褪黑素通過Müller細胞保護糖尿病視網膜神經節細胞的機制△

張俏 劉文強 左中夫 劉學政

糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病嚴重的并發癥之一，是成年人失明的主要原因[1-2]。DR發病機制復雜，涉及血管、炎癥和神經等多種因素。Müller細胞是視網膜中數量最多的膠質細胞，對于維持視網膜微環境穩態和正常生理功能具有重要作用。糖尿病時視網膜Müller細胞氧化應激反應明顯，參與并促進了DR的發展[3]。褪黑素具有強大的抗氧化應激作用，本研究擬觀察褪黑素對糖尿病視網膜Müller細胞的影響，以了解其在DR防治中的作用。期望本研究能進一步揭示DR的發病機制，為DR的臨床治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及主要試劑6月齡清潔級SD大鼠54只，雌雄不限，體質量200～230 g，由錦州醫科大學實驗動物中心提供。褪黑素、鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)、谷氨酸標準品(Sigma公司，美國)，丙二醛(malondialdehyde，MDA)、還原型谷胱甘肽(reduced glutathione，GSH)及免疫組織化學試劑盒(上海碧云天生物技術有限公司)，神經膠質酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)及谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase，GS)抗體(Abcam公司，美國)，化學發光試劑盒(上海碩嘉生物科技有限公司)。

1.2 動物模型的制備及分組處理參照文獻[4]配制溶液，首先以無水乙醇配制10 g·L-1的褪黑素溶液，待褪黑素充分溶解后，加入生理鹽水10倍稀釋，使褪黑素終濃度為1 g·L-1。制備pH 4.5、濃度0.1 mol·L-1的檸檬酸緩沖液，用于配制2 g·L-1的STZ溶液。使用隨機數字表法將實驗動物分為對照組、糖尿病組和褪黑素治療組，每組18只，其中糖尿病組和褪黑素治療組大鼠建立糖尿病模型，具體方法為：大鼠按60 mg·kg-1的劑量腹腔注射STZ溶液，48 h后測尾靜脈血糖，將血糖濃度大于16.7 mmol·L-1作為糖尿病模型建立成功的標準。……