富血小板纖維蛋白(PRF)對(duì)即刻負(fù)重種植體周圍骨缺損的影響

余海云，張國(guó)榮，郭 靜

(1.信陽市第一人民醫(yī)院，河南 信陽464000；2.山西省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院， 山西 太原030013)

隨著口腔種植技術(shù)的發(fā)展與完善，為滿足不同患者的需求，常將拔牙與種植同時(shí)進(jìn)行，該技術(shù)又稱即刻種植技術(shù)，只需一次切口即可替換牙齒[1]。富血小板纖維蛋白(PRF)是繼富血小板血漿后第二代血小板濃縮制品，被定義為一個(gè)自體的白細(xì)胞和富血小板纖維生物材料，目前已廣泛應(yīng)用于口腔科、頜面外科、骨科、整形外科等用于創(chuàng)面的修復(fù)[2,3]。為探討PRF對(duì)即刻負(fù)重種植體周圍骨缺損的影響，本研究選取比格犬5只，將每只犬左右兩側(cè)下頜第四前磨牙牙位隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組，拔除后立即植入柱狀螺紋純鈦種植體并即刻負(fù)重，探討富血小板纖維蛋白(PRF)對(duì)即刻負(fù)重種植體周圍骨缺損的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

選取比格犬5只，約24月齡，體重12 kg-16 kg，所有動(dòng)物咬合關(guān)系正常，牙體和牙列完整，拔除雙側(cè)下頜第四前磨牙，將每只犬左右兩側(cè)下頜第四前磨牙牙位隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組。觀察組種植體周圍骨缺損區(qū)采用PRF填充，對(duì)照組種植體周圍骨缺損區(qū)不填任何填充物。

1.2 材料和設(shè)備

種植體、基臺(tái)、Bio-oss骨粉、離心管、戊巴比妥鈉粉劑、戊二酸溶液、鋨酸、甲酸。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1RPF制備 隨機(jī)選取一只比格犬，將其固定在麻醉架上，將右下肢消毒后抽取靜脈血，立即放入無菌離心管內(nèi)，離心10 min后，除去上層液體和下層膠凍狀物，留中間層物質(zhì)，即為凝膠。將所得凝膠置于無菌紗布上，剪取中間(3×3)mm大小的組織放入福爾馬林中，記為a標(biāo)本，再剪(1×1)mm大小的組織浸入戊二酸中，記為b標(biāo)本，存在冰箱12 h以上。

1.3.2拔牙方法 所有比格犬術(shù)前禁食12 h，禁水4 h，稱重計(jì)算麻醉劑量，靜脈推注麻醉藥進(jìn)行全身麻醉，推注速度不宜過快，要時(shí)刻注意比格犬狀態(tài)，防止因麻醉過度導(dǎo)致死亡。檢查比格犬口腔內(nèi)狀況，術(shù)前先用復(fù)方氯己定含漱液沖洗口腔，再用型安爾碘和酒精消毒，分離牙齦，參照術(shù)前X線根尖片，用潤(rùn)輪機(jī)裂鉆將牙冠頰舌向完全剖開，成為兩個(gè)獨(dú)立的單根牙，拔除近、遠(yuǎn)中牙根。

1.3.3即刻種植方法 按照比格犬測(cè)量數(shù)據(jù)選擇合適的種植體，沿牙槽峭頂行梯形切口，骨膜剝離器從沿梯形切口剝離牙齦，充分暴露牙槽嵴頂及頰側(cè)骨面，根據(jù)種植體方向和深度后確定擴(kuò)孔鉆直徑，采用機(jī)用攜帶體將種植體從種植體瓶中取出，安放于種植窩處,順時(shí)針旋入種植體，其中觀察組采用PRF填充，對(duì)照組不填任何填充物。

1.3.4骨量測(cè)量和標(biāo)本種植切片制備 即刻種植3個(gè)月后，采取與拔牙相同的切口和翻瓣方式，以種植體頸緣中間最上方為標(biāo)記處，用帶刻度的牙周探測(cè)針測(cè)量?jī)蓚?cè)種植體頰側(cè)缺損高度，同時(shí)記錄數(shù)值。用超聲骨刀切取左側(cè)下頜部分組織后立即放入福爾馬林溶液中進(jìn)行固定，固定后,用脫鈣液脫鈣12 h，梯度乙醇脫水，石蠟浸透包埋使組織塊變硬，將組織切片常規(guī)染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察。

骨性結(jié)合率=骨與種植體接觸長(zhǎng)度/種植體的總長(zhǎng)度×100%，新骨生成率=缺損區(qū)新骨面積/缺損區(qū)原總面積×100%。

1.3.5能譜分析 所得切片標(biāo)本采用能譜儀進(jìn)行成分元素種類與含量分析，同時(shí)配合掃描電子顯微鏡與透射電子顯微鏡使用。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組種植體部位骨表表面Ca2+含量比較

觀察組種植術(shù)后3個(gè)月種植體部位骨表面Ca2+含量明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組種植術(shù)后3個(gè)月種植體部位骨表面Ca2+含量

2.2 兩組術(shù)后3個(gè)月種植體頰側(cè)骨量增加高度、缺損面積等比較

觀察組術(shù)后3個(gè)月頰側(cè)骨量增加高度、骨性結(jié)合率和新骨生成率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，而缺損面積明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組術(shù)后3個(gè)月種植體頰側(cè)骨量增加高度、缺損面積等比較

2.3 兩組光鏡下骨組織形態(tài)

術(shù)后3個(gè)月，觀察組種植體頰側(cè)骨組織切片可見大量新生骨組織，骨小梁致密粗大，對(duì)照組新生骨質(zhì)及成骨細(xì)胞數(shù)少于觀察組，見圖1。

HE染色×100，A：觀察組；B：對(duì)照組

3 討論

口腔種植體又稱為牙種植體，還稱為人工牙根，是通過外科手術(shù)的方式將其植入人體缺牙部位的上下頜骨內(nèi)，待其手術(shù)傷口愈合后，在其上部安裝修復(fù)假牙的裝置[4]?？谇环N植體按種植方式和植入部位分為骨內(nèi)種植體、骨膜下種植體、根管內(nèi)種植體和穿骨種植四類[5]。種植體的即刻負(fù)重是指在種植體植人后同期安裝臨時(shí)義齒，種植體即刻負(fù)重獲得成功最重要的條件是種植體在承受負(fù)荷時(shí)保持穩(wěn)定，過度的運(yùn)動(dòng)會(huì)造成纖維性愈合而導(dǎo)致種植失敗[6]。種植修復(fù)義齒已成為一種較為成熟的口腔修復(fù)治療手段，但具有骨量不足的缺點(diǎn)，而血液制品的基本成份是血小板，經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚砜梢詽饪s成與成骨相關(guān)的纖維蛋白和多種細(xì)胞因子，有利于成骨[7]。

PRF為第二代血小板凝集物，它是一種具有粘性的富含各種生長(zhǎng)因子和高濃度纖維蛋白原的血小板凝膠，富含血小板，這些血小板被激活后會(huì)產(chǎn)生多種生長(zhǎng)因子，其中包括血小板衍生生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化性生長(zhǎng)因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等，這些生長(zhǎng)因子可以通過不同方式來調(diào)控成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞等成骨相關(guān)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡，以促進(jìn)組織的再生與修復(fù)[8-10]。而即刻種植中使用的Bio-oss骨粉作為一類具有多孔結(jié)構(gòu)的可降解材料，不僅可以給細(xì)胞附著提供支持效果，還可增加膜的空間維持能力，而且這種復(fù)合材料具有良好的骨傳導(dǎo)和骨誘能力，可以很好地促進(jìn)骨組織的再生[11]。

人體中Ca2+含量低，會(huì)影響骨組織鈣化，不利于骨組織再生，降低種植體部位骨量[12]。觀察組種植術(shù)后3個(gè)月種植體部位骨表面Ca2+含量明顯高于對(duì)照組，說明PRF通過激活多種生長(zhǎng)因子促進(jìn)骨表面鈣化，有助于種植體周圍骨再生。觀察組術(shù)后3個(gè)月頰側(cè)骨量增加高度、骨性結(jié)合率和新骨生成率明顯高于對(duì)照組，而缺損面積明顯低于對(duì)照組，說明PRF具有促進(jìn)骨組織修復(fù)的效果，也證明了其良好的成骨能力，對(duì)口腔種植術(shù)后軟組織的愈合和促進(jìn)新骨形成有一定的作用。

成骨細(xì)胞是骨形成的主要功能細(xì)胞，負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化，人體骨組織不斷地進(jìn)行著重建，該過程中成骨細(xì)胞移動(dòng)到被吸收部位，分泌骨基質(zhì)，骨基質(zhì)礦化而形成新骨[13]。術(shù)后3個(gè)月，觀察組種植體頰側(cè)骨組織切片可見大量新生骨組織，骨小梁致密粗大，對(duì)照組新生骨質(zhì)及成骨細(xì)胞數(shù)少于觀察組?？紤]可能與PRF填充有關(guān)，PRF的主要結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是由纖維蛋白構(gòu)成的疏松的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其纖維蛋白網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)是通過緩慢聚集作用產(chǎn)生的，與天然組織結(jié)構(gòu)十分相似，所以，它具有誘導(dǎo)成骨細(xì)胞增殖、遷移及促進(jìn)組織愈合的效果，增加新生骨質(zhì)的形成[14]。

綜上所述，即刻負(fù)重種植體周圍骨缺損應(yīng)用PRF可以有效促進(jìn)種植體周圍骨缺損的修復(fù)，值得在臨床上推廣使用。