不同類型原發(fā)性肝癌組織中干細(xì)胞的表達(dá)及其預(yù)后

張陽　聶寒秋　周顯飛

[摘要]目的 探討不同類型的原發(fā)性肝癌組織中干細(xì)胞表達(dá)及其預(yù)后。 方法 回顧性分析2015年1月～2017年1月期間在我院接受治療的125例原發(fā)性肝癌患者的診治資料。選取患者的手術(shù)切除肝細(xì)胞性肝癌、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌、肝硬化結(jié)節(jié)、混合型肝癌和癌旁組織標(biāo)本，每組25例。對五組標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測，比較上皮細(xì)胞黏附分子（EpCAM）、CD133和CD90在不同類型的組織中的表達(dá)及與臨床特征和生存期的關(guān)系。 結(jié)果 肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌、肝細(xì)胞性肝癌和混合型肝癌中CD133、EpCAM、CD90的陽性率明顯高于肝硬化結(jié)節(jié)、癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在三組肝癌組織中，CD90表達(dá)陽性率明顯高于EpCAM、CD133陽性率，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。EpCAM、CD133和CD90陽性表達(dá)患者的腫瘤低分化比例、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例和臨床分期為Ⅲ/Ⅳ期的比例明顯高于陰性表達(dá)者，其中位生存期短于陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 干細(xì)胞在原發(fā)性肝癌中高表達(dá)，但在不同類型的肝癌組織中的陽性率接近，干細(xì)胞參與了肝癌的發(fā)生和進(jìn)展，是不良預(yù)后的標(biāo)志之一。

[關(guān)鍵詞] 原發(fā)性肝癌;干細(xì)胞;表達(dá);預(yù)后

[中圖分類號(hào)] R735.7? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2020）03-0005-03

[Abstract] Objective To investigate the expression and prognosis of stem cells in different types of primary liver cancer tissues. Methods The clinical data of 125 patients with primary liver cancer who were treated in our hospital from January 2015 to January 2017 were retrospectively analyzed. The hepatocellular carcinoma， intrahepatic cholangiocarcinoma， mixed liver cancer， cirrhotic nodules and adjacent tissues of surgical resection were selected， with 25 cases in each group. Immunohistochemistry was performed on five groups of samples. The expressions of epithelial cell adhesion molecules （EpCAM）， CD133 and CD90 in different types of tissues and their relationship with clinical features and survival was compared. Results The positive rates of CD133， EpCAM and CD90 expression in the hepatocellular carcinoma， intrahepatic cholangiocarcinoma， mixed liver cancer were significantly higher than those in cirrhosis nodules and adjacent tissues. The difference between the groups was statistically significant（P<0.05）. In the three groups of liver cancer tissues， the positive rate of CD90 expression was significantly higher than that of EpCAM and CD133， but the expression of CD3 in different types of liver cancer tissues was not statistically significant（P>0.05）. The proportion of poorly differentiated tumor， lymph node metastasis and clinical stage of stage Ⅲ/Ⅳ in patients with positive expression of EpCAM， CD133 and CD90 was significantly higher than that of patients with negative expression， and the median survival time in patients with positive expression of EpCAM， CD133 and CD90 was shorter than that of negative ones. The difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion Stem cells are highly expressed in primary liver cancer， but the positive rates in different types of liver cancer tissues are close. Stem cells are involved in the occurrence and progression of liver cancer， which is one of the signs of poor prognosis.

[Key words] Primary liver cancer; Stem cells; Expression; Prognosis

腫瘤干細(xì)胞學(xué)說提出后，在包括肝癌組織在內(nèi)的多種腫瘤組織中均有干細(xì)胞被純化和鑒定[1]。腫瘤干細(xì)胞是一類具有長期自我更新和多向分化能力的細(xì)胞，不僅有分化功能，還可以有效促進(jìn)相關(guān)治療藥物的藥物不良反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致不良預(yù)后[2-3]。對腫瘤干細(xì)胞的研究已成為目前臨床肝癌研究的熱點(diǎn)之一，既往認(rèn)為原發(fā)性肝癌的發(fā)生是成熟細(xì)胞去分化所致，但是近年來研究認(rèn)為其可能由干細(xì)胞分化不全或分化異常引起。對肝癌組織中的干細(xì)胞研究不僅可以分析其分布特點(diǎn)，還可進(jìn)一步探索肝癌的發(fā)病機(jī)制，并指導(dǎo)臨床治療。為此，本研究選取我院接診的患者，對不同類型的原發(fā)性肝癌組織中干細(xì)胞的表達(dá)及其預(yù)后進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2015年1月～2017年1月期間在我院接受治療的125例原發(fā)性肝癌患者的診治資料。選取患者的手術(shù)切除肝癌石蠟包埋組織，并根據(jù)組織類型的不同，將標(biāo)本分為肝細(xì)胞性肝癌、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌、混合型肝癌、肝硬化結(jié)節(jié)和癌旁組織，每組均25例。

1.2 方法

對標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測，采用EnVision法染色[4-5]，按試劑盒說明書方法操作。標(biāo)本以甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，用已知陽性切片作陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

根據(jù)切片上陽性染色的細(xì)胞占光鏡下全部腫瘤細(xì)胞的比例和顯色強(qiáng)度進(jìn)行結(jié)果判定[6-7]：陰性（-），無陽性染色細(xì)胞;弱陽性（+），陽性細(xì)胞數(shù)<10%，呈淺棕色;陽性（++），陽性細(xì)胞數(shù)占10%～50%，呈棕黃色;強(qiáng)陽性（+++），陽性細(xì)胞數(shù)>50%，呈深褐色。

1.3 觀察指標(biāo)

比較EpCAM、CD133和CD90在不同類型組織中的表達(dá)及其與臨床特征和生存期的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EpCAM、CD133和CD90在不同組織中的表達(dá)

肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌、肝細(xì)胞性肝癌和混合型肝癌中CD133、EpCAM、CD90的陽性率明顯高于肝硬化結(jié)節(jié)、癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CD90的整體陽性率明顯高于CD133、EpCAM的陽性率，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 肝細(xì)胞性肝癌、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌和混合性肝癌中EpCAM、CD133和CD90與臨床特征的關(guān)系

肝細(xì)胞性肝癌、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌和混合性肝癌中EpCAM、CD90、CD133陽性表達(dá)患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例、腫瘤低分化比例和臨床分期為Ⅲ/Ⅳ期的比例明顯高于陰性表達(dá)者，提示其表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)（P<0.05），且表達(dá)陽性患者的中位生存期短于陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;其表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小等因素?zé)o關(guān)（P>0.05）。見表2。

3 討論

肝癌是一種常見的惡性腫瘤，臨床上通常采用肝臟切除術(shù)或肝臟移植治療該病，但術(shù)后仍有一定的幾率出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，帶來不良預(yù)后。對腫瘤干細(xì)胞的表達(dá)研究不僅可分析其與病理特征的關(guān)系，還有助于分析疾病的預(yù)后[8-9]。干細(xì)胞能夠自我更新和產(chǎn)生后代分化細(xì)胞，在正常肝組織損傷時(shí)可以完成自我快速修復(fù)。干細(xì)胞具有能夠產(chǎn)生兩個(gè)子代細(xì)胞和一個(gè)干細(xì)胞的不對稱分裂的能力。其在正常情況下處于長時(shí)間的靜止?fàn)顟B(tài)，但依舊具有干細(xì)胞的相關(guān)特性，因此可以有效躲避化療藥物的攻擊出現(xiàn)化療耐受的情況;另一方面，干細(xì)胞具有增強(qiáng)活性氧防御、DNA損傷修復(fù)、自我更新等的能力，會(huì)有放療抗拒的情況出現(xiàn)，這也是導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的主要原因。肝的干細(xì)胞主要存在于肝門管區(qū)Hering管中，有文獻(xiàn)指出，導(dǎo)致肝癌發(fā)生的主要原因是調(diào)控干細(xì)胞自我更新的信號(hào)通路失調(diào)，而許多肝癌組織中存在與干細(xì)胞分化功能相似的惡性生長的特性[8-11]。肝癌干細(xì)胞和肝臟干細(xì)胞在更新和分化時(shí)能表達(dá)表面標(biāo)志物，可利用這些標(biāo)志物對其進(jìn)行標(biāo)記[12-13]。

EpCAM、CD133和CD90均是常見的肝癌干細(xì)胞的特異性標(biāo)志物[14]。EpCAM通常在多數(shù)惡性上皮腫瘤細(xì)胞和少數(shù)正常上皮細(xì)胞表面表達(dá)。CD133是一種來源于人類胚胎骨髓、胎肝及外周血的細(xì)胞表面糖蛋白。CD90又稱為Thy-1，是甘油磷酸肌醇錨定的糖蛋白，也是微血管內(nèi)皮細(xì)胞活化的標(biāo)志之一;可以有效參與新生血管的形成，還可參與腫瘤的轉(zhuǎn)移[15-17]。在本研究中，肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌、肝細(xì)胞性肝癌和混合型肝癌組織的CD133、EpCAM、CD90陽性率明顯高于肝硬化結(jié)節(jié)和癌旁組織，且在不同類型肝癌組織中的表達(dá)基本一致，提示干細(xì)胞與肝癌有著較為密切的關(guān)系。此外，CD90的陽性率明顯高于CD133、EpCAM，說明CD90有更高的靈敏度[18]。臨床相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，此類細(xì)胞可能通過Hedgehog通路、Notch通路、TGF-β通路、EpCAM通路、Wnt/-catenin通路等導(dǎo)致肝臟干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化情況的發(fā)生。另一方面，并不是全部肝癌細(xì)胞都存在轉(zhuǎn)移能力，只有可在遠(yuǎn)處形成播散性腫瘤細(xì)胞，才被稱為轉(zhuǎn)移干細(xì)胞。

本研究顯示，EpCAM、CD133和CD90的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小等因素?zé)o關(guān)，但與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，且表達(dá)陽性的患者的中位生存期明顯短于陰性者。因此，EpCAM、CD133和CD90的表達(dá)與臨床病理學(xué)特征有密切關(guān)系，且陽性表達(dá)可作為不良預(yù)后的標(biāo)志，原因可能是抑制Hedgehog通路后，肝癌組織中CD44陽性肝癌干細(xì)胞與肝成纖維細(xì)胞數(shù)量減少，轉(zhuǎn)移灶也相應(yīng)減少[19-20]。

綜上所述，干細(xì)胞在原發(fā)性肝癌中高表達(dá)，但在不同類型的肝癌組織中的陽性率接近，干細(xì)胞參與了肝癌的發(fā)生和進(jìn)展，是不良預(yù)后的標(biāo)志之一。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 職曉松，訾曉淵，胡以平. 基于肝干細(xì)胞的肝癌生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，38（3）：209-214.

[2] 石軍梅，劉英，劉義冰，等. 抑制KLF8基因?qū)D133～+肝癌干細(xì)胞亞群比例、裸鼠體內(nèi)成瘤和肺轉(zhuǎn)移能力的影響[J]. 山東醫(yī)藥，2018，58（39）：25-29.

[3] 王萍，姬生威，朱曉東，等. QHF復(fù)方對人肝癌Huh7細(xì)胞生長凋亡、侵襲能力的作用及其對腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物的影響[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2018，（10）：1173-1176.

[4] 劉輝琦，舒雄，孫立新，等. 肝癌干細(xì)胞CD90～+和ESA～+亞群生物學(xué)特性研究[J]. 大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，（5）：394-398，407.

[5] 陳櫞，周元，尹必輝，等. 原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌YAP、FOX P1mRNA的表達(dá)及對患者預(yù)后的影響[J]. 中國臨床醫(yī)學(xué)，2018，25（4）：549-554.

[6] 劉利平，張悅，劉林森，等. 肝細(xì)胞肝癌組織中Per2、CD133蛋白的表達(dá)觀察[J]. 山東醫(yī)藥，2018，58（31）：60-62.

[7] 吳暢，王晶晶，楊麗，等. 肝癌組織AKR1B10的表達(dá)與HBV感染和預(yù)后的關(guān)系研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2018，28（16）：2419-2422.

[8] Aras M，Erdil TY，Dane F，et al. Comparison of WHO，RECIST1.1，EORTC，and PERCIST criteria in the evaluation of treatment response in malignant solid tumors[J]. Nucl Med Commun，2016，37（1）：9-15.

[9] 金濤，何前進(jìn)，毛偉明，等. 原發(fā)性肝癌患者癌旁組織中GP73、GPC3蛋白表達(dá)及意義[J]. 山東醫(yī)藥，2018，58（26）：41-43.

[10] 李天然，黃曉斌，楊志杰，等. 高低轉(zhuǎn)移潛能肝癌在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)前后的Gd-RGD成像[J]. 中國組織工程研究，2018，22（21）：3341-3348.

[11] 李志，張劍權(quán)，周帥. 原發(fā)性肝癌微創(chuàng)治療的現(xiàn)狀與研究進(jìn)展[J]. 海南醫(yī)學(xué)，2017，28（19）：3198-3201.

[12] 周四蓮，匡志鵬. CD90和CD44分子在人肝癌組織中的表達(dá)[J]. 中國癌癥防治雜志，2017，9（3）：185-189.

[13] 羅志剛，盧峰，陳濤，等. 不同組織類型原發(fā)性肝癌中干細(xì)胞分析[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13（24）：3489-3491.

[14] 王孟超，黃罡，周偉平. 基于SOX9的生物學(xué)研究及其在肝癌干細(xì)胞中的研究進(jìn)展[J].中國臨床醫(yī)學(xué)，2016， 23（6）：838-840.

[15] 李明非，曾勇，關(guān)華，等. 原發(fā)性肝癌手術(shù)治療的療效及預(yù)后情況的影響因素探討[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2016， 54（17）：17-20.

[16] 賀偉，母齊鳴，王剛，等. TACC3和p53蛋白在原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2018，（5）：420-425.

[17] 李翀，唐純娜，賀更生. 聯(lián)合金雀異黃素和TRAIL處理對SMMC-7721肝癌干細(xì)胞樣細(xì)胞凋亡的影響[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)生，2015，53（13）：23-25，28.

[18] 吳立勝，魯旭，耿小平，等. CD105/CD133篩選鑒定SMMC-7721株干細(xì)胞表面標(biāo)志物的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，50（2）：158-163.

[19] 徐永，吳立勝，方勝，等. 原發(fā)性肝癌患者外周血CD133 CD105細(xì)胞水平及意義[J]. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014， 35（12）：1382-1386.

[20] Oskarsson T，Batlle E，Massague J. Metastatic stem cells：Sources，niches，and vital pathways[J]. Cell Stem Cell，2014， 14（3）：306-321.

（收稿日期：2019-02-18）