UHPLC測定不同產地芍藥根的有效成分

（陜西省西安市陜西服裝工程學院 石 鈺）

我國芍藥種類以白芍藥與赤芍藥為主，它們被主要種植在四川、浙江、安徽等各省。對不同產地芍藥的芍藥根有效成分及質量進行評價能夠了解芍藥根的質量差異，而所采用的試驗測定方法主要是UHPLC測定。

一、關于UHPLC測定試驗

UHPLC測定試驗的全稱是UHPLC-DAD技術，它是一種建立在芍藥苷、芍藥根、芍藥內酯苷、沒食子酸等8種各大有效成分基礎之上的吸收波長檢測方法。該試驗主要針對產自于我國四川、浙江、安徽等各省的白芍藥進行樣品試驗，試驗樣品數量高達60份以上，專門測定芍藥根中的8種有效成分。另外，還會對不同生長年限的芍藥根質量進行測定試驗分析，以此為我國白芍藥主產地建立更大規模種植基地提供合理有效的科學依據。

二、不同產地白芍藥根的UHPLC測定試驗應用分析

本文將針對四川、浙江這兩大白芍藥產地的白芍藥根進行UHPLC測定試驗，專門對兩省白芍藥根中的各種有效成分與質量進行對比分析。

（一）試驗儀器

在針對白芍藥根的UHPLC測定試驗應用中主要包括了超高效液相色譜儀、四元梯度泵、自動進樣儀、柱溫箱、電子天平以及雙頻數控超聲波清洗儀等等。

（二）藥品與試劑

UHPLC試驗中所采用藥品與試劑包括了芍藥根、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍藥苷等等。藥材方面結合四川、浙江兩省的芍藥根藥材樣品首先進行根莖剪除處理，然后快速沖洗除去其中泥沙，最后烘干備用。

（三）試驗方法

1色譜條件試驗：在試驗過程中首先要明確一點色譜條件，其色譜柱應該為100mm x 4.5mm x 2.8μm，另外它的流動相選擇了濃度為0.05%的乙腈磷酸溶液。對芍藥根進行7分鐘左右的梯度洗脫，保持柱溫在30℃左右，且洗脫液體流速保持在1.0mL/min左右，如此測量其進樣量應該在3μL左右，測量檢測波長應該為250nm。此時芍藥根中的氧化芍藥苷含量應該為258nm（四川）和269nm（浙江），丹皮酚含量分別為274nm和291nm，兒茶素含量分別為280nm和282nm。在普通色譜條件下，兩省的芍藥根樣品中8種待測有效成分的分離度均保持良好。

2溶液制備線性試驗：UHPLC試驗中還要對樣品溶液制備線性范圍進行考察，主要是對兩省的芍藥根樣品在量瓶中加入甲醇到制定刻度位置（分別為 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 刻度）然后得出的混合對照品溶液濃度（前為四川、后為浙江）分別為122/128、96/98、60/70、80/78、303.60/350.21、51.28/47.29μg/mL。在甲醇定容到刻度位置后搖勻處理，在經過0.24μm的微孔濾膜過濾以后獲得上述6個濃度梯度的最終混合對照品溶液。根據對比試驗結果表明，兩省芍藥根中的8種有效成分指標均在合理濃度范圍內，且它們的峰面積線性關系表現均相對良好。

3精密度試驗：除上述試驗外，還對兩省的芍藥根進行了精密度試驗，即取用兩省各一份供試品溶液，連續進行6次精密度試驗，專門測定兩省芍藥根中的有效成分峰面積。就以沒食子酸為例，四川省芍藥根中的沒食子酸峰面積達到0.64%，而浙江省芍藥根中的沒食子酸峰面積達到0.77%，這表明試驗用儀器精密度相對良好，準確測量出兩省芍藥根的峰面積。

4含量測定試驗：最后對兩省芍藥根進行有效成分含量測定試驗，其中每一份芍藥根的粉末含量取2份，并按照前文所提到的色譜條件測定方法進行測定，再基于回歸方程計算出兩省芍藥根中8種有效成分的供試品溶液含量濃度（μg/mL），另外還有藥材粉末含量（mg/g）。最后計算兩份平行芍藥根樣品中的藥材粉末含水量。以丹皮酚為例，四川省芍藥根的丹皮酚含量在0.0486mg/g，而浙江芍藥根的丹皮酚含量為0.0432mg/g，兩省（四川、浙江）的芍藥根樣品有效成分PCA綜合得分分別為0.4535和0.0182[1]。

（四）試驗結果分析

最后在兩省芍藥根的質量評價中，專門挑選干燥待測樣品進行測量。其中四川產的芍藥根中沒食子算的葡萄糖含量相對較高，而浙江省產的芍藥根中兒茶素含量較高。如果單純以芍藥苷作為基礎指標進行對比分析，可能難以評價兩省芍藥根的正確質量，因此還要結合兩省芍藥根中的8種有效成分含量進行主成分綜合分析，最終得出綜合質量評價結果[2]。

總結：

在色譜條件優化前提下，本文專門建立了UHPLC測定試驗，對四川省、浙江省兩省的芍藥根中8種不同有效成分指標進行測定，該測定方法分析時間較短且重復性良好，結果準確，非常適用于對白芍藥的質量及有效成分檢測，對兩省的芍藥生產管理成本優化與采收年限確定（3～4年收）具有利好參考作用。