魚金注射液對大鼠的亞急性肝腎毒性研究

姜嫄 張長海

【摘 要】目的：比較不同劑量魚金注射液對大鼠的亞急性肝腎毒性。方法：清潔級SD大鼠60只隨機分為3組，每組雌雄各10只，分別為正常組、魚金注射液低劑量組（2mL/kg）、魚金注射液高劑量組（4 mL/kg），分別每日灌胃給予生理鹽水2mL/kg、魚金注射液2mL/kg、4mL/kg，連續5周。于末次給藥后摘眼球采集大鼠血液，處死，取完整肝臟及腎臟，稱取肝臟、腎臟濕重，計算肝臟指數和腎臟指數，檢測大鼠血清谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）含量，HE染色觀察大鼠肝腎組織病理變化。結果：與正常組比較，魚金注射液低、高劑量組體重、肝臟指數、腎臟指數和血清ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr均未見顯著變化（P>0.05）;光鏡下顯示，魚金注射液低、高劑量組肝腎病理損傷與正常組無明顯差異。結論：給予大鼠魚金注射液5周并未引發機體肝腎組織的明顯毒性反應。

【關鍵詞】魚金注射液;亞急性肝腎毒性;實驗研究

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】A【文章編號】1007-8517（2019）5-0007-07

魚金注射液是一種純中藥注射劑，由魚腥草、金銀花提取制成，現有質量標準采用GC色譜法測定甲基正壬酮。魚腥草始載于《名醫別錄》，為三白草科植物蕺菜（Houttuynia cordata Tunb）的鮮全草或干燥地上部分，性微寒、味辛，歸肺經，具有清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋的功效，用于肺癰吐膿、痰熱喘咳、熱痢、癰腫瘡毒等癥[1] 。其主要活性成分為揮發油和黃酮類化合物，尚含生物堿、脂肪酸、有機酸、蕺菜堿、鉀鹽等。現代藥理研究[2-7]表明，魚腥草具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗癌、抗氧化、抗過敏、鎮咳、增強機體免疫力等藥理作用。現部分地區已對其進行人工培植，以四川、貴州、云南等地較為廣泛。金銀花（Lonicera Japonica Thunb）又名忍冬花，具有悠久的用藥歷史，是忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬植物干燥花蕾或帶初開的花[1]。“忍冬”始載于《名醫別錄》，初始以莖葉入藥，李時珍所著《本草綱目》載：“莖葉及花，功用皆同”。自此，花與藤葉以“忍冬”或“金銀花”為名，同作一藥使用，當代主以花入藥。金銀花性寒，味甘，入肺、心、胃經，具有清熱解毒、抗炎、補虛療風的功效，主治脹滿下疾、溫病發熱、熱毒癰瘍，丹毒和腫瘤等癥[1，8]。從金銀花中分離鑒定的化學成分類型較多，主要有揮發油類、有機酸類、黃酮類、三萜皂苷類、環烯醚萜類等[9]。藥理研究[10]表明，金銀花具有抗菌、抗病毒、抗炎、保肝利膽、降血糖、降血脂、增強免疫、抗氧化、抗生育、止血等作用。

魚金注射液被廣泛地應用于臨床治療呼吸、消化、泌尿生殖等系統的感染性疾病，取得了較好的效果[11]。有研究[12]選取128例支氣管肺炎患者為研究對象，使用中藥魚金注射液聯合抗生素治療，臨床療效顯著。另有學者研究發現山海丹牌魚金注射液口腔霧化給藥具有抗炎、解熱及抗菌作用[13]。研究以小兒支氣管肺炎為研究對象，發現魚金注射液用于霧化吸入對發熱、咳嗽、氣急等癥狀療效顯著，具有起效快、退熱作用好、且全身副作用小等特點[14]。目前，尚未出現專門針對魚金注射液毒副作用、毒性物質基礎和產生毒副作用的劑量范圍的相關研究。本實驗以大鼠為研究對象，觀察2mL/kg、4mL/kg魚金注射液較長時間應用對機體肝、腎功能的影響，為魚金注射液臨床使用劑量、時間等提供相應實驗依據。

1 儀器與材料

1.1 動物 SD大鼠60只，雌雄各半，（200±20）g，清潔級，購自重慶騰鑫生物技術有限公司，動物許可證號SCXK（軍）2012-0011。

1.2 藥品 魚金注射液（批號：17060621E，朗致集團萬榮藥業有限公司）。

1.3 試劑 采血針（批號：170905，南昌市贛達醫療器械有限公司）;采血管（批號：180529，南昌市贛達醫療器械有限公司）;高效切片石蠟（批號：20180118，上海華靈康復器械廠）;多聚甲醛（批號：20180112，國藥集團化學試劑有限公司）;PBS磷酸鹽緩沖液（批號：ZLI-9062，北京中杉金橋生物技術有限公司）;無水乙醇（AR級，批號：GB678-90，江蘇海興化工有限公司）;二甲苯（AR級，批號：20180110，天津致遠化學試劑有限公司）;蘇木素染液（批號：BA-4097，珠海貝索生物技術有限公司）;伊紅染液（批號：BA-4099，珠海貝索生物技術有限公司）;鹽酸（AR級，批號：20180118，成都市科龍化工試劑廠）;中性樹膠（批號：20171009，國藥集團化學試劑有限公司）;重鉻酸鉀（AR級，批號：20180120，成都市科龍化工試劑廠）;濃硫酸：（AR級，批號：20180119，成都市科龍化工試劑廠）;組織包埋盒（批號：31050102W，江蘇世泰實驗器材有限公司）。

1.4 儀器 5800全自動生化儀（貝克曼）;R35刀片（日本羽毛安全剃刀株式會社）;轉輪式切片機（德國徠卡-2016）;TSJ-Ⅱ型全自動封閉式組織脫水機（常州市中威電子儀器有限公司）;BMJ-Ⅲ型包埋機（常州郊區中威電子儀器廠）;PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀（常州市中威電子儀器有限公司）;BA400Digital數碼三目攝像顯微鏡（麥克奧迪實業集團有限公司）;Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件（美國Media Cybernetics公司）。

2 方法

2.1 動物分組和給藥 60只清潔級SD大鼠隨機分為3組，每組20只，雌雄各半。正常組、魚金注射液低劑量組（2mL/kg）、魚金注射液高劑量組（4mL/kg），分別灌胃給予生理鹽水2mL/kg、魚金注射液2mL/kg、魚金注射液4mL/kg，每天灌胃給藥1次，連續給藥5周。

2.2 鼠肝臟指數和腎臟指數 取大鼠新鮮肝臟、腎臟，使用生理鹽水將其沖洗干凈，分別稱取肝臟和腎臟濕重，計算肝臟指數和腎臟指數。肝臟指數=肝重（mg）/體重（g），腎臟指數=腎重（mg）/體重（g）。

2.3 大鼠肝、腎功能檢測 摘眼球采集大鼠血液，以2500rpm/min，4 ℃離心15min后吸取血清，全自動生化儀檢測大鼠血清谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）含量。

2.4 大鼠肝臟和腎臟病理檢測 取大鼠新鮮肝腎組織適當大小迅速放入4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋、切片，HE染色，采用麥克奧迪實業集團有限公司生產的BA200Digital數碼三目攝像顯微攝像系統對切片進行圖像采集，每張切片先于40倍下觀察全部組織，觀察大體病變，選擇要觀察的區域采集100倍、400倍圖片，觀察具體病變。

2.5 統計學處理 實驗結果以（x±s）表示，采用SPSS18.0統計軟件t檢驗分析，P<0.05表示有統計學差異。

3 結果

3.1 大鼠肝、腎臟器指數檢測結果 與正常組比較，魚金注射液低、高劑量組雄性與雌性大鼠體重及肝臟指數、腎臟指數差異均無統計學意義（P>0.05）。見表1～2。

3.2 大鼠血清肝、腎功能檢測結果 與正常組比較，魚金注射液低高劑量組雄性與雌性大鼠肝腎功能檢測指標ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr差異均無統計學意義（P>0.05）。見表3～5。

3.3 大鼠肝組織病理檢測結果 正常組肝臟：肝臟被膜完整，肝細胞分葉不明顯，肝索排列紊亂，少量肝細胞顆粒或空泡變性，胞質染色不均，可見數量不等的細小顆粒物質或大小不等的空泡;肝竇內未見明顯的炎細胞浸潤;門管區結構較為完整，未見明顯的纖維組織增生及炎細胞浸潤;其他亦未見明顯病理變化。魚金注射液低高劑量組肝臟組織鏡下所見與正常組比較無明顯差異。見圖1、圖2。

3.4 大鼠腎組織病理檢測結果 正常組腎臟組織被膜完整，皮質和髓質分界清晰，腎小球結構完整清晰，未見毛細血管基底增厚及炎性滲出;部分腎小管可見上皮細胞變性，胞質染色不均;間質內未見炎細胞浸潤及纖維組織增生;其他亦未見明顯病理變化。魚金注射液低高劑量組腎臟組織鏡下所見與正常組比較無明顯差異。見圖3、圖4。

4 討論

魚金注射液是一種新型中藥注射劑，具有清熱解毒、疏散風寒之功效，療效可靠。臨床應用中，其多采用靜脈滴注、穴位注射或霧化吸入等方式，可用于治療急性上呼吸道感染、急性支氣管炎等，有“中藥中的抗生素”之稱。但由于中藥制??? 劑藥物純度一直存在爭議，因此目前在臨床的推廣運用上有一定阻礙。目前，尚未出現專門針對魚金注射液毒副作用、毒性物質基礎和產生毒副作用的劑量范圍的相關研究。本實驗分別對大鼠灌胃給予魚金注射液低劑量（2mL/kg/d）、高劑量（4mL/kg/d），分別相當于人體推薦劑量的 50、100 倍，持續5周，就肝腎功能血清指標谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）含量，肝臟指數、腎臟指數及肝腎HE染色組織病理改變，探討其對肝、腎組織的亞急性毒性。結果顯示，魚金注射液低劑量組、魚金注射液高劑量組血清ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr水平，肝臟指數、腎臟指數及肝腎組織病理改變與正常組比較差異無統計學意義（P>0.05），表明連續較長時間（5周）應用大劑量魚金注射液（臨床等效劑量的50、100倍）無顯著肝腎毒性，其安全性較佳。本研究部分填補了魚金注射液藥理毒理內容，為其在臨床上的推廣運用提供了理論基礎。

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（收稿日期：2019-01-08 編輯：劉斌）