白細胞分化抗原147、血管內皮生長因子蛋白表達與肺腺癌患者臨床分期、淋巴結轉移的關系

楊繼嵐 胡鳳娣 謝琳

[摘要] 目的 探討白細胞分化抗原147（CD147）、血管內皮生長因子（VEGF）蛋白表達與肺腺癌患者的臨床分期、淋巴結轉移的關系。 方法 選取昆明醫科大學第三附屬醫院2015年10月～2018年10月肺腺癌患者78例，取其肺腺癌組織與相應癌旁正常肺組織標本，以免疫組織化學SP法檢測患者肺腺癌組織和相應癌旁正常肺組織標本中CD147、VEGF蛋白表達，并分析CD147、VEGF蛋白表達和患者淋巴結轉移、臨床分期之間關系。 結果 肺腺癌組織中CD147、VEGF蛋白陽性表達率均高于癌旁正常肺組織，差異有統計學意義（P < 0.05）;有淋巴結轉移、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌組織中CD147、VEGF蛋白陽性表達率均高于無淋巴結轉移及臨床分期Ⅰ～Ⅱ期患者，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。 結論 肺腺癌組織中CD147、VEGF蛋白均呈高表達，且兩者表達水平與淋巴結轉移、臨床分期相關，可將其作為肺腺癌診斷、惡性程度評估的重要指標。

[關鍵詞] 肺腺癌;白細胞分化抗原147;血管內皮生長因子;臨床分期;淋巴結轉移

[中圖分類號] R736.4? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）08（b）-0127-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the expression of leukocyte differentiation antigen 147 （CD147） and vascular endothelial growth factor （VEGF） protein and clinical stage， lymph node metastasis in patients with lung adenocarcinoma. Methods A total of 78 patients with lung adenocarcinoma from October 2015 to October 2018 in the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University were enrolled. The lung adenocarcinoma tissues and corresponding normal lung tissues were taken and the lung glands were detected by immunohistochemical SP method. The expressions of CD147 and VEGF protein in cancer tissues and corresponding normal lung tissues were analyzed， and the relationship between CD147， VEGF protein expression and lymph node metastasis and clinical stage was analyzed. Results The positive expression rates of CD147 and VEGF protein in lung adenocarcinoma tissues were higher than those in corresponding normal lung tissues， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The positive expression rates of CD147 and VEGF protein in lung adenocarcinoma tissues with lymph node metastasis and clinical stage Ⅲ-Ⅳ were higher than those in non-lymph node metastasis and clinical stage Ⅰ-Ⅱ patients， the differences were statistically significant （all P < 0.05）. Conclusion The expressions of CD147 and VEGF in lung adenocarcinoma are highly expressed， and their expression levels are related to lymph node metastasis and clinical stage. They can be used as an important index for the diagnosis and malignant degree evaluation of lung adenocarcinoma.

[Key words] Lung adenocarcinoma; Leukocyte differentiation antigen 147; Vascular endothelial growth factor; Clinical stage; Lymph node metastasis

近年來，隨大氣污染情況與人口老齡化加劇、主動與被動吸煙人數增加等因素影響，肺癌發病率逐漸增高，每年肺癌發病人數占據全部癌癥發病總人數的13%左右，且病死人數約占全部癌癥病死總人數的18%，居各類型惡性腫瘤之首[1-3]。臨床研究[4-5]報道，肺癌起病較隱匿，75%左右肺癌患者于疾病確診時已進展中晚期，存在轉移證據，致使治療難度及患者病死率提升。故探尋一種肺癌早期診斷及病情評價的靈敏方法對指導臨床采取及時準確治療、延長患者生存周期均有重要意義。白細胞分化抗原147（CD147）為免疫球蛋白超家族中的一員，可刺激腫瘤附近間質纖維母細胞分泌大量基質金屬蛋白酶，參與細胞外基質降解，與腫瘤轉移侵襲密切相關[6]。血管內皮生長因子（VEGF）為一種正性血管生成調節因子，能促進腫瘤及組織新生血管生成，在腫瘤發生、進展、侵襲中起著重要作用[7-8]。此外，肺腺癌為肺癌重要類型之一，其在肺癌中占據著較大比例。本研究以免疫組織化學SP法測定患者肺腺癌組織和相應癌旁正常肺組織標本中CD147、VEGF蛋白表達，旨在分析其表達和患者臨床分期、淋巴結轉移等病理參數之間關系，為臨床早期診斷、病情評估和靶向治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年10月～2018年10月昆明醫科大學第三附屬醫院（以下簡稱“我院”）收治的肺腺癌患者78例，其中男46例，女32例;年齡35～79歲，平均（62.13±7.09）歲;腫瘤大體類型：周圍型50例，中央型28例;腫瘤大小：>3 cm 41例，≤3 cm 37例;分化程度：低分化24例，高、中分化54例;淋巴結轉移：有淋巴結轉移37例，無淋巴結轉移41例;臨床分期：Ⅲ～Ⅳ期40例，Ⅰ～Ⅱ期38例。本研究經我院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準? ①符合《內科學》[9]中肺癌臨床診斷標準，且經手術病理組織檢查明確為肺腺癌，并取距原發腫瘤邊緣>5 cm的癌旁正常肺組織標本（通過HE染色確認無腫瘤浸潤）;②術前未采取放化療及免疫治療;③臨床和病理資料完整;④患者對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準? ①合并其他類型惡性腫瘤者;②合并精神系統、血液系統、內分泌系統疾病者;③肝、腎、心等臟器存在器質性病變者;④妊娠、哺乳期女性。

1.3 方法

所有標本均采用多聚甲醛（4%）固定，采取石蠟包埋，制作4 μm厚度切片。

1.3.1 檢測方法? 以免疫組織化學SP法檢測患者肺腺癌組織和相應癌旁正常肺組織標本中CD147（檢測試劑盒購于北京中山金橋生物技術有限公司，生產批號：ZA-4055）、VEGF（檢測試劑盒購于邁新生物技術有限公司，生產批號：18080824366）蛋白表達，有關操作均嚴格按照試劑盒說明書施行，均由同一組醫師執行操作，以已知VEGF、CD147陽性肺腺癌組織與磷酸鹽緩沖液替代一抗作為陽性及陰性對照。

1.3.2 結果判定? VEGF陽性信號定位于細胞漿內，CD147陽性信號定位于細胞漿和細胞膜;依據陽性細胞數與細胞染色強度應用半定量積分法施行結果判斷，每張切片取高倍視野5個，觀察不低于500個細胞，按照視野下陽性細胞所占百分比施行評分：陽性細胞數>75%計4分，>50%～75%計3分，>25%～50%計2分，>5%～25%計1分，≤5%計0分;并按照細胞染色強度施行評分：呈棕褐色計3分，棕黃色計2分，淡黃色為1分，未著色計0分，而后將兩項積分相乘，最終得分5～12分判斷為陽性，0～4分判斷為陰性[10]。

1.4 觀察指標

①比較患者肺腺癌組織和相應癌旁正常肺組織標本中CD147、VEGF蛋白表達;②分析CD147、VEGF蛋白表達和患者淋巴結轉移、臨床分期之間的關系。

1.5 統計學方法

采用SPSS 24.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者肺腺癌組織和相應癌旁正常肺組織標本中CD147、VEGF蛋白表達比較

肺腺癌組織中CD147、VEGF蛋白陽性表達率均高于癌旁正常肺組織，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。見表1。

2.2 CD147、VEGF蛋白表達與患者臨床分期、淋巴結轉移的關系

有淋巴結轉移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌組織中CD147、VEGF蛋白陽性表達率均高于無淋巴結轉移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統計學意義（均P < 0.05）。見表2。

3 討論

肺腺癌屬肺癌重要類型之一，病因與遺傳、電離輻射、致癌物質長期接觸史、肺部慢性感染史、吸煙、大氣污染等多種因素有一定相關性，疾病早期檢出率低，治療難度大，易產生轉移，遠期生存率較低[11-13]。探尋一種疾病早期診斷和病情評價方法一直為臨床研究重點。

臨床研究[14]發現，腫瘤侵襲及轉移為多種因素參與的一個復雜過程，包含原發腫瘤浸潤、細胞外基質產生降解、腫瘤新生血管形成、腫瘤細胞向靶組織轉移等環節。CD147是免疫球蛋白超家族成員之一，相對分子量為58 kDa左右，可調控單羧酸轉運蛋白活性度、參與生殖及機體免疫應答等生理過程[15]。近年來，有研究[16]報道，CD147可誘導腫瘤間質纖維母細胞大量分泌基質金屬蛋白酶，進而加速細胞外基質成分降解，為腫瘤浸潤及轉移提供有利條件。CD147還能直接上調腫瘤自身VEGF抑或間接經過基質金屬蛋白酶上調腫瘤細胞和附近基質細胞內VEGF表達水平，進而加速新生血管形成，促進腫瘤細胞生長、增殖[17]。同時，相關研究[18]發現，在CD147表達水平增高時，可增強脫離原發病灶腫瘤細胞同間質、脈管之間黏附作用，使腫瘤細胞更易于散播。覃玲艷等[19]報道，CD147可經由轉化因子通路途徑加速上皮及間質轉化，促使腫瘤細胞易于侵入到間質中，致使腫瘤細胞轉移潛能增高。既往研究[20]發現，CD147在子宮內膜癌、結直腸癌、肝癌、前列腺癌等多種腫瘤中均呈高表達，其表達水平和腫瘤浸潤及轉移有一定相關性。但關于其在肺腺癌中的表達情況相關報道尚較少。本研究顯示，CD147蛋白在肺腺癌組織中陽性表達率高于癌旁正常肺組織，且有淋巴結轉移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌組織中CD147蛋白陽性表達率均高于無淋巴結轉移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期患者（均P < 0.05）。提示CD147蛋白于肺腺癌組織中呈高表達，且其表達水平與淋巴結轉移、臨床分期密切相關。

VEGF為目前臨床已知作用最強血管內皮生長因子之一，可對血管內皮細胞產生作用，加速血管內皮細胞大量增殖，促進新生血管形成，進而為腫瘤增殖及轉移提供有利微環境[21-23]。同時，VEGF通過和其受體相結合，還可促進血管基底膜產生降解，提升血管通透性，促進腫瘤細胞脫落及轉移[24]。相關研究[25-27]指出，正常組織中VEGF表達水平較低，而在惡性腫瘤患者癌組織及血清中，VEGF表達水平可顯著增高，且增高幅度與腫瘤惡性程度有一定相關性。張冉等[28]研究顯示，肺癌組織中VEGF陽性表達率顯著高于正常組織。本研究肺腺癌組織中VEGF蛋白陽性表達率高于癌旁正常肺組織，且有淋巴結轉移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌組織中VEGF蛋白陽性表達率均高于無淋巴結轉移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期患者（均P < 0.05）。提示肺腺癌組織中VEGF蛋白呈高表達，且其表達水平與淋巴結轉移、臨床分期密切相關。

綜上，CD147、VEGF蛋白在肺腺癌組織中均呈現高表達，且其表達水平與淋巴結轉移、臨床分期具有密切關系，可將其作為肺腺癌診斷、惡性程度評估的重要指標，亦提示可通過阻斷兩者信號傳導通過作為肺腺癌治療新靶點。

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（收稿日期：2018-12-18? 本文編輯：王? ?蕾）