成都雙流地區慢性萎縮性胃炎相關幽門螺桿菌的耐藥分析研究

賀新國

【摘 要】 目的： 探討成都市雙流地區慢性萎縮性胃炎患者幽門螺桿菌（Hp）的耐藥情況及Hp細胞毒素相關基因A（cagA）與萎縮性胃炎關系。方法：對200株臨床分離菌株，進行培養及紙片擴散法藥敏試驗，采用PCR法檢測Hp的cagA基因。結果：成都雙流地區Hp對阿莫西林、呋喃唑酮、甲硝唑、替硝唑、克拉霉素的耐藥率分別為12.5%、1%、65%、10%和14%，HP菌株cagA基因的陽性率為74.5%。結論：本地區阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、替硝唑可作為根除Hp的一線藥物。本地區Hp感染菌株以cagA基因型為主，該基因型Hp感染與萎縮性胃炎發生密切相關。

【關鍵詞】 幽門螺桿菌;慢性萎縮性胃炎;耐藥性;cagA基因

【中圖分類號】R573.3+ 2【文獻標志碼】A【文章編號】1005-0019（2019）09-018-01

Abstract Objective： TO investigate the resistance profile of Helicobacter pylori associated chronic atrophic gastritis and the relationship between cagA gene.Methods： A total of 200 H.pylori isolates were cultured and tested for cagA gene by PCR.The susceptibility testing was done by disk diffusion technique.Results ：The percentage of H.pylori isolates resistant to amoxicillin， furazolidone， metronidazole， tindazole， clarithromycin was 12.5%、1%、65%、10%、14%，respectively，In Shuangliu ，Chengdu. The prevalence of cagA gene in H. pylori was 74.5%.Conclusions ：Amoxicillin， furazolidone， clarithromycin ，tindazole are the first-choice therapy for H. pylori.The H. pylori infection in Shuangliu mostly due to cagA gene which is related to chronic atrophic gastritis.

Key words：

Helicobacter pylori; chronic atrophic gastritis; Resitance; cagA gene

慢性胃炎主要由幽門螺桿菌（Helicobacter .pylori，Hp）感染所引起，感染后幾乎均存在慢性活動性胃炎（ chronic active gastritis），亦即Hp胃炎[1-2]，感染Hp后少有自發清除，因此慢性胃炎長期持續存在，部分發展為慢性萎縮性胃炎，發生胃癌的危險明顯高于普通人群[3]。近年報道，我國Hp對多種抗生素耐藥呈上升趨勢[4]，耐藥率存在地區差異。Hp基因的多態性有地域差異，不同的Hp基因型可能導致不同的臨床結果[5]，而其中細胞毒素相關基因A（cytotoxin associated gene A， cagA）是Hp重要的毒力因子，有文獻報道cagA參與了萎縮性胃炎的發生發展[6]，加重胃部粘膜萎縮[7]。本次研究通過對本地區萎縮性胃炎患者Hp耐藥檢測和測定Hp菌株的cagA基因，來指導臨床用藥。

1 材料與方法

1.1 材料

200株Hp來自2016年06月-2017年12月成都市雙流區中醫醫院和成都市雙流區第二人民醫院胃鏡室，從慢性萎縮性胃炎患者胃竇粘膜分離得到。幽門螺桿菌培養基、布氏肉湯、微需氧袋（青島海博生物），酪蛋白綿羊血平皿 （成都精博瑞生物科技有限公司），彎曲桿菌鑒定板條（法國生物梅里埃公司）。 阿莫西林、呋喃唑酮、甲硝唑藥敏紙片（英國OXOID公司），替硝唑、克拉霉素藥敏紙片（北京九州天瑞科技有限公司）。細菌基因組DNA提取試劑盒（杭州昊鑫生物科技股份有限公司），PCR試劑盒（天根生化科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 Hp的培養及檢測

將活檢取得胃竇部黏膜行快速尿素酶試驗，強陽性標本做Hp培養。將標本接種于Hp培養基，置于微需氧袋37℃，培養72小時，按照《厭氧菌和微需氧菌感染與實驗診斷》[8]中Hp鑒定方法。經染色鏡檢以及尿素酶陽性的菌株通過彎曲桿菌鑒定板條鑒定，于布氏肉湯-80℃保存備用。

1.2.2 藥敏試驗

采用紙片擴散法，將細菌調制成6×107CFU/mL的菌懸液，涂布于酪蛋白綿羊血平皿，貼上藥敏紙片并放入微需氧袋，37℃，培養3d后，測量抑菌圈直徑。結果判定按照中國食品藥品檢定研究院制定的抗菌藥物藥敏試驗判定標準確定5種抗菌藥藥敏試驗判斷標準。

1.2.3 Hp DN A提取和PCR擴增

細菌基因組DNA提取試劑盒提取HpDNA。PCR擴增200株cagA基因，PCR引物序列： p1 5′-AAA GGA GTC GGC GGT TTC A-3′，p2 5′-CCT GCT TGA TTT GCC TCA TCA-3′，擴增片段長度為298bp。引物由成都博奧獨立醫學實驗室合成。PCR反應體系50μL。反應條件： 95℃5min，60℃1min， 72℃1min，共32個循環， 最后72℃延伸5min。PCR產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳觀察片段大小。HpN CTC11637（第三軍醫大學藥劑學教研室提供）作為陽性對照。若在298bp處出現橙黃色條帶則為cagA陽性。

2 結果

2.1 藥敏結果

2.2 PCR擴增結果

200株Hp PCR法共檢測出149株含cagA基因，檢出率為74.5%。具有298bp特異條帶者為cagA陽性。

3 討論

近年研究表明，我國目前慢性萎縮性胃炎的發病率較高，有上消化道癥狀患者，經胃鏡檢查慢性萎縮性胃炎比例高達23.2% ，胃竇病理檢查提示萎縮者占35.1%，高于內鏡提示萎縮的比例，同時胃竇的Hp 陽性率為33.5%[9]。成都雙流地區經濟和醫療較發達，慢性萎縮性胃炎患病率高，Hp耐藥現象常見。反復上腹痛，飽脹，反酸，納差等癥狀影響患者的生活質量，增加患者心理負擔。通過對本地區萎縮性胃炎Hp進行藥敏試驗、基因檢測，可為患者提供精準治療，進一步提高Hp根治率，減少濫用抗生素，降低胃癌的發生。

本次研究對Hp進行5種抗菌藥物藥敏檢測，結果顯示Hp對阿莫西林、呋喃唑酮、甲硝唑、替硝唑、克拉霉素的耐藥率分別為12.5%、1%、65%、10%和14%。甲硝唑具有較高的耐藥率，與重慶地區的91. 67%[10]、國內其他地區40%-70%基本一致，不建議本地區使用，而替硝唑作為甲硝唑同類的替代藥物耐藥率低。阿莫西林耐藥率低，抗Hp作用強，可作為根除Hp的一線治療。目前我國Hp對克拉霉素的耐藥呈上升趨勢，對于在高耐藥率地區（ 如克拉霉素耐藥率> 15%[11]），國內共識建議使用克拉霉素方案前行藥敏試驗。本地區克拉霉素方案可使用。呋喃唑酮耐藥率低，尚無需考慮是否耐藥。使用PCR方法檢測200株Hp cagA基因，結果cagA基因的陽性率為74.5%，我們認為本地區Hp感染以cagA基因陽性菌株為主，該基因型Hp感染與萎縮性胃炎發生密切相關。因此對于本地區Hp相關萎縮性胃炎，予以積極的抗Hp治療，可能使患者獲益更大。

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