長沙地區RhD陰性獻血人群血清學表型調查

陽智芬 曠開其 王清 鄧葉華 謝毓濱

[摘要] 目的 調查并了解長沙地區RhD 陰性獻血者血清學表型分布，為建立RhD陰性稀有血型庫提供依據。方法 對長沙血液中心2016年1月—2018年5月的獻血者標本375 710人份，使用微板法進行RhD 抗原篩查;進一步采用試管抗人球蛋白法對初篩陰性者進行確認;確認陰性者C、c、E、e表型鑒定則采用鹽水試管法。結果 375 710名獻血者中初篩RhD陰性1 483例，其中D變異型47例，確認RhD 陰性1 436例（96.83%）。確認陰性中A型482例（33.57%）， B型305例（21.24%），O型534例（37.19%），AB 型115 例（8.01%）;表型鑒定結果為ccdee 759例（52.86%），Ccdee 520例（36.21%），CCdee 78例（5.43%），ccdEe 50例（3.48%），CcdEe 26例（1.81%），ccdEE 2例（0.14%），CCdEe 1例（0.07%）。結論 對RhD陰性獻血者進行血清學表型鑒定，并建立RhD 陰性資料庫，對保障RhD陰性患者臨床用血安全及時有效具有重要意義。

[關鍵詞] RhD陰性;Rh表型;稀有血型庫

[中圖分類號] R446.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2020）01（a）-0155-03

[Abstract] Objective To investigate and understand the serological phenotype distribution of RhD-negative blood donors in Changsha， and to provide a basis for the establishment of a RhD-negative rare blood group bank. Methods A total of 375 710 blood donor specimens from January 2016 to May 2018 at Changsha Blood Center were screened for RhD antigen using the microplate method; further in vitro anti-human globulin method was used to confirm negative screening; confirmation The C， c， E， and e phenotypes of the negative patients were determined by the saline test tube method. Results In 375，710 blood donors， 1 483 RhD-negative patients were screened， including 47 D variants， and 1 436 RhD-negative patients （96.83%） were confirmed. Among the confirmed negative， 482 cases （33.57%） of type A， 305 cases （21.24%） of type B， 534 cases （37.19%） of type O， and 115 cases （8.01%） of type AB; 759 cases （52.86%） of ccdee were identified， 520 cases of Ccdee （36.21%）， 78 cases of CCdee （5.43%）， 50 cases of ccdEe （3.48%）， 26 cases of CcdEe （1.81%）， 2 cases of ccdEE （0.14%）， 1 case of CCdEe （0.07%）. Conclusion Serological phenotypic identification of RhD-negative blood donors and the establishment of a RhD-negative database are of great significance for ensuring the safe and timely use of blood in RhD-negative patients.

[Key words] RhD negative; Rh phenotype; Rare blood group bank

目前，國際輸血學會（ISBT）共確定了36個血型系統，其中Rh血型系統最具復雜性和多態性，在溶血性輸血反應及新生兒溶血方面的重要性僅次于ABO血型系統[1]。在Rh血型系統中，與臨床輸血關系密切的有5個抗原，其抗原性由強到弱依次為D、E、C、c、e，主要通過輸血、妊娠等免疫刺激產生相應抗體從而引起新生兒溶血病、溶血性輸血反應等[2]。據報道，RhD陰性在我國漢族人群中所占比例為0.2%～0.5%[3]，為稀有血型。為了給臨床RhD陰性患者及時提供合適的血液，并盡量減少同種抗體導致的免疫性輸血反應，該研究對長沙區2016年1 月—2018年5月的RhD陰性獻血者C、c、E、e表型進行鑒定，并分析其分布規律，完善并建立RhD陰性血型資料庫，現報道如下。

1? 材料與方法

1.1? 標本來源

長沙地區的無償獻血者，共375 710名，年齡18～55歲，經初篩并最終確認為RhD陰性者共1 436名。

1.2? 試劑與儀器

抗-D IgM（長春博德），抗-D IgG+IgM（Dominion Biologicals Limited，MILLIPORE），抗-D IgG（上海血液生物醫藥有限公司），抗-A、抗-B（長春博德），抗-C、抗-c、抗-E、抗-e（上海血液生物醫藥有限公司）抗人球蛋白IgG+C3d（上海血液生物醫藥有限公司），試劑均批檢合格并在有效期內使用。主要儀器：KUBOTA-KA2200 血清學離心機，AK03B血型儀（深圳愛康公司）。

1.3? 方法

RhD陰性初篩和ABO血型檢測均使用單克隆IgM 抗體，采用96孔微板法，酶標儀檢測OD值讀取結果，采用試管抗球蛋白試驗對初篩陰性者進行確認。試管法抗球蛋白試驗：50 μL 3%受檢者紅細胞懸液+50 μL IgG+IgM抗-D，1 000 g離心15 s，看結果并記錄，隨后37℃水浴30 min，用生理鹽水洗滌3次，最后一次離心后盡量棄掉上清液，加入50 μL抗人球蛋白試劑，1 000 g離心15 s，判讀結果。Rh表型檢測（鹽水試管法）：50 μL標準血清+50 μL 3%受檢者紅細胞懸液，搖勻后1 000 g離心15 s，判讀結果。

2? 結果

2.1? 獻血者RhD陰性確認結果

在375 710名獻血者中，初篩RhD陰性共1 483例，進一步的確認試驗表明，其中47例（3.17%）為RhD變異型，1 436例（96.83%）為確認RhD 陰性，RhD陰性占總獻血人群的0.38%。確認陰性中A 型482例（33.57%），B型305例（21.24%），O型534例（37.19%），AB型115 例（8.01%），見表1。

2.2? RhD陰性獻血者表型分布情況

1 436名RhD陰性獻血者表型主要為Ccdee（36.21%），ccdee（52.86%），其他表型分別為CCdee78例（5.43%），ccdEe50例（3.48%），CcdEe26例（1.81%），ccdEE2例（0.14%），CCdEe1例（0.07%），見表2。

2.3? RhD陰性獻血者C、c、E、e抗原分布

e抗原分布頻率最高，占99.86%，E抗原頻率最低，占5.50%，見表3。

3? 討論

該研究共初篩RhD陰性1 483例，其中D變異型47例（3.17%），比石家莊地區報到的6.84%略低[4]，可能是因為長沙血液中心近年來出于輸血安全角度考慮，對檢測出來的弱D或部分D獻血者進行了屏蔽。該研究表明，長沙地區的RhD陰性獻血人群占總獻血人群的0.38%，符合我國漢族人群中RhD陰性所占比例為0.2%～0.5%的特點，與蘇湘暉等[5]報到的岳陽地區獻血人群中RhD陰性頻率為0.33%十分接近，比張巧琳等[1]報到重慶地區獻血人群中RhD陰性所占比例為0.466%略低。

長沙地區獻血者中，RhD陰性表型主要為Ccdee? （36.21%），ccdee（52.86%），與國內上海、深圳等其他地區表型分布相近[1，6-7]，其他表現型頻率由高到低依次為：CCdee、ccdEe、CcdEe、ccdEE、CCdEe，此次調查結果中沒有CcdEE和CCdEE表現型。全國不同地區Rh表現型頻率的區別主要在于ccdEe和CCdee，濟南、北京等地區ccdEe頻率高于CCdee頻率[8-9]，而上海、重慶、長沙等地區CCdee>ccdEe[1]，可能有一定的南北地區差異。

該研究1 463名RhD陰性獻血者中e抗原頻率最高為99.86%，E抗原分布頻率最低，只有5.50%。D抗原的重要性已經逐漸受到了足夠的重視，RhD陰性的患者因輸血而產生抗-D抗體的情況越來越少，多數是RhD陰性孕產婦因妊娠免疫刺激而產生抗-D[10]。隨著研究的深入，除抗-D外的其他Rh血型系統的不規則抗體逐漸受到關注，尤其是抗-E。陽志勇等[11]研究發現128例抗篩陽性的患者中，Rh系統的不規則抗體共77例，占60.16%，其中尤以抗E為主（72例/77例）。有研究表明交叉配血ABO和RhD一致的同時，RhE抗原的匹配也十分必要[12]。對于需要多次反復輸血治療的RhD陰性患者，當再次輸入表型不一致的血液時，會增加因外來抗原刺激而產生抗體的機會，抗體的產生一方面會加大尋找相配合的血液的難度，另一方面會引起輸血反應，甚至死亡的，所以輸血時，不僅要考慮血液的相配合性，還要考慮Rh表型。長沙血液中心已經對長沙地區所有的RhD陰性獻血者進行了Rh分型，若能堅持采用Rh系統的5個抗原同型輸注，應該可以在很大程度上降低患者不規則抗體的幾率，尤其是Rh系統的，從而顯著提高了輸血療效，確保了輸血安全。

采供血機構對RhD陰性獻血者進行初篩、確認、抗體篩查及表型檢測，并建立稀有血型資料庫，此舉確保了特殊血型患者的臨床用血安全。

[參考文獻]

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[11]? 陽志勇，陳芝喜.Rh抗原分型檢測對反復輸血患者的臨床意義[J].中國免疫學雜志，2018，34（2）：267-269.

[12]? 葛艷玲，劉英.RhE抗原檢測及同型輸注在臨床輸血中的意義[J].臨床血液學雜志：輸血與檢驗，2018，31（1）：137-138.

（收稿日期：2019-10-09）