日糧中添加參麥多糖對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和免疫功能的影響

陳莎 ，張玉閣，陳佳，秦洪宇，殷中瓊，2，李煬平，鄒元鋒，2*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院天然藥物研究中心，四川 成都 611130；2.四川省動(dòng)物疾病與人類健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611130；3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，四川 成都 611130）

參麥方見于《醫(yī)學(xué)啟源》的參麥飲，是一種傳統(tǒng)的中藥復(fù)方制劑，由紅參和麥冬兩味藥材制備而成，具有抗氧化，抗心肌缺血，降低心肌耗氧量，增強(qiáng)心臟壓力等藥理作用[1]。藥理研究發(fā)現(xiàn)，中藥多糖具有增強(qiáng)免疫、調(diào)節(jié)腸道菌群、促進(jìn)生長(zhǎng)等多種生物活性[2-3]。本試驗(yàn)按一定比例在肉雞飼料中添加參麥多糖（SMP），探索其對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫應(yīng)答、血液生化指標(biāo)及42 日齡腸道菌群、黏膜免疫的積極影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥材 紅參購(gòu)自成都荷花池中藥材市場(chǎng)，麥冬于2019 年3 月采自四川三臺(tái)縣，經(jīng)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院鄒元鋒博士鑒定。參麥多糖（SMP）的提取：紅參與麥冬剪碎后按照1∶1 質(zhì)量比混合，100 ℃下乙醇回流萃取，去除低分子量和親脂化合物；30倍量蒸餾水100 ℃下提取2次，每次2 h；水提液濃縮后用乙醇沉淀，收集多糖沉淀，冷凍干燥后即得。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 所有動(dòng)物試驗(yàn)均按四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的程序進(jìn)行。從綿陽(yáng)某家禽有限公司購(gòu)買健康的1日齡三黃雞60只，隨機(jī)分為4組，每組15只，分籠飼養(yǎng)。4個(gè)組分別按照0、0.25%、0.5%、1.0%的比例添加SMP，基礎(chǔ)日糧配方見表1。飲食符合中國(guó)三黃雞喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)營(yíng)養(yǎng)要求。前7 d 采用23 h 光照，溫度保持在27 ℃左右，然后逐漸過(guò)渡到自然光和室溫（22 ℃）。試驗(yàn)期42 d。在此期間，肉雞自由采食與飲水。第14 d 接種新城疫疫苗。其余飼養(yǎng)管理按《家禽飼養(yǎng)管理手冊(cè)》進(jìn)行。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 生長(zhǎng)性能測(cè)定 在試驗(yàn)開始及每個(gè)生長(zhǎng)階段結(jié)束時(shí)對(duì)肉雞稱重，計(jì)算體重增加量。飼料消耗量＝飼料供給量－剩余量。通過(guò)計(jì)算肉雞體重增加量與飼料消耗量的比值來(lái)確定飼料轉(zhuǎn)換比（FCR）。

1.4 免疫力測(cè)定 試驗(yàn)第42 d，采集每只雞的靜脈血5 mL，4 000 r∕min 離心10 min，分離上清液，－20 ℃保存。采用血凝抑制（HI）試驗(yàn)，測(cè)定新城疫（ND）抗體效價(jià)。

為確定免疫應(yīng)答水平，采用雞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒和微板閱讀器（美國(guó)BIORAD iMark）測(cè)定血清免疫球蛋白G（Ig G）、免疫球蛋白M（Ig M）、白介素-2（IL-2）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）的水平。試驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

將雞安樂(lè)死之后，采集雞胸腺、脾臟和法氏囊，去除表面筋膜和脂肪，吸干表面血跡后逐一稱重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。免疫器官相對(duì)重量表示為器官重量與體重之比（mg∕g），計(jì)算公式：

1.5 血液生化參數(shù)測(cè)定 采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清葡萄糖、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）、膽固醇、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）和堿性磷酸酶（ALP）的水平。

1.6 腸道菌群分析 無(wú)菌采集盲腸內(nèi)容物0.5 g，置于無(wú)菌Eppendorf 管中，用0.9 mL 稀釋劑在振蕩器上振蕩20 min，使盲腸內(nèi)容物均勻化。稱重適量盲腸內(nèi)容物，用稀釋劑稀釋至合適的倍數(shù)，取0.1 mL稀釋樣品接種到瓊脂培養(yǎng)基。采用MRS 瓊脂培養(yǎng)乳桿菌，采用MacCon 瓊脂培養(yǎng)大腸桿菌，采用SS 瓊脂培養(yǎng)沙門氏菌，每個(gè)稀釋度重復(fù)3 次。細(xì)菌計(jì)數(shù)以lgCFU（菌落形成單位）∕g表示。

1.7 腸道黏膜上分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的測(cè)定 去除腸內(nèi)容物后，用潔凈液氮在無(wú)菌研缽中將回腸研磨成均勻粉末。冷凍條件下稱取組織粉末0.1 g于無(wú)酶Eppendorf管中，加入PBS至10 mg∕mL，混勻。3 500 r∕min 冷凍離心20 min，取上清液，采用雞分泌型免疫球蛋白A（sIgA）酶聯(lián)免疫分析試劑盒檢測(cè)組織中的sIgA含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單向方差分析（ANOVA），采用Duncan 法進(jìn)行組間多重比較。當(dāng)P＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 生長(zhǎng)性能 生長(zhǎng)性能的測(cè)定結(jié)果匯總在表2 中，包括初始體重（IBW）、最終體重（FBW）、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和飼料轉(zhuǎn)化率（FCR）。0.25%和1.0% SMP 添加組的FBW 明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。添加SMP 對(duì)ADG、ADFI 和FCR 無(wú)影響，但相對(duì)于對(duì)照組，試驗(yàn)組的FCR在一定程度上有所降低。

2.2 免疫狀況 各組肉雞的免疫器官指數(shù)見表3。0.25%SMP 添加組的脾臟指數(shù)高于對(duì)照組（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，0.25%和1.0%SMP添加組的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均較高（P＜0.05）。當(dāng)飼喂0.25%SMP 時(shí)，胸腺指數(shù)得到明顯改善（P＜0.05）。

免疫應(yīng)答狀態(tài)的測(cè)定結(jié)果見表4。所有SMP添加組的IgG 含量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。添加0.25%SMP 可顯著增加IgM 和IL-2 的含量（P＜0.05）。0.25%和1.0%SMP添加組中，雞新城疫（ND）抗體效價(jià)水平（42 d）明顯增高（P＜0.05）。0.5%和1.0%SMP添加組中，TNF-α濃度明顯降低（P＜0.05）。

2.3 血液生化參數(shù) 日糧中補(bǔ)充SMP 對(duì)血液生化參數(shù)的影響見表5。SMP 添加組的血清葡萄糖、堿性磷酸酶（ALP）和甘油三酯濃度均低于對(duì)照組（P＜0.05）。尿酸在添加1.0%SMP 時(shí)顯著降低（P＜0.05），膽固醇濃度在添加0.5%SMP 時(shí)顯著降低（P＜0.05）。所有試驗(yàn)組的高密度脂蛋白(HDL)濃度均高于對(duì)照組，差異最顯著的是0.25%SMP 添加組（P＜0.05）。添 加0.5% 和1.0%的SMP 后，低密度脂蛋白（LDL）濃度顯著降低（P＜0.05）。

2.4 腸道菌群和黏膜免疫 腸道菌群及黏膜免疫測(cè)定結(jié)果見表6。腸道菌群計(jì)數(shù)顯示，SMP 添加組的大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量顯著減少（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，添加0.25%SMP可顯著增加乳酸桿菌的數(shù)量。在日糧中加入SMP 可促進(jìn)腸道黏膜反應(yīng)因子sIgA的分泌，增加其含量（P＜0.05）。

表2 參麥多糖（SMP）對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響g

表3 參麥多糖(SMP)對(duì)肉雞脾臟、胸腺和法氏囊指數(shù)的影響mg∕g

表4 參麥多糖（SMP）對(duì)免疫應(yīng)答的影響

表5 不同水平參麥多糖（SMP）對(duì)血液生化指標(biāo)的影響

表6 不同水平參麥多糖（SMP）對(duì)腸道菌群和sIgA分泌量的影響

3 討論

3.1 SMP 對(duì)生長(zhǎng)性能的影響 BW、ADG、ADFI 和FCR 常作為評(píng)估家禽生長(zhǎng)性能和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞日糧中添加0.25%SMP，其FBW明顯高于對(duì)照組，表明SMP可以促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)，這與黃芪多糖對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響結(jié)果相似[4]。然而，與以前試驗(yàn)不同的是，本試驗(yàn)添加SMP 對(duì)ADG、ADFI 和FCR 值沒有顯著影響，推測(cè)可能是由于多糖劑量和來(lái)源不同所致。血清生化指標(biāo)可以反映動(dòng)物物質(zhì)代謝的變化，到目前為止，大量文獻(xiàn)報(bào)道了多糖對(duì)動(dòng)物血液生化指標(biāo)具有改善作用[5-6]。本研究表明，SMP可降低血糖、膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白（LDL）水平，提高高密度脂蛋白（HDL）水平。

3.2 SMP 對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)作用 多糖對(duì)免疫系統(tǒng)有調(diào)節(jié)作用，主要表現(xiàn)為免疫增強(qiáng)或免疫刺激[7]。雞免疫細(xì)胞的發(fā)育、分化和抗體產(chǎn)生主要發(fā)生在免疫器官，包括法氏囊、胸腺和脾臟。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在日糧中加入SMP可以改善肉雞的脾臟、胸腺和法氏囊指數(shù)，提高機(jī)體的整體免疫功能，這與現(xiàn)有的研究成果相似[8]。此外，本試驗(yàn)分別檢測(cè)了肉雞IgM、IgG、TNF-α、IL-2的含量及ND效價(jià),作為評(píng)價(jià)機(jī)體免疫水平的指標(biāo)，以綜合判斷肉雞的免疫性能及一般抗性。

一般來(lái)說(shuō)，血清免疫球蛋白水平的高低是判斷動(dòng)物體液免疫功能好壞的重要指標(biāo)之一。IgG可介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)，IgM 主要由淋巴組織和脾臟中的B細(xì)胞產(chǎn)生。本研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加SMP 可增加血清中的IgG 和IgM 含量，說(shuō)明SMP可以提高動(dòng)物體內(nèi)抗體水平，更好地幫助機(jī)體抵抗外界物質(zhì)的侵襲。腫瘤壞死因子α（TNF-α）主要由單核-巨噬細(xì)胞分泌，TNF-α含量過(guò)高會(huì)激活一氧化氮（NO）等細(xì)胞毒性炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，增加疾病的發(fā)生率。目前，大多數(shù)試驗(yàn)都集中于研究多糖對(duì)病理模型動(dòng)物TNF-α含量變化的影響[9]。而在本試驗(yàn)中，添加SMP 可以降低血清中TNF-α的含量，表明在正常條件下SMP對(duì)機(jī)體TNF-α的產(chǎn)生具有調(diào)節(jié)作用，能有效預(yù)防疾病的發(fā)生。白細(xì)胞介素-2（IL-2）是由活化的T 或NK細(xì)胞產(chǎn)生的，能刺激T淋巴細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞的功能，增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性，促進(jìn)抗體和細(xì)胞因子的產(chǎn)生[10]。本試驗(yàn)添加0.25%和0.5%SMP 組的IL-2 含量增加。推測(cè)SMP可能通過(guò)促進(jìn)IL-2分泌來(lái)刺激T細(xì)胞增殖，增強(qiáng)NK 細(xì)胞活性，從而提高免疫水平。此外，1.0%SMP 添加組的IL-2 含量降低，表明SMP 對(duì)IL-2的影響不會(huì)隨著濃度的增加而增加，推測(cè)存在某一最佳作用劑量，這與其他文獻(xiàn)[11]報(bào)道的一致。本試驗(yàn)以0.25%添加劑量的效果最好。新城疫抗體滴度反映了雛雞對(duì)新城疫病毒的特異性反應(yīng)，抗體水平越高，體液免疫功能越強(qiáng)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SMP 提高了免疫抗體水平，增強(qiáng)了雞對(duì)疫病的抗性。

3.3 腸道菌群與黏膜免疫的關(guān)系 研究表明，中藥多糖可作為優(yōu)勢(shì)碳源調(diào)節(jié)機(jī)體微生態(tài)機(jī)制，改善腸道健康[12]。多糖進(jìn)入腸道后，被乳酸菌和雙歧桿菌利用發(fā)生降解，產(chǎn)生乙酸、丙酸、丁酸、異戊酸等短鏈脂肪酸，降低腸道pH值，抑制不耐酸致病菌（如大腸桿菌和沙門氏菌等)的生長(zhǎng)[13]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在日糧中添加SMP可促進(jìn)腸道有益菌群乳酸菌的增殖，減少大腸桿菌和沙門氏菌等有害細(xì)菌的數(shù)量。回腸組織中的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）作為腸道免疫屏障的第一道防線，是腸黏膜先天免疫的主要效應(yīng)物，在腸黏膜免疫中起著重要的保護(hù)作用[14]。sIgA水平的高低反映了機(jī)體黏膜免疫狀態(tài)的好壞。本研究中，添加SMP 可以顯著增加腸道sIgA 的含量。對(duì)其他多糖的研究也獲得了相似的結(jié)果。可見SMP 有利于促進(jìn)肉雞腸道黏膜免疫球蛋白的合成與分泌，增強(qiáng)腸黏膜的局部免疫功能。

4 結(jié)論

綜上，在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加SMP可以改善肉雞的生長(zhǎng)性能，促進(jìn)肉雞免疫器官的發(fā)育，提高血清IgG、IgM、IL-2 和ND 抗體水平，增加回腸中sIgA 的合成和分泌，降低TNF-α含量，還可以通過(guò)培養(yǎng)腸道有益菌、抑制有害菌含量來(lái)調(diào)節(jié)腸道菌群。