TOC法在體外診斷試劑清潔驗證實施中的要點

王賽楠

（北京北方生物技術研究所有限公司，北京 100076）

《藥品生產質量管理規范》已經于2011年3月1日實施，GMP第七章 第一百四十三條規定：制藥企業的生產設備應制定詳細的使用和清潔操作規程，清潔操作規程應當規定具體而完整的清潔方法、清潔用設備或工具、清潔劑的名稱和配制方法。清潔方法應當經過驗證，證實其清潔效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗證應當綜合考慮設備使用情況，所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置，殘留物的性質和限度、殘留物檢驗方法的靈敏度等因素[1]。

體外診斷試劑現有的清潔驗證方法，大多采用化藥的清潔驗證模式，既將抗原或抗體作為目標殘留物。但是體外診斷試劑的基質多數為小牛血清或含有牛血清白蛋白的緩沖液，這兩種基質成分具有多樣性、未知性，而且抗原抗體的成分含量低等特點，只單一的測定抗原抗體的殘留量并不能體現出清潔的程度。現有的體外診斷試劑清潔驗證目前主要存在兩大問題:第一，只檢測殘留物中的抗原抗體等含量，該方法只能證明檢測成分清潔程度，不能證明設備上未知成分的清潔程度；第二，現有的檢測方法達不到所需的精度要求，誤差較大。考慮到體外診斷試劑主要成分都是有機物，因此將標準品凍干粉末做為活性成分，采用TOC法完成清潔驗證。

1 “C”碳含量的測定

在我單位某產品中，其主要成分為抗原，牛血清白蛋白，以及無機鹽等，我們無法根據分子式計算出其中”C”碳含量的百分比。通過查詢資料，發現目標物的濃度和TOC值之間的關系，公式為:A = (XTOC － 4σ)/C。式中，A 代表目標物質碳百分含量;XTOC 為 TOC 結果平均值;σ 標準偏差;為保證清潔驗證結果可靠，選取較為嚴格的 4σ 下線區間進行計算;C 為目標物質濃度。[2]通過測量多份產品的TOC值，可以根據上面的公式計算出其中碳含量。

2 確定殘留物的可接受標準

在驗證清洗過程時，要核實確保對沖洗水中的殘留物或污染物進行直接測量。只是簡單檢測沖洗水的質量而不檢測潛在的污染物的做法是不被認可的[3]。

（一）目前制藥業普遍接受的限度標準[4]：①微粒濃度：以目檢為依據的限度，如不得有可見的殘留物。（4 ug/ cm2的結果是可接受的）；②分析檢測濃度：10ppm (1/1000 000) ；③生物活性的限度：正常治療劑量的1/1000。

（二）因體外診斷試劑不會進入人體內，所以確定可接受標準為10ppm，既待清除產品（X）在后續產品中（Y）出現不超過 10mg·kg-1。假設，我們下一批產品為Y，產量為4kg，則在下一批產品中的X的含量不能超過40mg。采取棉簽擦拭法取樣，殘留限度（C）=總殘留/總接觸面積，單位為(mg/100cm2)。每100cm2的面積上殘留物用VL純化水溶解，得到最低殘留限度D=C/V。

（三）根據目標物質碳百分含量，即可得到清潔驗證TOC 限度值E（mg/L）= D*A 。式中:E代表清潔驗證 TOC限度值；A 代表目標物質碳百分含量。

3 棉簽擦拭法回收率的計算

操作方法：將已知濃度的殘留物溶液以受控的方式涂布在材質試樣上，自然晾干，采用清潔驗證方案中的相同的擦拭方法進行取樣。選用合適的溶劑提取拭子上的殘留，然后檢測提取液中殘留物的數量。回收量與材質試樣上的加入量之比就是取樣百分回收率。

實施次數：至少需要兩個人進行，每人需要重復三次。

結果：任意一個擦拭取樣人員的最低平均回收率最為棉簽擦拭法的回收率。

可接受標準：回收率≥50%，重現性RSD≤20%。

因為 TOC法屬于非專屬性檢測法，通過檢測水中有機碳的含量來推測水中有機物雜質的含量，這種方法被廣泛應用于清潔驗證中，而且 TOC 檢測方法具有省時，省力，節能減排的優勢。它表征所有有機物的污染程度，為清潔驗證提供了有力的安全性和可靠性保障。