武漢地區0～3d新生兒末梢血網織紅細胞相關參數參考區間

胡衛紅， 張洪波， 岳道遠， 張 馳

（華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院檢驗科，湖北 武漢 430030）

眾所周知，臨床上在應對貧血的診斷和治療方面，作為反映紅骨髓造血功能的指標——網織紅細胞（reticulocyte，RET）及相關參數發揮著舉足輕重的作用，在實際臨床醫療決策中，必須依據實驗室檢測結果。健康人RET成分參考值會因性別、年齡或生活地域的不同而有所差異，因此建立適用于本地區特定年齡階段的參考區間非常重要。雖然國內有較多關于RET參考區間的研究[1-3]，但針對新生兒RET參考區間的研究尚為空白。本研究對武漢地區0～3 d新生兒RET及相關參數的生物參考區間進行初步調查，以期對新生兒貧血性疾病的診療提供一定的依據。

1 材料和方法

1.1 一般資料

選取2018年6—12月在華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院新生兒科出生時間≤72 h健康足月新生兒406名，其中男228名、女178名，剖宮產所生276名，順產所生130名，出生時體質量為2 800～3 800 g；樣本均來自武漢地區，均為漢族人。入選條件為母親孕期產檢正常，產程/剖宮產手術順利，產婦妊娠期間無血液疾病、感染性疾病、自身免疫系統疾病、風濕類疾病、糖尿病、特殊藥物使用史等；妊娠期間胎兒發育正常，各項檢查指標正常，出生時孕周為37～41周，1～5 min Apgar評分8分以上[4]；新生兒無各種原發性血液病、感染性疾病、肝腎疾病及腫瘤，且在醫護人員指導下合理喂養，排泄正常，體質量變化未見明顯異常。

1.2 儀器與試劑

XN-20全自動五分類血液分析儀（日本Sysmex公司）及原裝配套試劑、校準品、質控物。BD Microtainer彈片式采血針、含乙二胺四乙酸二鉀抗凝劑末梢采血管（美國Becton Dickinson公司）。研究進行前嚴格按中國合格評定國家認可委員會要求對儀器進行日常保養、性能評估、校準、室內質控及室間質評[5]，以保證檢測儀器性能合格、結果準確。

1.3 方法

采集0.5 mL新生兒足跟或耳垂等處末梢全血，收集于含乙二胺四乙酸二鉀末梢采血管中，采血方式嚴格按照《全國臨床檢驗操作規程》的要求進行[6]；抗凝全血于室溫保存，2 h內完成檢測，檢測項目包括網織紅細胞比例（the percentage of reticulocyte，RET%）、網織紅細胞絕對值（the absolute value of reticulocyte，RET#）、高熒光強度網織紅細胞比例（high fluorescent ratio，HFR%）、中熒光強度網織紅細胞比例（middle fluorescent ratio，MFR%）、低熒光強度網織紅細胞比例（low fluorescent ratio，LFR%）、網織紅細胞血紅蛋白含量（reticulocyte hemoglobin，RET-He）6項。檢測原理為鞘流直流阻抗法。同時采用激光流式細胞術結合核酸熒光染色技術進行檢測。操作流程嚴格遵循實驗室制訂的標準操作規程，選擇手動進樣模式CBC+RET檢測通道進行檢測。

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統計分析，先對總體數據進行Kolmogorov-Smirnov（K-S）正態性檢驗，計量資料以表示，參考區間以.96s進行計算（95%可信區間），組間比較采用獨立樣本t檢驗；非正態分布數據以中位數（M）四分位數（P25～P75）表示，參考區間以P2.5～P97.5表示，組間比較采用Kruskal-Wallis H秩和檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。采用SPSS 19.0軟件計算所有數據的標準化得分，把標準化得分絕對值＞3的數據作為離群值剔除。有差異組分別計算參考區間，無差異組則合并計算參考區間。

2 結果

2.1 RET及相關參數總體結果

本研究共納入新生兒406名，剔除離群值后共399名，其中男222名（55.6%）、女177名（44.4%）。RET%、RET#、HFR%、MFR%、LFR%、RET-He總體結果見表1。K-S檢驗顯示所有數據均成正態分布（P＞0.05）。

2.2 按性別分組比較結果

0～3 d健康新生兒RET及相關參數按性別分組結果見表2。獨立樣本t檢驗顯示，男性組與女性組除HFR%外，其他5項參數差異均無統計學意義（P＞0.05）。

表1 399名0～3 d健康新生兒RET相關參數總體結果

表1 399名0～3 d健康新生兒RET相關參數總體結果

項目 結果 P值RET% 4.35%±0.98% 0.215 RET# （0.267±0.066）×1012/L 0.201 HFR% 17.08%±5.93% 0.845 MFR% 19.10%±3.37% 0.821 LFR% 63.82%±7.90% 0.392 RET-He （32.59±2.08）pg 0.136

表2 人0～3 d健康新生兒RET相關參數按性別分組比較

表2 人0～3 d健康新生兒RET相關參數按性別分組比較

組別 例數 RET%/% RET#/×1012/L HFR%/% MFR%/% LFR%/% RET-He/pg男性組 222 4.29±0.97 0.264±0.066 18.19±5.99 18.95±3.37 62.86±7.85 32.56±2.22女性組 177 4.42±0.99 0.271±0.066 15.70±5.57 19.29±3.38 65.01±7.83 32.63±1.89 t值 -1.285 -1.071 4.251 -0.981 -2.153 -0.373 P值 0.200 0.285 0.000 0.327 0.789 0.709

2.3 按出生天數分組比較結果

0～3 d健康新生兒RET及相關參數按出生天數分組（0～1 d組、1～2 d組、2～3 d組）結果見表3。采用q檢驗對3個組均值進行差異性分析，結果顯示，2～3 d組與0～1 d組、1～2 d組新生兒RET%、RET#、MFR%存在差異（P＜0.05）；HFR%、LFR%、RET-He 3個組間均存在差異（P＜0.05）。

2.4 RET及相關參數的參考區間

將性別無差異項目合并計算參考區間，出生天數有差異項目分別計算參考區間，除HFR%按年齡和性別2層因素分為6組，其他5項參數按出生天數分為3組，以.96s表示參考區間。見表4。

表3 不同出生天數健康新生兒RET相關參數比較

表4 0～3 d健康新生兒RET相關參數參考區間

2.5 與其他文獻RET及相關參數參考區間比較

本研究武漢地區0～3 d新生兒RET相關參數與其他各年齡階段人群進行比較[2，6，13-14]，新生兒RET%、RET#參考區間明顯高于其他各年齡階段，MFR%、HFR%等幼稚RET比例也遠大于其他年齡階段。相關RET-He參數各年齡層研究不多，從部分文獻來看[1-2，9-10]，新生兒RET-He參考區間為28.51～36.67 pg，與成人基本一致。見表5。

表5 本研究的新生兒RET相關參數參考區間與其他文獻比較

3 討論

貧血在臨床上非常常見，一般把血紅蛋白低于參考區間下限者認定為貧血。新生兒同樣也可發生貧血，而新生兒貧血原因很多，如產婦因胎兒-胎盤出血等產前出血可導致新生兒失血性貧血，母子ABO血型不合可導致新生兒溶血性貧血，孕婦妊娠期間缺鐵可導致新生兒缺鐵性貧血，新生兒造血干細胞異常導致紅細胞生成低下可引起新生兒貧血。如何正確診斷與分析新生兒貧血的原因、新生兒RET及相關參數檢測成為關鍵。RET是介于晚幼紅細胞和成熟紅細胞之間的一個階段，被認為是尚未成熟的無核紅細胞，胞質內殘留著部分嗜堿性物質——核糖核酸，和原卟啉一起組成胞內網狀結構，并可通過活體煌焦油藍染色呈現出來，被稱為RET。因RET可反映紅骨髓造血功能，增生性貧血時數量增加并被釋放入血，非增生性貧血時數量不變或減低，所以常用于貧血及相關疾病的診斷與鑒別診斷[11-12]。

現階段RET及相關參數的參考區間還以廠商推薦的健康成人參考區間為主，而出生72 h的新生兒的RET參考區間尚未提及。本研究選取406名出生72 h健康新生兒，采集其末梢血檢測RET相關參數，并統計獲得適用于武漢地區的新生兒RET參考區間。本研究結果顯示，0～3 d健康新生兒RET參數，可能因不存在性激素影響，除HFR%外，RET%、RET#、MFR%、LFR%、RET-He共5項參數男女性別間差異無統計學意義（P＞0.05），這與健康成人明顯不同（性別間存在顯著差異）；且新生兒與健康成人RET相比[1-2，7-10]，除RET-He外，其余5項參數數值均明顯高于成人，提示新生兒的骨髓造血功能比成年人明顯活躍。隨著新生兒出生時間的延長，所有RET均表現出明顯改變，如RET%、RET#到第3天時表現出一定程度的降低，而RET-He降低則更為明顯（3 d內每天都有減低）。幼稚RET HFR%、MFR%均快速下降，HFR%降低更為明顯（從20%下降至10%）。而LFR%快速增高，從60%左右升至70%，說明新生兒RET不但數量多，且更為幼稚，但隨著出生時間的延長，RET迅速成熟分化，一部分幼稚RET轉變為較成熟RET，而另一部分較成熟RET則轉變為成熟紅細胞。反映機體鐵代謝情況的RET-He[13]，新生兒與其他各年齡段人群相比，水平基本一致，提示健康個體在各年齡階段，體內鐵代謝水平都較為穩定。本研究針對出生72 h內健康新生兒的研究，已盡量克服健康個體篩查及標本留取、抗凝處理、保存等多方面的困難，但仍因入選標本量較少、研究對象年齡覆蓋面較窄而存在某些遺憾，有待進一步的研究來完善數據。