“發汗”對厚樸藥材質量影響的研究及其工藝的建立

朱林峰，張媛，馮紫薇，卓冰雨，任蜜蜜

北京中醫藥大學 中藥學院，北京 102488

厚樸是木蘭科植物厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.或凹葉厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮，具有燥濕消痰、下氣除滿之功效[1]。厚樸為中醫臨床常用中藥，關于其質量研究的報道頗多，尤其是加工工藝對厚樸的質量影響，深受行業的關注。2015年版《中華人民共和國藥典》明確規定厚樸干皮需經過發汗處理[1]。所謂“發汗”，是指在藥材加工過程中用微火烘至半干或微煮、蒸后，堆置發熱，使其內部水分外溢，從而使其變軟，變色，增加香味或減少刺激性，同時有利于干燥的方法[2-3]。現代研究發現，厚樸“發汗”后其厚樸酚與和厚樸酚(以下簡稱兩酚)含量、揮發油含量以及浸出物含量均有顯著提高[4-8]，且“發汗”后厚樸改善大鼠胃動力障礙及抗潰瘍作用均有所增強[9-10]。但查閱歷代本草發現，無“發汗”一詞的明確記載，推測“發汗”是近代民間傳承的一種生產經驗；由于“發汗”機理尚不明確，且已有文獻中關于厚樸“發汗”的方法也各不相同，故厚樸“發汗”的必要性存在爭議，不同產地及不同文獻中所用“發汗”方法也各不相同[4-8，11-15]。本文在已有研究的基礎上，采用單因素考察法細化考察不同發汗方式及不同發汗參數對厚樸質量的影響，旨在闡明厚樸“發汗”加工的必要性及建立最佳工藝，同時為其他需要發汗藥材的工藝優化提供參考。

1 材料

1.1 儀器

萬分之一電子天平(sartorius，BP110S)；十萬分之一電子天平(Mettler Toledo)；Waters 2695型高效液相色譜儀；Agilent ZorbaxSB-C18液相色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；S21-6-S數顯恒溫水浴鍋(金壇市鴻科儀器廠)；數控超聲波清洗器(KQ-500DE型，昆山市超聲儀器有限公司，500 W，40 KHz)；電熱鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)；FW-135粉碎機(北京興時利和科技發展有限公司)；藥典篩；注射器濾頭(0.22 μm，天津市津騰實驗設備有限公司)；一次性注射器(杭州悅康醫療器械有限公司)；錐形瓶(50、100 mL)；容量瓶(25 mL)；布氏漏斗；抽濾瓶。

1.2 試劑

厚樸酚對照品(批號：KS0912CB14，純度≥98%)、和厚樸酚對照品(批號：Z20A6L1，純度≥98%)均購于上海源葉生物科技有限公司；甲醇(分析純，北京化工廠)；甲醇(分析純，西隴科學股份有限公司)；去離子水為實驗室自制；甲醇[色譜級，賽默飛世爾科技(中國)有限公司]；純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司)。

1.3 材料

樹齡為18年的新鮮厚樸的干皮，采自湖北恩施，經北京中醫藥大學張媛副教授鑒定為厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.的干皮。共計180份樣品，具體樣品信息表見表1。

表1 厚樸樣品信息

續表1

2 方法

2.1 樣品采收方法

取生境一致、樹齡均為18年的厚樸樹18棵，編號1～18，將每棵樹的干皮縱向分割為10份，剝取，編號a～j，共計180份樣品，備用。

2.2 樣品“發汗”方法

將上述18棵樹分為3組，其中1～6號植株樣品采用水蒸“發汗”法處理，7～12號植株樣品采用水煮“發汗”法處理，13～18號植株樣品采用直接堆積“發汗”法處理，將實驗全過程溫度控制為25 ℃，相對濕度控制為75%。

2.2.1 水蒸“發汗”法 樣品a～i分別置于蒸鍋蒸3、6、9 min，然后樣品a～c堆積“發汗”3 d；樣品d～f堆積“發汗”6 d；樣品g～i堆積“發汗”9 d；將所有“發汗”樣品取出攤開陰干；樣品j作為陰性對照直接攤開陰干。共計得到60份樣品，備用。

2.2.2 水煮“發汗”法 樣品a～i置于沸水中煮，其余操作均同于水蒸“發汗”法；j樣品直接攤開陰干作為對照。共計得到60份樣品，備用。

2.2.3 直接堆積“發汗”法 樣品a～c直接堆積發汗3 d；樣品d～f直接堆積“發汗”6 d；樣品g～i直接堆積“發汗”9 d；之后將所有“發汗”樣品取出攤開陰干；樣品j作為陰性對照，直接攤開陰干。共計得到60份樣品，備用。

2.3 樣品制備方法

2.3.1 供試品溶液的制備 精密稱取各厚樸樣品粉末(過3號篩)0.2 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，搖勻，密塞，浸泡24 h，過濾，精密量取續濾液5 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得。

2.3.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取厚樸酚、和厚樸酚對照品適量，加甲醇分別制成每1 mL含厚樸酚40 μg、和厚樸酚24 μg的溶液，即得。

2.4 樣品檢測方法

依照《中華人民共和國藥典》2015年版一部厚樸項下“含量測定”方法測定厚樸酚、和厚樸酚含量。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為甲醇-水(78∶22)；檢測波長為294 nm。理論板數按厚樸酚峰計算不低于3800。

3 結果

3.1 水蒸“發汗”法樣品兩酚含量平均增長率

按照2.4項下方法，對2.2.1項下以水蒸“發汗”法加工的樣品進行含量測定。

3.1.1 不同堆積時間樣品兩酚含量平均增長率 采用相同水蒸時間，以堆積時間為變量，分析樣品兩酚含量的變化。即編號為a、d、g的樣品為一組，編號為b、e、h的樣品為一組，編號為c、f、i的樣品為一組，對比3組厚樸樣品與陰干厚樸樣品兩酚含量的差異，得到兩酚含量增長率，平均6棵樹的結果得到該條件下兩酚含量的平均增長率，結果如圖1。

圖1 水蒸法不同堆積時間厚樸兩酚含量平均增長率

含量增長率=(“發汗”厚樸兩酚含量-陰干厚樸兩酚含量)/陰干厚樸兩酚含量×100%

(1)

從圖1中可以看出，在水蒸時間相同的條件下，隨著堆積時間的增加，厚樸樣品兩酚含量平均增長率呈現上升趨勢，在g、h、i的堆積時間下即堆積9 d時厚樸樣品兩酚含量平均增長率達到最高值，運用SPSS 18.0對g樣品與a、d樣品；h樣品與b、e樣品；i樣品與c、f樣品進行顯著性差異比較，均有P<0.05，即在水蒸時間相同的條件下，堆積時間為9 d時厚樸樣品兩酚含量增幅最高。

3.1.2 不同水蒸時間樣品兩酚含量平均增長率 采用相同堆積時間，以水蒸時間為變量，分析樣品兩酚含量的變化。即編號為a、b、c的樣品為一組，編號為d、e、f的樣品為一組，編號為g、h、i的樣品為一組，對比3組厚樸樣品與陰干厚樸樣品兩酚含量的差異，得到兩酚含量增長率，平均6棵樹的結果得到該條件下兩酚含量的平均增長率，結果如圖2。

圖2 不同水蒸時間厚樸兩酚含量平均增長率

從圖2中可以看出，在堆積時間相同的條件下，隨著水蒸時間的增加，厚樸樣品兩酚含量平均增長率呈現上升趨勢，在c、f、i的水蒸時間下即水蒸9 min時厚樸樣品兩酚含量平均增長率達到最高值，運用SPSS 18.0對c樣品與a、b樣品；f樣品與d、e樣品；i樣品與g、h樣品進行顯著性差異比較，除d、e、f組樣品外均有P<0.05，即在堆積時間相同的條件下，水蒸時間為9 min時厚樸樣品兩酚含量增幅最高。

綜合3.1.1項與3.1.2項下結果可知，在i樣品“發汗”條件下即水蒸時間為9 min，堆積“發汗”時間為9 d時，樣品兩酚含量平均增長率達到最大值，為48.53%。

3.2 水煮“發汗”法樣品兩酚含量

按照2.4項下方法，對2.2.2項下以水煮“發汗”法加工的樣品進行含量測定。

3.2.1 不同堆積時間樣品兩酚含量平均增長率 采用相同水煮時間，以堆積時間為變量，分析樣品兩酚含量的變化。即編號為a、d、g的樣品為一組，編號為b、e、h的樣品為一組，編號為c、f、i的樣品為一組，對比3組厚樸樣品與陰干厚樸樣品兩酚含量的差異，得到兩酚含量增長率，平均6棵樹的結果得到該條件下兩酚含量的平均增長率，結果如圖3。

圖3 水煮法不同堆積時間厚樸兩酚含量平均增長率

從圖3中可以看出，在水煮時間相同的條件下，隨著堆積時間的增加，厚樸樣品兩酚含量平均增長率呈現上升趨勢，在g、h、i的堆積時間下即堆積9 d時厚樸樣品兩酚含量平均增長率達到最高值，運用SPSS 18.0對g樣品與a、d樣品；h樣品與b、e樣品；i樣品與c、f樣品進行顯著性差異比較，均有P<0.05，即在水煮時間相同的條件下，堆積時間為9 d時厚樸樣品兩酚含量增幅最高。

3.2.2 不同水煮時間樣品兩酚含量平均增長率 采用相同堆積時間，以水煮時間為變量，分析樣品兩酚含量的變化。即編號為a、b、c的樣品為一組，編號為d、e、f的樣品為一組，編號為g、h、i的樣品為一組，對比3組厚樸樣品與陰干厚樸樣品兩酚含量的差異，得到兩酚含量增長率，平均6棵樹的結果得到該條件下兩酚含量的平均增長率，結果如圖4。

圖4 不同水煮時間厚樸兩酚含量平均增長率

從圖4中可以看出，在堆積時間相同的條件下，隨著水煮時間的增加，厚樸樣品兩酚含量平均增長率呈現下降趨勢，在a、d、g的水煮時間下即水煮3 min時厚樸樣品兩酚含量平均增長率達到最高值，運用SPSS 18.0對a樣品與b、c樣品；d樣品與e、f樣品；g樣品與h、i樣品進行顯著性差異比較，均有P<0.05，即在堆積時間相同的條件下，水煮時間為3 min時厚樸樣品兩酚含量增幅最高。

綜合3.2.1項與3.2.2項下結果可知，在g樣品“發汗”條件下即水煮時間為3 min，堆積“發汗”時間為9 d時，樣品兩酚含量平均增長率達到最大值，為50.56%。

3.3 直接堆積“發汗”法樣品兩酚含量平均增長率

對2.2.3項下以直接堆積“發汗”法加工的樣品進行含量測定，對比直接堆積“發汗”厚樸與陰干厚樸的兩酚含量，得到兩酚含量增長率，平均6棵樹的結果得到該條件下兩酚含量的平均增長率，結果如圖5。

圖5 直接堆積法厚樸樣品兩酚含量平均增長率

從圖中可以看出，隨著堆積時間的增長，兩酚含量整體也呈現上升趨勢，在g條件下即堆積9 d兩酚含量達到最高值，運用SPSS 18.0對g條件樣品與其他組樣品進行顯著性差異比較，P<0.05，此時較陰干樣品兩酚含量平均增長率達到19.07%。

3.4 不同“發汗”處理對厚樸性狀的影響

對比不同“發汗”方法對厚樸藥材性狀的影響發現，樣品經水蒸與水煮“發汗”處理后其內表面顏色加深，劃之油痕更為明顯，且香味更為濃厚，見圖6～7。直接堆積“發汗”樣品較陰干樣品外在性狀變化不明顯，見圖8，且不同蒸/煮時間與堆積時間的樣品其性狀差異也不顯著。

圖6 陰干厚樸(左)與水蒸“發汗”厚樸(右)性狀圖

圖7 陰干厚樸(左)與水煮“發汗”厚樸(右)性狀圖

圖8 陰干厚樸(左)與直接堆積“發汗”厚樸(右)性狀圖

4 結論

從上述結果可知，厚樸“發汗”后其外在性狀發生明顯變化，內表面顏色加深，劃之油痕更為明顯，香味更濃厚；且不同“發汗”方法下厚樸兩酚含量的平均增長率均有所差異，整體來看水煮“發汗”法最優，水蒸“發汗”法其次，而直接堆積“發汗”法兩酚含量平均增長率最低；且相較于水蒸“發汗”及水煮“發汗”，直接堆積“發汗”樣品兩酚含量增長較低，推測蒸/煮是“發汗”過程中的重要環節，可促使其中水分發散、同系物在相關活性酶作用下轉化。同種“發汗”方法不同條件下厚樸兩酚含量的平均增長率差異也較為明顯，推測蒸/煮時間是“發汗”過程中的重要變因。從上述結果可知，厚樸最優“發汗”工藝為在25 ℃，75%相對濕度的環境下水煮3 min后，堆積“發汗”9 d，之后取出攤開陰干。此時兩酚含量平均增長率達到50.56%。同時厚樸酚與和厚樸酚是厚樸的主要藥效成分及《中華人民共和國藥典》規定的指標性成分，“發汗”能顯著提高兩種成分的含量，從而提高厚樸藥材的質量，保證臨床用藥的穩定有效，因此，這種傳統的產地加工方法具有科學性，應予以堅持。但本實驗由于厚樸樣品及實驗梯度的限制，并未得到厚樸“發汗”工藝的最優值，后續實驗可以通過設置更長的堆積時間與更加細化的水蒸及水煮時間，深入研究堆積及蒸、煮過程對厚樸“發汗”效果的影響，得到厚樸最優“發汗”工藝。

本研究通過實地考察與文獻調研首次對現有的厚樸“發汗”工藝進行了系統研究與對比，通過單因素考察法考察了不同“發汗”方法與“發汗”條件對厚樸質量的影響，建立了厚樸優良穩定的“發汗”工藝，為同類藥材發汗工藝的優化提供了參考。