制

準確稱取克百威標準品10mg，用乙腈溶解后定容至10mL容量瓶中，搖勻，該溶液作為標準儲備溶液。準確移取上述溶液并且用流動相稀釋定容為0.1，0.2，0.4，0.8，1μg/mL標準系列溶液。

1.2.3 樣品制備

取蔬菜、水果樣品可食部分粉碎，制成待測樣。準確稱取粉碎后的25g試樣放于勻漿機中，加入50.0mL乙腈，在勻漿機中高速勻漿2min，經濾紙過濾，濾液40mL收集到裝有5g氯化鈉的100mL具塞量筒中，蓋上塞子，劇烈震蕩1min，在室溫下靜置30min，分層。從具塞量筒中準確吸取10mL乙腈相溶液，80℃水浴氮吹近干，加入2mL甲醇+二氯甲烷（1+99）溶解殘留，氨基柱凈化后過用0.2μm濾膜過濾，待測[7]。

2 結果與討論

2.1 線性關系的考察

吸取克百威標準溶液10μL，高效液相色譜-熒光檢測器檢測，標準曲線圖見圖1。以峰面積為縱坐標，以濃度（μg/mL）為橫坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程：y=56.1212x- 0.30943，R2=0.99996。克百威在0.1～1μg/mL之間線性關系良好。并以信噪比等于3為標準，測得克百威的檢出限為0.01μg/mL。克百威標準曲線譜，如圖1所示。

2.2 精密度試驗

精密吸取克百威標準品溶液10μL重復進樣6次，記錄色譜圖峰面積，并測定峰面積的平均值和相對標準偏差，測定結果見表1。連續6次實驗結果顯示，精密度實驗相對標準偏差為1.70%，本實驗測定克百威精密度良好，具有良好的準確度。

2.3 重復性實驗

取同一樣品，重復測定6次，記錄色譜圖，測定結果見表2，相對標準偏差1.99%，說明用本方法測克百威含量重復性良好。

2.4 回收率實驗

精密稱取樣品六次，準確加入克百威0.5μg，按照1.2.3樣品制備樣品溶液，液相色譜因熒光法檢測后，外標法定量。由表3中可知回收率在86.9%～95.5%之間，平均回收率為90.8%，表明高效液相色譜柱后衍生化熒光法檢測蔬菜中克百威含量具有良好的準確性。

2.5 樣品測定

用電子天平準確稱取6個平行樣品，按1.3.3方法制備樣品溶液，液相色譜柱后衍生熒光法檢測，計算含量，見表4，樣品中克百威平均含量都在0.453μg/mL，相對標準偏差為1.11%。克百威標準品及樣品的色譜圖，如圖2、圖3所示，克百威標準品出峰時間在20.3min左右。

3 結語

本文采用高效液相色譜柱后衍生熒光法對蔬菜中中克百威含量，結果表明：采用C18柱，流動相以甲醇：水=80：20，方法的精密度比較好、回收率較高，表明該法適用于蔬菜中克百威含量的測定。

參考文獻

[1]王素琴，王旭，沈瑩華.液相色譜-串聯質譜法測定蔬菜水果中克百威殘留量[J].農藥科學與管理，2017，（3）：44-48.

[2]楊清華，史玉坤，施逸嵐，等.氣相色譜-質譜聯用測定蔬菜中克百威、三羥基克百威及丁硫克百威殘留[J].中國衛生檢驗雜志，2011，（11）：1539-1541.

[3]馮莎莎，梁春鳳，梁順超，等.二氧化鈦分子印跡膜傳感器光電流法檢測克百威[J].分析測試學報，2017，（5）： 684-688.

[4]何方洋，馮才偉，杜美紅，等.蔬菜、茶葉中克百威酶聯免疫檢測方法的建立[J].江蘇農業科學》，2017，（20）：213-216.

[5]楊挺，呂燕，陳國，等.液相色譜串聯質譜法快速測定動物組織中克百威及其代謝產物殘留量[J].肉類研究，2016，（9）：23-28.

[6]中國人民共和國國家衛生和計劃生育委員會.GB 2763-2016食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量[S].

[7]中國人民共和國農業部.NY/T 761-2008蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定[S].