UBQLN1和GOLM1基因單核苷酸多態性與女性盆腔器官脫垂的相關性研究＊

陶成斌 ,王 劍 ，毛寶宏 ，劉希云 ，魏 穎 ，劉 青 △

（1甘肅中醫藥大學臨床醫學院，甘肅 蘭州 730030，2，*甘肅省婦幼保健院，甘肅 蘭州 730050）

盆腔器官脫垂 （Pelvic Organ Prolapse，POP）是盆底支持結構缺陷、損傷及功能障礙造成的疾患，表現為盆腔器官位置下降及由此而引起的相應器官的功能改變，多因盆底支持組織薄弱引起[1]。既往研究證實陰道分娩、產次、高體質指數、高齡及慢性腹壓增高等與POP發病相關[2-3]，但臨床中可見無慢性腹壓增加的、年輕、未生育者患POP，而部分多產婦并未發病，提示POP發生可能與遺傳因素相關[4]。本實驗選取 UBQLN1 （rs3814507、rs7866234）、GOLM1（rs2225237、rs3750390、rs3750389、rs2297002）中SNP位點為待測位點，將241名POP患者及268名健康人群外周血DNA中待測位點基因多態性進行研究，旨在探討單核苷酸基因多態性與盆腔臟器脫垂的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究以241名女性POP患者為實驗組，納入標準：（1）甘肅省轄區內年齡≥20歲且在本地居住≥5年的女性；（2）符合國際尿控協會相關診斷標準及POP-Q分期標準[5]。排除標準：（1）合并婦科惡性腫瘤者；（2）中風致壓力性尿失禁者；（3）既往有骨盆骨折史或相關損傷者。選取同期性別、年齡、產次、絕經狀態相匹配的健康體檢人群268名為對照。兩組體型、分娩史、分娩方式、胎兒最大體重等資料差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。留取外周血標本，對全血DNA進行提取，應用Sequenom技術對盆底功能障礙性疾病相關易感基因：UBQLN1、GOLM1進行多態性檢測，分析與POP發生發展相關聯的等位基因、基因型分布頻率。本研究共納入509份樣本進行SNP位點檢測。

1.2 檢測方法

抽取兩組靜脈血5mL置EDTA抗凝管中，充分混勻以防凝血，并與流行病學資料使用統一編號，-80℃超低溫冰箱保存備用。提取基因組DNA，采用Sequenom技術進行位點檢測，通過引物延伸或切割反應與靈敏可靠的MALDITOF質譜技術相結合，實現基因位點檢測。共選擇2個基因，6個SNP位點。rs3814507反應失敗及數據不準確未納入數據分析，因此最終納入5個SNP位點行數據分析，見表2。

表1 兩組人口學特征比較

表2 SNP篩選結果

1.3 最小等位基因頻率

最小等位基因頻率 （Minor Allele Frequency，MAF）是指兩等位基因中，頻率較低的等位基因頻率。若MAF＜0.05，容易因為遺傳漂變等原因造成選取實驗群體與真實的大范圍群體相比出現偏移，此外突變頻率較低的位點在病例-對照組間往往差異較小，難以得出有效結論。本研究中選取SNP位點均大于0.05，即本研究選取的SNP位點有意義。詳見表3。

表3 SNP位點的MAF值

1.4 哈溫平衡檢測

分別統計所有樣本，病例組，對照組是否符合哈溫平衡定律，如果不符合哈溫平衡 （結果中P值＜0.05），說明選取的樣本不是隨機群體，需要進一步核實是否是家系來源樣本，還是選取的樣本來源有問題（即不能代表真實的大范圍群體）。本研究包括的SNP位點僅rs2297002在病例組人群中分布不符合哈溫平衡，其余所有位點在總體人群、病例組及對照組中分布均符合哈溫平衡，即可以代表真實的大范圍群體。詳見表格4。

表4 SNP位點的哈溫平衡檢測

1.5 統計學方法

采用SPSS24.0軟件進行數據分析，計量資料符合正態分布時以（±s）表示，予以 t檢驗，組間基因型、等位基因頻率等計數資料予以χ2檢驗，將不同基因型在病例組及對照組間分布差異有統計學意義者納入單因素Logistic回歸分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 等位基因頻率

本研究共納入5個SNP位點，發現rs2297002、rs3750389、rs7866234位點的等位基因頻率在病例組及對照組之間差異有統計學意義 （P＜0.05），余SNP位點等位基因頻率組間無統計學差異 （P＞0.05）。 見表 5。

表5 等位基因頻率及比較

2.2 基因型統計

本研究共納入5個SNP位點,rs2297002 SNP位點基因型分布頻率存在差異（P＜0.05），詳見表6。

表6 基因型頻率及比較

2.3 單因素logistic回歸分析

rs2297002不同基因型在病例組及對照組間分布差異有統計學意義（P＜0.05）。將上述基因型帶入Logistic單因素回歸模型分析SNP位點與POP的發病風險相關性，以野生型為對照，發現rs2297002位點TC型個體與TT型相比，可使POP發病風險增加至1.876倍。詳見表7、表8。

表7 顯性模型分析

表8 rs2297002基因型單因素Logistic回歸分析

3 討論

目前POP的明確病因尚不明確，其發生可能因膠原蛋白、彈性蛋白、細胞外基質等原本保持的動態平衡被破壞所致[6]。目前國內外的多項研究都提示盆腔器官脫垂的發生、發展與遺傳因素也有一定的關系。Altman,D.等[7]提出約40%的POP或SUI的發生與遺傳因素相關。Allen-Brady,K.[8]等首次提出POP的發生可能與9號染色體長臂21區有關，既往研究表明多個位于該區的基因與肌肉蛋白功能相關或在肌肉組織中高表達，包括TLE4、TLE1、UBQLN1、MAK10、GOLM1 及 ADRB3 基因。

單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）目前被廣泛用于疾病相關基因定位及診斷、群體遺傳學、藥物開發及應用等相關研究中[9]，是指基因組水平上因單個核苷酸變異致DNA序列多態性，各SNP位點通常有兩個等位基因，在一定程度上表現出了每個個體之間存在著遺傳差異，檢測時無需分析片段長度，可通過簡單的＋/-分析進行基因型分型[10]。SNP位點在目前已經知道的多態性中占有相當大的比重，所占比例在90%以上。每500～1000個堿基對中就可存在1個SNPs位點。SNPs中所包含的各種等位基因，其等位基因頻率均需大于1%。大部分SNPs對基因功能不存在影響，但當其位于編碼區則可能影響基因功能。

本次研究以人群為基礎，針對POP人群開展基因位點多態性與POP的關聯分析，對照亦來自于同期人群，也是UBQLN1、GOLM1基因被較早的在POP領域研究。本實驗檢測了rs297002、rs3750389及rs7866234位點等5個位點SNPs與盆腔臟器脫垂的關系。研究實驗結果顯示，rs2225237、rs3750389、rs3750390、rs7866234 位點單核苷酸多態性與盆腔臟器脫垂無明顯相關性；rs297002位點，等位基因C是盆腔臟器脫垂的危險等位基因，CC基因型是盆腔臟器脫垂的危險基因型；提示GOLM1基因的rs297002位點的單核苷酸多態性與中國漢族人群的盆腔臟器脫垂相關。rs297002位點位于GOLM1基因，但其生物學意義尚不完全明確。關于GOLM1基因SNP變異能否顯著影響POP的發生尚無定論，由于本次實驗樣本量較小，故實驗結果尚需大樣本的重復性實驗進一步證實，而GOLM1、基因單核苷酸多態性與盆腔臟器脫垂發病相關的具體作用機制，仍需在今后的研究中做進一步探究。

綜上所述，GOLM1-rs297002C/T基因多態性與POP遺傳易感性有相關性，TC型個體與TT型相比，可使POP發病風險增加至1.876倍。