PRF在臨床中的進(jìn)展

李鑫淼 張頌頌 張浩

【摘要】目前，隨著富含血小板的纖維蛋白（PRF）的開發(fā)大大簡化了血小板濃縮生物材料（如富血小板血漿（PRP））的制備過程，并促進(jìn)了它們的臨床應(yīng)用。PRF的臨床有效性已經(jīng)在臨床研究中得到證實(shí)，那么改良型富含血小板的纖維蛋白（A-PRF）在臨床中的效果如何？是否有進(jìn)一步的提升？本文將針對A-PRF在臨床中的應(yīng)用及療效，為合理應(yīng)用A-PRF提供科學(xué)參考與臨床指導(dǎo)，作一綜述報(bào)道。

【關(guān)鍵詞】富血小板纖維蛋白;改良型富血小板纖維蛋白;生物學(xué)特性;制備技術(shù);臨床應(yīng)用

引言：

2001年法國科學(xué)家Choukroun提取出第二代血小板濃縮制品富血小板纖維蛋白（PRF），它的出現(xiàn)徹底改變了人們對血小板濃縮物的認(rèn)知，因?yàn)樗c第一代血小板濃縮物（PRP）有著明顯的差距。A-PRF作為PRF的衍生物，其制備方法、保留時(shí)間、纖維蛋白結(jié)構(gòu)以及生物學(xué)特性有著不同。

1 A-PRF的生物學(xué)特性

A-PRF作為PRF的衍生物，首先要清楚PRF的生物學(xué)特性。血小板是由巨細(xì)胞在骨髓中形成的，是一種盤狀和環(huán)狀結(jié)構(gòu)。一般它們的壽命為8至10天，并且細(xì)胞質(zhì)包含許多顆粒，其含量在活化時(shí)被分泌。例如：α-顆粒含有許多蛋白質(zhì)，血小板特異性的（β-血小板球蛋白）或非血小板特異性的（血小板反應(yīng)蛋白，纖維蛋白原和其他凝血因子，生長促進(jìn)劑，纖維蛋白溶解抑制劑，免疫球蛋白等）。因此，PRF中的血小板細(xì)胞因子定量是理解這種生物材料的重要步驟，因?yàn)檫@些可溶性分子是關(guān)鍵的炎癥和愈合介質(zhì)。實(shí)際上，要確定其非常重要的是它們與纖維蛋白基質(zhì)結(jié)合的方式，而不是定量分析。

血小板細(xì)胞因子：1.轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β）是一個(gè)由30多個(gè)成員組成的家族。它是產(chǎn)量最高的，盡管它在增殖方面的影響是高度可變的，但是對于大多數(shù)細(xì)胞類型，它是所有細(xì)胞因子中最強(qiáng)大的。例如，它已證明可以抑制破骨細(xì)胞而刺激成骨細(xì)胞的增值。PDGF（血小板衍生的生長因子）是增殖和存活的重要調(diào)節(jié)劑。根據(jù)其特定受體的分布，它們能夠容易地誘導(dǎo)刺激這些細(xì)胞的發(fā)育。IGF軸：細(xì)胞保護(hù)劑。胰島素樣生長因子（IGF）I和II是大多數(shù)細(xì)胞類型增殖和分化的正向調(diào)節(jié)劑。PRF基質(zhì)包裹了血液和血小板中的糖胺聚糖（肝素，透明質(zhì)酸），糖胺聚糖與小的循環(huán)肽具有很強(qiáng)的親和力，并且具有強(qiáng)大的能力支持細(xì)胞遷移和愈合過程。研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)所述細(xì)胞因子均未在上清液或滲出液中發(fā)現(xiàn)。即使在血清滲出后，它們?nèi)员焕г赑RF纖維蛋白基質(zhì)中，暗示著這些分子在纖維蛋白聚合物分子結(jié)構(gòu)中的緊密結(jié)合。相比于PRF，A-PRF組織相容性好、無排異反應(yīng)、質(zhì)地柔韌、富有彈性，其具有更立體的三維結(jié)構(gòu)，包括血小板和白細(xì)胞（90%的血小板和50%的白細(xì)胞）的細(xì)胞數(shù)量有所增加。與PRF相比，可釋放更高濃度的生長因子，包括PDGF，VEGF，IGF，F(xiàn)GF，TGF-β。A-PRF可以使細(xì)胞募集的細(xì)胞因子水平的增加和利于成骨細(xì)胞分化的單核細(xì)胞的水平升高。A-PRF中的白細(xì)胞有助于消除壞死碎片，從而防止在缺損部位感染。它們還通過細(xì)胞因子和趨化因子的上調(diào)來幫助募集再生部位天然的未分化間充質(zhì)細(xì)胞和來自骨膜層的全能細(xì)胞。

2 A-PRF的制備技術(shù)

GHANAATI等于2014年通過低速延時(shí)離心自體靜脈血的方法制備了第三代血小板制品：改良型富血小板纖維蛋白（A-PRF）。用采血管取靜脈血9～10ml，然后將采血管迅速置于低速離心機(jī)（Eppendorf 5810R，德國）離心，1500 r/min，14 min。離心后可見血液分3層，中間的淡黃色凝膠即A-PRF。通過一些實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)血小板和血漿含量的保存取決于所用的壓縮方法。在臨床應(yīng)用中，通常將中層PRF凝塊用干紗布擠壓制膜，然后將較厚的富含血小板的纖維蛋白（PRF）壓縮以適合植入部位。但是，人們擔(dān)心這種壓縮是否會破壞血小板以及是否會使大量有價(jià)值的生長因子丟失。為了支持這種可能性，Burnouf證明了實(shí)際上被認(rèn)為與組織再生有關(guān)的大量生長因子可以通過擠壓來去除。

因此，人們開始選用特定的壓縮機(jī)制膜，與用干紗布壓縮的PRF膜相比，在用壓縮機(jī)制備的PRF（C-PRF）膜中血漿含量，3D-纖維蛋白網(wǎng)和血小板的保存更加完整。在測試的生長因子中，C-PRF含有較高水平的PDGF亞型，并顯著刺激了細(xì)胞增殖和新血管形成。C-PRF可用于移植，同時(shí)最大程度地減少生物活性因子的損失。通過標(biāo)準(zhǔn)化制膜，與PRP相比，在A-PRF中白細(xì)胞和血小板沿膜的整個(gè)表面分布良好，并且不被視為團(tuán)塊。基質(zhì)形成良好，在它們之間存在一些孔隙，這將使血管增生，還會持續(xù)釋放生長因子。這些研究發(fā)現(xiàn)，會使A-PRF發(fā)揮出更大的價(jià)值，從而更好的服務(wù)于臨床。

3 A-PRF在臨床中的應(yīng)用

血小板濃縮技術(shù)的熱潮就始于口腔和頜面部外科手術(shù)。通過查閱學(xué)習(xí)國內(nèi)外文獻(xiàn)與手術(shù)病例可以有效直接的觀察到A-PRF在臨床試驗(yàn)中的的應(yīng)用，國外學(xué)者在應(yīng)用A-PRF對牙齦游離移植后骨傷口愈合的影響這項(xiàng)研究中，可以看出A-PRF本身不僅是支架，而且是具有連續(xù)釋放生長因子的作用，A-PRF在術(shù)后30天內(nèi)有益于組織的恢復(fù)而且還會減輕術(shù)后疼痛等問題，但A-PRF一般作用時(shí)效為三個(gè)月。我們從A-PRF在中厚皮片供區(qū)創(chuàng)面中的臨床應(yīng)用可以觀察到，當(dāng)應(yīng)用A-PRF時(shí)，可加快中厚皮供區(qū)創(chuàng)面愈合，減輕術(shù)后疼痛，減少瘢痕增生，改善愈后形態(tài)，為臨床醫(yī)師選擇促進(jìn)中厚皮供區(qū)軟組織愈合及再生的生物材料提供新的思路與方法。通過觀察我國學(xué)者在A-PRF在兔顱骨誘導(dǎo)成骨中的組織學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，A-PRF可促進(jìn)成骨細(xì)胞有效表達(dá)骨保護(hù)素，抑制RANK與RANKL的結(jié)合，從而抑制破骨細(xì)胞形成以及骨吸收功能，使成骨細(xì)胞及成骨功能占優(yōu)勢，這時(shí)成骨破骨的動態(tài)平衡中成骨大于破骨，大量新生骨形成，具有誘導(dǎo)新骨形成的能力。相關(guān)學(xué)者通過研究改A-PRF膜包裹顆粒軟骨移植的長期組織學(xué)改變，我們可以很明顯的看到A-PRF膜包裹顆粒軟骨移植物遠(yuǎn)期形態(tài)類似于自體筋膜包裹顆粒軟骨移植物，但在厚度上較筋膜包裹顆粒軟骨移植物稍薄，表明A-PRF膜擁有與自體筋膜類似的包裹性能，在起到聚合顆粒軟骨的同時(shí)，也可通過其特有的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)及各種生長因子為顆粒軟骨的存活提供一個(gè)良好的外界環(huán)境，A-PRF可以提高軟骨細(xì)胞的再生潛力，并有效促進(jìn)軟骨細(xì)胞的再生與修復(fù)。A-PRF對軟骨移植的存活率有顯著的益處，應(yīng)用A-PRF膜作為包裹材料包裹顆粒軟骨較為實(shí)用，作為一種自體生物材料，暫未發(fā)現(xiàn)改良型富血小板纖維蛋白對顆粒軟骨移植和受區(qū)產(chǎn)生任何負(fù)面效應(yīng)。因此，我們通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)A-PRF在臨床中的優(yōu)勢，為我們開展新的臨床手術(shù)方法提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

結(jié)語：

本文對A-PRF在臨床中的研究領(lǐng)域進(jìn)行了綜述報(bào)道，列舉了一些應(yīng)用A-PRF的研究成果，然而，文獻(xiàn)中經(jīng)常忽略白細(xì)胞濃度，甚至很少建議以白細(xì)胞濃縮率和白細(xì)胞配方作為參數(shù)，即使許多臨床結(jié)果可能與這些治愈因素有關(guān)。所以只有更好的了解此類產(chǎn)品的多態(tài)性、適應(yīng)性、理化性能以及生物學(xué)特性，才能夠?qū)⑵涑浞趾侠淼貞?yīng)用到臨床工作中，從而達(dá)到良好的組織修復(fù)效果。

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作者簡介：李鑫淼;男;1995.04.16;黑龍江省齊齊哈爾市;漢族;碩士研究生;研究方向：新材料新方法