枳實黃酮對照提取物研究及其在枳實藥材質量控制中的運用研究

朱亞男 秦寶福

摘要：目的：分析枳實黃酮對照提取物研究及其在枳實藥材質量控制中的運用。方法：對枳實黃銅中的二氫黃酮類及揮發油類的分離進行分析。根據蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷的線性關系，對其質量控制進行分析。結果：通過枳實黃酮對照提取物的研究分析，蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷在各自范圍內的峰面積良好，測定系數在0.95以上。結論：通過枳實黃酮對照提取物的枳實質量控制方法分析，可以有效提高枳實藥材質量的控制效果，而且也可以為中藥材料的制備及使用提供支持。

關鍵詞：枳實黃酮;對照提取物;枳實藥材;質量控制

枳實作為傳統的中藥，主要是蕓香料植物酸橙的干燥幼果，其在中醫范疇中具有治療飲食積滯、直腸或是子宮脫垂的問題。而黃酮類化合物作為植物中一類有活性的二級代謝產物，在蕓香柚皮苷那種廣泛存在，可以對腸平滑肌有雙向性的調節作用，對維生素C起到保護作用，而且也會影響人體的內分泌及代謝情況，安全性較高。研究中，為了更好地提高枳實的質量控制，選擇蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷制備柚皮苷黃酮對照提取物，分析枳實黃酮對照提取物研究及其在枳實藥材質量控制中的運用價值，具體結果如下：

1 枳實黃酮及提取方法

1.1 枳實黃酮

所謂枳實黃酮主要是指含有脂溶性柑橘類的生物黃銅，其中的脂溶性柑橘類黃酮存在著柑橘類所特有的聚甲氧基類黃酮類，其比其他類的黃酮活性強，將其運用在中醫領域治療中，可以達到積滯內停、痞滿脹痛、瀉痢后重、大便不通的目的。其理化性質如下：第一，黃酮類化合物多數為結晶性的物質，少數為無定型的粉末，大部分中含有酚羥類物質，而且，在分子中通常存在著碳基，其位置與交叉共軛，構成了黃酮類的化合物質。第二，對于枳實黃酮中的黃酮苷元物質，分子成分中含有雙氫黃酮、黃烷醇等。第三，由于黃酮類化合物存在著較強的熒光特點，在紫外燈的環境下呈現出黃綠以及暗棕色的特點。第四，枳實中的二氫黃酮類以及揮發油類具有一定的抗抑郁以及促進胃動力的作用，將這種物質運用在中藥療中，會實現抗菌、抗病毒，以及抗炎等治療的目的，充分滿足中藥使用及治療的需求。

1.2 枳實黃酮的提取方法

1.2.1水提法

在黃酮類營養物質提取中，通過水提法可以提高物質的提取質量。在水提法使用中，應該充分考慮到水量、提取溫度以及提取時間等。對于該種提取方法而言，存在著工藝成本低以及安全性高的優勢，但是，由于水的極性大，容易將物質中的蛋白質以及糖類溶解，容易出現腐蝕的問題。因此，在枳實黃酮提取中，應該根據實驗的特點以及操作環境，合理選擇提取技術。

1.2.2堿性水或堿性西醇提取法

通過對黃酮類化合物的分析，其存在著較多的酚羥基，通過堿性水或堿性稀釋提純，可以得到氫氧化鈉以及石灰水氫氧化鈣等水溶液，但是，在該種提純方法使用中，存在著雜質較多的問題，不利于達到純化的目的。而通過石灰水的使用，可以增強物質純化的處理效果。

1.2.3有機溶劑提取方法

對于這種方法而言，主要利用乙醇，甲醇等物質，這些物質對設備的要求簡單，而且單率較高，在具體的運用中，會使用冷浸法以及回流法，在不同原料情況下獲取的結果有所不同。

1.2.4酶法提取工藝

對于該種技術而言，主要是在傳統提取工藝上所形成的，利用植物藥材細胞壁的組成成分以及與酶反應高度專一的特點，通過酶的融合，可以有效將細胞壁的成分溶解，從而達到提純的目的。

2 實驗儀器

本次實驗使用的器材包括：循環水式多用真空泵;數控超聲波清洗器;高效液相色譜儀;穩定性試驗箱;Sunfire C18色譜柱（4.6mm250mm，5m）;Sartorious BT25S型十萬分之一電子分析天平[1]。

材料包括：蕓香柚皮苷、柚皮苷對照品、橙皮苷對照品、甲醇等。

3 實驗方法及結果

3.1 對照物提取標定

（1）使用Sunfire C18色譜柱，利用流動相位甲醇-水-乙醇，流速始終保持在1mL/min，柱溫度為35℃，進樣量均為10L。

（2）對照品的溶液制備中，將不同對照品種加入甲醇，選擇相通質量的對照品進行溶液制備。例如，1ml的蕓香柚皮苷加入甲醇后得到的溶液為20.34g、1ml的柚皮苷加入甲醇后得到的溶液為20.59g[2]。

（3）供試品的溶液制備

選擇枳實黃酮對照提取物（15mg），精密稱定結束后放在25ml的容量瓶之中，之后利用甲醇進行超聲波處理，維持時間為10min，最后使用甲醇稀釋并搖勻。

4 對照提取物標定

選擇枳實黃酮對照提取物（S1、S2、S3），得到蕓香柚皮苷、柚皮苷以及橙皮苷的含量如表1所示[3]。

4.1 對照提取物在枳實藥材中的質量控制

通過對枳實黃銅對照提取物對其在枳實藥材中的質量控制進行分析。

（1）對照提取物溶液制備

選擇枳實黃酮對照提取物，對其進行精密的測定，將22.50mg的提取物放置在50ml的容量瓶之中，通過甲醇處理，將溶液稀釋到刻度狀態并搖勻，之后按照同樣的方法進行蕓香柚皮苷以及柚皮苷等溶液的提取。

（2）供試品溶液的制備

通過對枳實藥材制備狀況的分析，應該使用50mg的枳實藥材粉末加入70%的乙醇，之后利用超聲波進行處理，之后在進行質量的稱定。

（3）線性分析

在枳實黃酮對照提取物的質量控制中，需要精密提取36.75mg的對照物放在25ml的容器瓶之中，并加入甲醇，將其溶解到固定刻度之后搖勻處理。之后按照同樣的方法制備對照提取物溶液[4]。

蕓香柚皮苷的線性回歸方程為：Y=1.584106X-1.152104，r=0.9999，其中的線性范圍在0.0358-0.2760g的范圍內。

橙皮苷的線性回歸方程為：Y=1.6847106X+4.060103，r=0.9995。其中的線性范圍在0.1072-0.5360g的范圍內。

（4）精密度分析

枳實藥材粉末50mg，對其進行精密稱定，之后計算色譜峰峰面積，結果分別為0.82%、1.08%以及1.22%。

（5）重復性考察

在重復性考察及實驗的過程中，應該按照蕓香柚皮苷、柚皮苷以及橙皮苷測定含量，同RSD計算方法的運用，得到重復性的考察結果為1.95%、1.74%以及1.88%。

（6）枳實藥材含量的測定

在枳實藥材測定中，需要對精密度進行稱定處理，并按照植被供試品對枳實黃銅進行對照，利用OriginPro9.1統計軟件可以發現，蕓香柚皮苷、柚皮苷以及橙皮苷的系數均大于0.95，表面該種測定方法具有一致性。因此，在枳實黃銅對照物提取物分析中，可以代替單體對照品評價枳實藥材的質量。

5 結果

通過對實驗過程的分析可以發現，70%的乙醇提取物加水分散后存在著不溶物，通過HPLC含量的測定，發現水不溶物中的柚皮苷含量相對較高。在對單體對照品以及枳實黃酮對照提取物的對比中，通過對不同色譜柱Sunfire C18的分析，不同流動相中的枳實黃酮色譜峰值的影響結果不同，在使用HPLC含量測定中，具有準確度高以及穩定性強的檢測優勢。

6 結語

枳實運用在中醫范疇中，可以治療積滯內停以及大便秘結的問題，枳實中的二氫黃酮類以及揮發油類具有一定的抗抑郁以及促進胃動力的作用，因此，在枳實藥材質量控制的過程中，應該根據枳實藥材的特點，仔細分析藥物的屬性及基本特征，將二氫黃酮類成分的含量作為核心標準，以便更好地控制藥材的質量，規范中藥管理的可行性及質量性，充分發揮枳實藥材的安全價值。

參考文獻：

[1]賈富霞，王秀娟，羅容.酸橙枳實HPLC指紋圖譜方法研究及6種黃酮類藥效組分的含量測定[J].中華中醫藥學刊，2016（12）：103-106.

[2]王章偉，王振，邱小燕.HPLC法同時測定枳實總黃酮苷提取物中3個香豆素類成分含量[J].江西中醫藥，2018，（11）：57-60.

[3]李曉婷，李純.基于有效物質基礎的枳實藥材的質量控制體系研究[J].北京中醫藥大學學報，2013（10）：696-700.

[4]陳建真，袁華，陳彬.枳實和枳殼中黃酮苷類成分的比較研究[J].中國中醫藥科技，2015（5）：53-54.