探討細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化在肺腺癌惡性胸腔積液的診斷作用，并分析胸腔積液中表皮生長因子受體(EGFR)的表達(dá)及臨床意義

張云鶴，崔紀(jì)麗，宋慧琴

（河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 開封 475001）

肺癌屬于臨床常見的惡性腫瘤，發(fā)病初期無顯著臨床癥狀，確診后以發(fā)展為肺癌晚期。近幾年臨床常以分子靶向藥物進(jìn)行有效治療，臨床研究顯示，惡性腫瘤的高表達(dá)和EGFR存有一定聯(lián)系。此類疾病治療的重要靶點(diǎn)為EGFR抑制劑。選擇治療方案時需通過相關(guān)指標(biāo)。肺癌常見的并發(fā)癥之一為胸腔積液，特別是肺腺癌。進(jìn)而本次針對肺腺癌惡性胸腔積液應(yīng)用免疫組化聯(lián)合細(xì)胞蠟塊進(jìn)行診斷價值進(jìn)行了研究，同時分析EGFR在胸腔積液中的表達(dá)意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料

本次實驗對象全部選自本院2017年7月至2019年4月期間收治的60例肺腺癌患者，40例男患，20例女患，年齡均值為（50.4±2.7）歲。

1.2 方法

選用L858R單克隆抗體、抗E746-A750del、鼠抗人EGFR單克隆抗體。①胸腔積液細(xì)胞蠟塊制作方式：在容器放置250mL新鮮胸腔積液，閱片選擇巴氏染色鏡下進(jìn)行，對剩余胸腔積液進(jìn)行離心處理，將10mL中性甲醛4%置入向沉淀，靜置一小時后再次離心處理，在擦鏡紙上放置底部沉淀物，包好使用不同濃度酒精開展脫水操作，最終形成石蠟細(xì)胞塊。免疫細(xì)胞化學(xué)方法：細(xì)胞蠟塊使用步法染色并切為3μm切片，以60℃烘干一小時，染色后DAB顯色，并用蘇木素復(fù)染，固封選用中性樹膠，通過顯微鏡觀察。

1.3 觀察指標(biāo)

EGFR陽性表達(dá)：細(xì)胞膜呈棕褐色或者棕黃色，陽性反應(yīng)也包括顆粒染色、發(fā)散細(xì)胞質(zhì)。（-）為陽性細(xì)胞低于5%或者未見陽性細(xì)胞，（+）為陽性細(xì)胞數(shù)為5至25%，（++）為陽性細(xì)胞數(shù)25至50%，（+++）為陽性細(xì)胞數(shù)高于50%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

此次實驗數(shù)據(jù)通過統(tǒng)計軟件SPSS19.0進(jìn)行處理，計數(shù)資料以[n(%)]表示，檢驗值為x2，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2 結(jié) 果

2.1 肺腺癌細(xì)胞EGFR表達(dá)詳情

EGFR（+++）為38.33%（23/60）、（++）為40.00%（24/60）、（+）為18.33%（11/60）、（-）為1.67%（1/60）。

2.2 肺癌組織蠟塊免疫組織染色

在突變檢出率上，L858R為11.67%（7/60）、746-A750de為10.00%（6/60），和臨床金標(biāo)準(zhǔn)相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；金標(biāo)以ARMS為主，對L858R突變、E746-A750de進(jìn)行肺癌組織蠟塊免疫組織化學(xué)染色染色，敏感度為87.50%（7/8）、100.00%（6/6），特異性全部為100.00%。

2.3 胸腔積液蠟塊免疫組織化學(xué)染色

在突變檢出率上，L858R為20.00%（12/60）、746-A750de為13.33%（8/60），和臨床金標(biāo)準(zhǔn)相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；金標(biāo)以ARMS為主，對L858R突變、E746-A750de進(jìn)行肺癌組織蠟塊免疫組織化學(xué)染色染色，敏感度為87.50%（7/8）、85.71%（12/14），特異性全部為100.00%。

3 討 論

大部分晚期肺癌患者主要以化療或者靶向藥物治療。受體型酪氨酸激酶之一為EGFR，屬于一種靶向藥物目標(biāo)點(diǎn)。EGFR常見突變分別為19外顯子和在21外顯子的746-A750缺失突變和L858R突變。酪氨酸激酶抑制劑對EGFR突變型敏感性高，進(jìn)而治療是否選擇酪氨酸激酶抑制劑需以基因突變決定。在石蠟標(biāo)本中可進(jìn)行EGFR突變檢測，而一些不易獲取活檢標(biāo)本或者肺癌晚期的活檢標(biāo)本患者，檢測EGFR所用的標(biāo)本主要來自胸腔積液。大量腫瘤細(xì)胞集聚胸腔積液細(xì)胞蠟塊內(nèi)，屬于檢驗EGFR的新標(biāo)本。而組織學(xué)切片的形態(tài)和細(xì)胞石蠟切片更為相近，能夠?qū)⒔M織學(xué)結(jié)構(gòu)清晰顯示。

在本次研究結(jié)果中，肺癌組織蠟塊免疫組織染色和胸腔積液蠟塊免疫組織化學(xué)色的L858R、E746-A750de的突變檢出率，和金標(biāo)準(zhǔn)相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。均有較高的特異性和敏感度。這就說明EGFR突變可通過胸腔積液細(xì)胞蠟塊進(jìn)行有效篩查。