不同方法干燥紫蘇梗迷迭香酸含量HPLC法檢測分析

劉佳隴　王勝升　李虹

摘要 ? ?為測定不同方法干燥處理的紫蘇梗中迷迭香酸的含量，確定最適紫蘇梗干燥方法，采用HPLC法測定迷迭香酸的含量，即色譜柱為Hypersil-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.1%甲酸水溶液（38∶62），流速為1.0 mL/min，檢測波長為330 nm，柱溫為25 ℃。結(jié)果表明，一步干燥得到的紫蘇梗迷迭香酸含量普遍遠(yuǎn)高于二步干燥得到的紫蘇梗;經(jīng)陽光棚下晾干的紫蘇梗迷迭香酸含量最高，曬干和45 ℃烘干的紫蘇梗迷迭香含量稍低。由此說明，紫蘇梗產(chǎn)地初加工應(yīng)一步干燥且以陰干最佳，直接晾曬與低溫烘干亦可。

關(guān)鍵詞 ? ?中藥材;紫蘇梗;干燥方法;迷迭香酸;高效液相色譜

中圖分類號 ? ?R931.4 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼 ? ?A

文章編號 ? 1007-5739（2019）13-0202-02 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）

Determination ?of ?Rosmarinic ?Acid ?Content ?in ?Caulis ?Perillae ?frutescens ?Dried ?by ?Different ?Methods ?by ?HPLC

LIU Jia-long ? ?WANG Sheng-sheng ? ?LI Hong

（Jiangsu Longfengge Traditional Chinese Medicine Planting Co.，Ltd.，Yangtze River Pharmaceutical Group，Taizhou Jiangsu 225300）

Abstract ? ?In order to determine the content of rosmarinic acid in caulis Perilla frutescens with different drying methods，and find out the optimum drying method for caulis Perilla frutescens，the HPLC method was used with a Hypersil-C18 analytical column（250 mm×4.6 mm，5 μm），the column temperature was 25 ℃. An isocratic elution of methanol（A）and methanoic acid solution（B）（volume ratio of 38∶62） was applied，the flow rate was 1.0 mL/min，and the detector wavelength was set at 330 nm. The results showed that the rosmarinic acid content was much higher in caulis Perilla frutescens dried through one step than two step. The rosmarinic acid content of caulis Perilla frutescens dried in sunshine shed was the highest，and rosmarinic acid contents of caulis Perilla frutescens dried in the sun and dried at 45 ℃ were slightly lower. Therefore，caulis Perilla frutescens should be dried through one step in the preliminary processing in producing areas，and drying in the shade is the best，drying in the sun directly or cryodrying are also acceptable.

Key words ? ?traditional Chinese medicine;caulis Perilla frutescens;drying method;rosmarinic acid;HPLC

紫蘇梗又稱蘇梗，為唇形科植物紫蘇（Perilla frutescens（L.）Britt.）的干燥莖[1]。氣微香、味淡[2]，性辛、溫，歸肺、脾經(jīng)，具有理氣寬中、止痛、安胎的作用，可用于治療胸膈痞悶、胃脘疼痛、噯氣嘔吐、胎動不安[3]。主要化學(xué)成分包含紫蘇醛、檸檬烯、 β-丁香烯、烷烴類、酯類及多環(huán)雜烯類等揮發(fā)油類化合物[4-6]，具有擴(kuò)張皮膚血管、刺激汗腺分泌而解熱、抗過敏、降血糖等作用[7-10]。

紫蘇梗主產(chǎn)于湖北、河南、山東、四川、河北、黑龍江等地。傳統(tǒng)的干燥方法為陰干和曬干。因受產(chǎn)地廣、種植方法多樣、采收期不明確、干燥方法不統(tǒng)一以及利益驅(qū)使下的采收期延遲等因素的影響，導(dǎo)致市場上商品紫蘇梗質(zhì)量不穩(wěn)、品質(zhì)不佳。

筆者通過長期生產(chǎn)實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，紫蘇梗的產(chǎn)地采收加工對紫蘇梗的質(zhì)量影響很大，不同的干燥方法對紫蘇梗中指標(biāo)性成分迷迭香酸含量影響極大。本文以前期所做紫蘇梗采收期試驗(yàn)結(jié)果為依托，以迷迭香酸含量為指標(biāo)，依據(jù)2015版《中國藥典》[11]，采用高效液相色譜法測定采收期不同干燥方法干燥所得紫蘇梗中迷迭香酸的含量，以期為確定紫蘇梗最佳產(chǎn)地干燥方法提供參考，用于指導(dǎo)紫蘇梗產(chǎn)地干燥加工。

1 ? ?材料與方法

1.1 ? ?儀器與藥品

普析L600-2高效液相色譜儀，普析L600-UV紫外檢測器，LCWIN2.0色譜工作站;SHIMADZU AUW220D型（Max=220 g/82 g，Min=1 mg）和雙杰JJ500型（Max=500 g，d=0.01 g）電子天平;新龍XL-100型多功能高速粉碎機(jī);滬南電爐烘箱廠202-00A型電熱恒溫干燥箱（1 200 W，10～300 ℃）;天津奧特賽恩斯AS5150型超聲波清洗儀;迷迭香酸對照品采購于北京益爾康樂生物科技有限公司（批號：111871-201706，供含量測定用）;甲醇為色譜純，甲酸為分析純，丙酮為色譜純，水為重蒸水。

1.2 ? ?樣品采集與處理

試驗(yàn)檢測用紫蘇梗采自河南省商丘市夏邑縣紫蘇種植基地。紫蘇梗收獲期，從基地采取不同批次、不同部位的樣品進(jìn)行不同干燥方法處理。樣品分為A、B、C 3批，A批為鮮品，2018年10月6日采集;B批為經(jīng)過1 d日曬的半干品，2018年10月2日采集;C為雨后采集鮮品，2018年9月17日采集。其中A批收集9份樣品，分別編號為A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9;B批收集樣品5份，分別標(biāo)號為B1、B2、B3、B4、B5;C批收集1份樣品。每份樣品3株紫蘇。共采集45株紫蘇，分為15份樣品。將干燥后的樣品粉碎，過3號篩，裝樣品袋，編號，常溫保存，待檢[12-13]。

1.3 ? ?對照樣品溶液的制備

精密稱取迷迭香酸對照品10 mg，置25 mL容量瓶中，加60%丙酮至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置于50 mL量瓶中，加60%丙酮至刻度，搖勻，配制成濃度為40 μg/mL的對照品溶液，避光冷藏[14-15]。

1.4 ? ?供試樣品溶液的制備

參照2015版《中國藥典》[1]的提取方法進(jìn)行。每份樣品，精密稱定樣品粉末（過3號篩）約0.5 g，分別置于具塞錐形瓶中（準(zhǔn)確編號），精密加入60%丙酮25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（250 W，40 kHz）30 min，再稱定重量，用60%丙酮補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0.2 μm微孔濾膜過濾，續(xù)取濾液，置于進(jìn)樣瓶中，即可。

1.5 ? ?色譜條件

參照2015版《中國藥典》第四部（通則0512）高效液相色譜法[11]，并經(jīng)試驗(yàn)確定色譜條件。色譜柱為Hypersil-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相為甲醇-0.1%甲酸水溶液（38∶62）;流速為1.0 mL/min;檢測波長為330 nm;柱溫為25 ℃;理論塔板數(shù)以迷迭香酸計算不低于3 000。

1.6 ? ?樣品含量測定

按照1.4的方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL;精密吸取40 μg/mL對照品溶液10 μL進(jìn)樣3次[16-17]。計算公式具體如下：

樣品含量（%）=（Ax×Cr×25）/（Ar×Mx×106×（1-N））×100

式中，Ax為供試品的峰面積;Ar為對照品的峰面積;Cr為對照品溶液的濃度（μg/mL）;Mx為供試品取樣量（g）;N為樣品含水量（%）。

2 ? ?結(jié)果與分析

根據(jù)已有的方法學(xué)結(jié)果[11]以及研究組前期試驗(yàn)結(jié)果，本試驗(yàn)的線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率等均符合試驗(yàn)要求。

從表1可以看出，不同的干燥方法對紫蘇梗的有效成分含量影響比較大。對一步干燥（A批）樣品檢測結(jié)果對比分析發(fā)現(xiàn)，在適當(dāng)?shù)臏囟确秶鷥?nèi)，隨著烘干溫度的升高迷迭香酸含量明顯降低，這說明高溫會促使紫蘇梗里的有效成分迷迭香酸散失或降解;陽光棚晾干（A5）的紫蘇梗樣品迷迭香酸含量高于曬干（A4）、烘干紫蘇梗樣品（A1、A2、A3）的迷迭香酸含量;在相同的干燥方法下，側(cè)枝樣品（A8、A9）迷迭香酸含量均高于主干（A6、A7）和全株（A2、A5），主干樣品和全株樣品（A6和A2，或A7和A5）的迷迭香酸含量基本一致，這是由于側(cè)枝在全株莖桿中的占比很小所致;經(jīng)過兩步干燥的（B批：先日曬1 d成半干品，再分別45 ℃烘干、60 ℃烘干、75 ℃烘干、曬干和陽光棚晾干）紫蘇梗樣品，迷迭香酸含量普遍比較低;經(jīng)受雨淋的紫蘇梗樣品（C批），迷迭香酸含量顯著下降，為0.006%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于藥典規(guī)定，這與迷迭香酸分子極性相關(guān)的水溶解性有極大的關(guān)系。在所有的樣品檢測統(tǒng)計結(jié)果中，經(jīng)過陽光棚晾干的紫蘇梗側(cè)枝迷迭香酸含量最高，高達(dá)0.830%，為藥典標(biāo)準(zhǔn)的8倍多;在所有的全株莖桿樣品中，陽光棚晾干（A5）的紫蘇梗樣品迷迭香酸含量最高，為0.450%，曬干（A4）的紫蘇梗樣品迷迭香酸含量次之，為0.430%;在烘干處理的樣品中，45 ℃烘干（A1）的紫蘇梗樣品迷迭香酸含量最高，為0.310%，以上三者均高于藥典標(biāo)準(zhǔn)數(shù)倍。

3 ? ?結(jié)論與討論