核酸檢測技術(shù)在基層血站血液篩查中的應(yīng)用

馬成林

（海東市中心血站，青海 海東 810600）

基層血站為醫(yī)療機(jī)構(gòu)提供血液，基層血站的血液篩查能力影響到醫(yī)療結(jié)構(gòu)的用血安全，關(guān)系到患者的生命安全，因此必須重視對血液的篩查。對輸血傳播病原體進(jìn)行篩查能有效保障血液的安全，常用的方法主要包括核酸檢測與血清學(xué)檢測[1]。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）一直在HCV、HBV、VIV以及梅毒螺旋體的檢測中廣泛應(yīng)用，但是這一方法受到隱匿性感染、窗口期感染、病毒變異等因素的影響，檢測后仍然存在一定的風(fēng)險(xiǎn)[2]。我國于2010年開始進(jìn)行核酸檢測試點(diǎn)，2015年正式將其納入到《血站技術(shù)操作規(guī)程》中。本次研究主要探討將核酸檢測技術(shù)應(yīng)用于基層血站血液篩查中的效果，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇2018年3月～2019年3月期間本站ELISA法檢測無反應(yīng)性無償獻(xiàn)血標(biāo)本共4200份，獻(xiàn)血者均符合現(xiàn)行《獻(xiàn)血者健康檢查要求》中的相關(guān)規(guī)定，體檢合格，年齡18～55歲。

1.2 方法

采血時(shí)均為肘靜脈血，采集于2支抗凝管中分別進(jìn)行ELISA法檢測與核酸檢測，用于ELISA法檢測的試管中不加入分離膠，核酸檢測的抗凝管中加入分離膠。嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)范進(jìn)行冷藏、保存以及處理。對ELISA法檢測陰性的標(biāo)本，均進(jìn)行核酸檢測，核酸檢測的過程中，采用全自動(dòng)混樣儀準(zhǔn)確制備標(biāo)本，之后進(jìn)行樣本檢測與擴(kuò)增。檢測儀器自動(dòng)算出CT值，如果發(fā)現(xiàn)有擴(kuò)增曲線在閾值線以上（即我們說的陽性），對核酸檢測技術(shù)發(fā)現(xiàn)陽性的補(bǔ)充進(jìn)行血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，從而進(jìn)行確認(rèn)。

2 結(jié) 果

4200份ELISA顯示陰性的標(biāo)本中，核酸檢測發(fā)現(xiàn)陽性11份，構(gòu)成比1.5%（63/4200）；經(jīng)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn)HBV感染8例，構(gòu)成比72.86%（8/11）。無HIV RNA與HCV RNA。

3 討 論

核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)采用分子診斷技術(shù)對病原體的核酸進(jìn)行直接檢測，當(dāng)前我國血液篩查中的常用技術(shù)主要包括實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)與逆轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增技術(shù)，主要步驟是提取核酸、擴(kuò)增以及檢測。這一技術(shù)的主要優(yōu)勢在于高度自動(dòng)化、高敏感性以及特異度，通過這一技術(shù)能將血液樣本中含量極低的核酸檢測出來，病毒感染后的數(shù)天之內(nèi)即可檢查出來，因此這一技術(shù)的采用使得病原體檢測的“窗口期”得到了明顯的縮短[3]。

從本次研究的結(jié)果上看來，ELISA法檢測顯示陰性的標(biāo)本中，有11份標(biāo)本被檢測為陽性，其構(gòu)成比為1.5%，11例核酸檢測顯示陽性的標(biāo)本中，有8例經(jīng)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測為HBV感染，其構(gòu)成比為72.86%，提示提示核酸檢測技術(shù)應(yīng)用于基層血站的血液篩查中的敏感性較ELISA法更高，其特異度也較為理想，這能明顯提高基層血站血液篩查的能力，能有效預(yù)防攜帶病毒的血液被使用，為臨床用血安全提供了保障[4]。本次研究中，假陽性2例，其原因可能是：（1）本站開展核酸檢測的時(shí)間較短，工作人員尚缺乏足夠的操作經(jīng)驗(yàn)，由于操作不夠熟練造成的檢測出現(xiàn)假陽性；（2）標(biāo)本血樣的運(yùn)輸以及保存不夠規(guī)范，運(yùn)輸時(shí)間過長、環(huán)境溫度過高等造成核酸物質(zhì)被分解；（3）存留確認(rèn)血樣的過程中，病毒顆粒在血漿中為泊松分布，濃度分布不均勻，血樣中的病毒濃度不夠高，造成未能檢出[5]。

ELISA法檢測受到病毒變異、隱匿性感染以及窗口期等眾多因素的影響，血液檢驗(yàn)過程中存在一定的漏檢率，采用核酸檢測的方法能有效降低漏檢率，將這一方法與ELISA法相結(jié)合，能有效確保臨床的用血安全。因此本次研究認(rèn)為，將這一技術(shù)應(yīng)用于基層血站的血液篩查能耐有效減少漏檢，其應(yīng)用價(jià)值較高。

綜上所述，核酸檢測技術(shù)在基層血站中的應(yīng)用使得血站對經(jīng)輸血傳播性病毒的篩查能力得到了提高，將其與血清學(xué)檢測相結(jié)合，能確保臨床用血安全。