N-乙酰半胱氨酸對軟骨細胞基質降解和骨關節炎的作用研究

張衛華，張建業，葉恒，李永壽

(1.武漢市漢陽醫院骨科，湖北 武漢 430050；2.湖北醫藥學院基礎醫學院，湖北 十堰 442000)

骨關節炎(osteoarthritis，OA)是一種以關節軟骨變性、骨質疏松及滑膜炎為特征的慢性骨關節疾病，中老年人較為常見，臨床主要表現為關節疼痛、活動受限等，甚至可導致殘疾，嚴重影響患者的生活質量[1-2]。OA病理特征主要以軟骨基質的降解和破壞為主，其與衰老、氧化應激、炎癥反應和分解代謝相關的基因表達有關[3-4]。目前，臨床骨關節炎并無特效治療，因此，尋找用于治療骨關節炎的藥物是一項重要目標。

N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)是一種谷胱甘肽前體，可以通過靶向于活性氧(reactive oxygen species，ROS)產生抗氧化作用，并且對許多ROS相關的疾病動物模型均有良好的抗氧化作用[5-6]。但是，NAC對于治療骨關節炎的作用及其相關機制研究較少，因此，本研究通過建立體內外模型探討了NAC的抗骨關節炎作用及其相關的分子機制。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗材料 四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)(ST316)，碘化吡啶(propidium iodide，PI)染色液(P0137)，ROS檢測試劑盒(S0033)，蛋白裂解液(P0013C)，蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物(P1046)，超氧化物(superoxide dismutase，SOD)檢測試劑盒(S0060)，總谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GPX)檢測試劑盒(S0058)購自碧云天生物科技有限公司(中國)；Anti-基質金屬蛋白酶(matrix metalloprotinase，MMP)-3(#14351)，Anti-MMP-9(#13667)，Anti-MMP-13(#69926)，Anti-GAPDH(#5174)購自Cell Signaling生物公司(美國)；Anti-ADAMTS 4(PA1-1749A)購自賽默飛生物科技有限公司(美國)。

1.2 細胞培養 人軟骨細胞(HC-A)購自Sigma公司(美國)，用含有10%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、100U/mL青霉素及100μg/mL鏈霉素的DMEM/F12培養基，于5% CO2和37℃的細胞培養箱(賽默飛，美國)中培養。

1.3 MTT試驗 以1×106個/mL密度將HC-A細胞接種于96孔板，過夜培養，待細胞長至80%時，將細胞……