Nrf2/ARE信號通路與多發性硬化預后的相關性研究

柴競艷 吳向斌 夏忠斌 鮑兵 陳志穎

[摘要] 目的 探討Nrf2/ARE信號通路與多發性硬化預后的相關性研究。 方法 將我院2014年6月～2017年6月收治的40例多發性硬化癥患者作為研究對象，隨機分為觀察1組、觀察2組，各20例。選擇同期我院20例健康體檢者作為對照組。觀察1組給予糖皮質激素聯合常規營養神經治療，觀察2組采用單純營養神經治療。采用流式細胞儀檢測三組入組Nrf2、HO-1、TNF-α表達水平，分析ADL及神經功能評分。 結果 隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組Nrf2、HO-1表達水平、ADL評分高于觀察2組，而其TNF-α表達水平、神經功能評分低于觀察2組（P<0.05），觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達水平、ADL評分高于治療前，而其TNF-α表達水平、神經功能評分低于治療前（P<0.05），觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達水平高于對照組（P<0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組、觀察2組ADL評分低于對照組，神經功能評分高于對照組（P<0.05）。 結論 糖皮質激素聯合常規營養神經改善多發性硬化癥患者神經功能損傷，其可能通過上調Nrf2、HO-1表達，下調TNF-α表達而發揮作用。

[關鍵詞] Nrf2/ARE;信號通路;多發性硬化;預后;相關性

[中圖分類號] R744.5? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2019）07-0011-03

[Abstract] Objective To explore the correlation between Nrf2/ARE signaling pathway and prognosis of multiple sclerosis. Methods Forty patients with multiple sclerosis admitted to our hospital from June 2014 to June 2017 were randomly divided into observation group 1 and observation group 2， 20 cases in each group. Twenty healthy subjects in our hospital were selected as the control group. Observation group 1 was treated with glucocorticoid combined with conventional nutritional nerve therapy， and observation group 2 was treated with simple nutrition nerve therapy. Flow cytometry was used to detect the expression levels of Nrf2， HO-1 and TNF-α in the three groups， and the ADL and neurological function scores were analyzed. Results At 6 months and 12 months of follow-up， the expression levels of Nrf2 and HO-1 and ADL scores in observation group 1 were higher than those in observation group 2， while the expression of TNF-α and neurological function scores were lower than those in observation group 2（P<0.05）. The expression levels of Nrf2 and HO-1 in the two groups were higher than those before treatment， while the expression levels of TNF-α and neurological function were lower than those before treatment（P<0.05）. The expression levels of Nrf2， HO-1 and TNF-α in observation group 1 and observation group 2 were higher than those in the control group （P<0.05）. At 6 months and 12 months of follow-up， the ADL scores of observation group 1 and observation group 2 were lower than those of the control group， and the neurological function score was higher than that of the control group（P<0.05）. Conclusion Glucocorticoid combined with conventional neurotrophic therapy can improve neurological impairment in patients with multiple sclerosis. The mechanism may be up-regulation of Nrf2 and HO-1 expression and down-regulation of TNF-α expression.

[Key words] Nrf2/ARE; Signaling pathway; Multiple sclerosis; Prognosis; Correlation

多發性硬化癥是臨床上較為常見的神經系統疾病之一，其是指累及中樞神經系統白質的炎癥性自身免疫性脫髓鞘疾病[1-3]，臨床上多采用非特異性的免疫治療方法，如糖皮質激素、免疫抑制劑等治療措施。相關病理研究顯示[4]，多發性硬化癥患者常伴有一定程度的少突膠質細胞及軸突的損傷，而炎癥趨化因子等炎癥介質參與疾病的發展。中樞神經系統含有一系列抗氧化酶來調節受到氧化損傷的細胞，轉錄因子Nrf2調控這些保護細胞減輕損傷的抗氧化酶的表達[5]。本研究主要探討Nrf2/ARE信號通路與多發性硬化預后的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將我院2014年6月～2017年6月收治的40例多發性硬化癥患者作為研究對象，隨機分為觀察1組、觀察2組，各20例。選擇同期我院20例健康體檢者作為對照組。觀察1組，男12例，女8例;年齡42～76歲，平均（52.5±4.6）歲;觀察2組，男11例，女9例;年齡41～77歲，平均（52.6±4.5）歲;對照組，男10例，女10例;年齡40～75歲，平均（52.7±4.5）歲;患者均簽署研究知情同意書;本研究經醫院倫理委員會批準;三組在性別、年齡等方面比較，無統計學差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

觀察1組采用甲基強的松（批準文號：H20080284，廠家：Pfizer Manufacturing Belgium NV）500 mg溶于5%葡萄糖注射液500 mL中，靜脈輸液，每日1次，按2014版中國《多發性硬化診斷和治療的中國專家共識》，500 mg使用3 d，250 mg使用3 d，120 mg使用3 d，改成60 mg持續口服，后續緩慢減量。同時給予神經節苷脂（國藥準字H20066833，長春翔通藥業有限公司）20 mg+維生素B族及常規治療靜脈輸液，每日1次，連續應用14 d為1個療程。觀察2組則單純給予神經節苷脂+維生素B族常規治療，劑量及療程同觀察1組。

1.3 觀察指標

記錄三組入組患者血液中Nrf2、HO-1、TNF-α表達水平，并分析其日常生活能力水平（ADL）及神經功能評分;采用流式細胞儀檢測Nrf2、HO-1、TNF-α表達水平，采用ADL評價其行為生活能力情況，其總評分為100分，得分越高，生活能力越高[6]，采用EDSS量表評價患者神經功能缺損情況[7]，每一項分為5～6個等級，0～10分，得分越高，神經功能缺失越嚴重。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行數據統計分析，計量資料用（x±s）表示;多組間計量資料比較采用方差分析，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組Nrf2、HO-1、TNF-α的表達水平比較

治療前觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達水平低于對照組，而其TNF-α表達水平高于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）;治療前觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達水平比較，無明顯差異（P>0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組Nrf2、HO-1表達水平高于觀察2組，而其TNF-α表達水平低于觀察2組，具有統計學差異（P<0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達水平高于治療前，而其TNF-α表達水平低于治療前，具有統計學差異（P<0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達水平高于對照組，具有統計學差異（P<0.05）;見表1。

2.2 三組ADL、神經功能評分比較

治療前觀察1組、觀察2組ADL評分低于對照組，而其神經功能評分高于對照組，具有統計學差異（P<0.05）;治療前觀察1組、觀察2組ADL、神經功能評分無明顯差異（P>0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組、觀察2組ADL評分高于治療前，神經功能評分低于治療前，具有統計學差異（P<0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組ADL評分高于觀察2組，神經功能評分低于觀察2組，具有統計學差異（P<0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組、觀察2組ADL評分低于對照組，神經功能評分高于對照組，具有統計學差異（P<0.05）;見表2。

3 討論

多發性硬化癥患者發病原因較為復雜，治療后易反復發作，相關研究顯示[8-9]，多發性硬化癥患者的致病因素多為自身免疫細胞的功能障礙，以往多采用糖皮質激素、免疫抑制劑及營養神經細胞等治療該疾病。甲基強的松龍可顯著抑制炎癥反應，調節免疫功能，抑制T淋巴細胞及B淋巴細胞，而控制白質炎癥脫髓鞘是當今MS免疫治療的主要任務。

本研究主要觀察Nrf2/ARE信號通路與多發性硬化預后的相關性。其結果顯示：治療前觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達水平、ADL評分低于對照組，而其TNF-α表達水平、神經功能評分高于對照組（P<0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組Nrf2、HO-1表達水平、ADL評分高于觀察2組，而其TNF-α表達水平、神經功能評分低于觀察2組（P<0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達水平、ADL評分高于治療前，而其TNF-α表達水平、神經功能評分低于治療前（P<0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達水平高于對照組（P<0.05）;隨訪6個月、隨訪12個月，觀察1組、觀察2組ADL評分低于對照組，神經功能評分高于對照組（P<0.05）;因此，糖皮質激素聯合常規營養神經改善多發性硬化癥患者神經功能損傷，其可能通過上調Nrf2、HO-1表達，下調TNF-α表達而發揮作用。TNF-α是多發性硬化損傷的潛在發病機制，單核細胞與腦血管內皮細胞相互作用產生活性氧[10-11]，細胞骨架重排，血腦屏障破壞，誘導了巨噬細胞吞噬髓鞘，導致少突膠質細胞、神經元與軸突損傷。當細胞存在氧化應激時，Nrf2轉位入核，激活抗氧化反應原件（ARE）所介導的抗氧化酶表達。迄今為止，Nrf2-ARE通路介導的解毒酶和抗氧化酶超過200個，其中包括超氧化物歧化酶1、超氧化物歧化酶2等[12]。Johnson DA等[13]通過Nrf2基因敲除小鼠研究證明：Nrf2的缺失可以使EAE病情惡化，表現為神經功能評分增多與發病率的增加，提示激活Nrf2通路可以減輕自身免疫性疾病。Nrf2/HO-1途徑是調節機體抗氧化應激反應的重要信號通路。Nrf2屬于亮氨酸拉鏈家族中重要轉錄因子，多存在細胞質內，與Keap1相結合而處于失活狀態，抗氧化反應元件調控的抗氧化基因 HO-1可激活并表達增加，促進氧化還原反應紊亂恢復至平衡狀態，減輕自由基損傷[14]。本研究發現，Nrf2/HO-1高表達、TNF-α低表達，可有助于改善多發性硬化癥患者，中樞神經細胞損傷后，糖皮質激素及營養神經細胞治療后，使腦組織Nrf2基因表達上調、激活并轉位至細胞核，激活 Nrf2、HO-1途徑，從而激動下游抗氧化蛋白 HO-1的表達，增強機體抗氧化應激的損傷。

綜上所述，糖皮質激素聯合常規營養神經改善多發性硬化癥患者神經功能損傷，可能通過上調Nrf2、HO-1表達、下調TNF-α表達而發揮作用。

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（收稿日期：2018-12-11）