HAG聯合地西他濱對骨髓增生異常綜合征患者免疫功能的影響

劉艷芬 劉欣 訾建杰 馮志剛 閆慧 韓寶艷 張成俠

骨髓增生異常綜合征(MDS)是多見于中老年人群的血液系統常見病，臨床表現主要有貧血、出血、造血功能衰竭等，嚴重者甚至轉化為急性髓系白血病，病死率較高[1,2]。迄今為止，MDS發病機制尚未闡明。大量研究表明，免疫機制在MDS發生發展中發揮關鍵作用[3,4]。我們前期研究發現，HAG(高三尖杉酯堿+阿糖胞苷+粒細胞集落刺激因子)聯合地西他濱治療MDS具有良好的治療效果。本研究探討了HAG聯合地西他濱對MDS患者免疫功能的影響，以期為此類疾病的治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2014年2月至2015年1月我院收治的MDS患者86例納入研究范圍，隨機分為HAG組和聯合組，每組43例。HAG組男24例，女19例；年齡26～71歲，平均(54.3±6.5)歲；分型：難治性貧血伴原始細胞增多-2 27例，難治性貧血伴原始細胞增多-1 11例，MDS轉化急性髓系白血病4例，慢性-單核細胞白血病1例；IPSS分組：中危-1 15例，中危-2 22例，高危6例。聯合組男25例，女18例；年齡25～72歲，平均(53.4±6.0)歲；分型：難治性貧血伴原始細胞增多-2 26例，難治性貧血伴原始細胞增多-1 12例，MDS轉化急性髓系白血病3例，慢性-單核細胞白血病2例；IPSS分組：中危-1 13例，中危-2 25例，高危5例。2組性別比、年齡、分型、IPSS分級比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 納入及排除標準

1.2.1 納入標準：①符合MDS相關診斷標準[5]；②患者均有全血細胞減少、造血功能衰竭等典型表現；③患者及家屬簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準：①合并其他惡性腫瘤者；②肝腎等重要臟器功能障礙者；③精神疾病患者；④入組前6個月服用過影響造血功能的藥物者；⑤對治療藥物過敏者；⑥妊娠期或哺乳期女性患者。

1.3 治療方法 2組均給予抗感染、營養支持治療。HCG組給予高三尖杉酯堿(辰欣藥業股份有限公司，1 ml∶1 mg，國藥準字H20064996)+阿糖胞苷(海正輝瑞制藥有限公司，國藥準字H20054695)+粒細胞集落刺激因子(協和發酵麒麟株式會社，國藥準字S200100631)治療。高三尖杉酯堿，1 mg/d，1次/d，溶于250 ml 5%葡萄糖注射液中，靜脈滴注；阿糖胞苷，2 mg/kg，1次/d，靜脈滴注；粒細胞集落刺激因子，300 μg/d，1次/d，靜脈滴注，連用14 d。聯合組在HAG組治療基礎上加用地西他濱(正大天晴藥業集團股份有限公司，國藥準字H20143382)，15 mg/m2，1次/8 h，靜脈滴注,連用3 d。

1.4 實驗方法

1.4.2 Treg/Th17轉錄因子:采集骨髓液5 ml，置于肝素抗凝管中，等量PBS稀釋后加入淋巴細胞分離液，密度梯度離心法分離外周血單個核細胞(BMMNC)。Trizol提取BMMNC總RNA，逆轉錄試劑盒合成cDNA第一鏈，Real time-PCR法測定Foxp3、RORγt mRNA表達量，設β-actin為內參照基因，目的基因表達相對值為2-ΔΔCt。

1.4.3 細胞因子:采用患者空腹靜脈血，離心取上清，采用酶聯免疫吸附實驗測定血清γ干擾素(IFN-γ)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)。

2 結果

表1 2組淋巴細胞亞群表型比較

表2 2組T淋巴細胞亞群比較

2.3 2組Treg/Th17比較 2組治療前Treg細胞、Th17細胞、Treg/Th17比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后Treg細胞、Treg/Th17均較治療前顯著降低，Th17細胞均較治療前顯著升高(P<0.05)，且聯合組Treg細胞、Treg/Th17低于HAG組，Th17細胞高于HAG組(P<0.05)。見表3。

表3 2組Treg/Th17比較

2.4 2組Treg/Th17轉錄因子表達比較 2組治療前Foxp3、RORγt mRNA表達比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后Foxp3 mRNA表達均較治療前顯著降低，RORγt mRNA表達均較治療前顯著升高(P<0.05)，且聯合組Foxp3 mRNA表達低于HAG組，RORγt mRNA表達高于HAG組(P<0.05)。見表4。

表4 2組Treg/Th17轉錄因子表達比較

2.5 2組細胞因子比較 2組治療前IFN-γ、TNF-α比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后IFN-γ、TNF-α均較治療前顯著降低(P<0.05)，且聯合組IFN-γ、TNF-α低于HAG組(P<0.05)。見表5。

表5 2組細胞因子比較

3 討論

MDS是一種具有高度異質性的難治性血液病，是由于造血干/祖細胞惡性增殖、分化成熟障礙導致無效造血、造血功能衰竭，容易發展為急性白血病，病死率高[6,7]。目前，臨床尚無治療MDS的特效藥物，化療仍是治療該病的主要方法，能夠有效抑制腫瘤細胞異常克隆，從而發揮抗腫瘤作用。但是多數化療藥物具有細胞毒性，治療過程中也會殺傷機體正常細胞[8]。因此，提高免疫功能是提高化療效果及改善造血功能及預后的關鍵。我們前期研究證實，HAG聯合地西他濱治療MDS能夠顯著降低骨髓原始細胞比例，改善患者骨髓造血功能和生活質量[9]。

Treg屬于輔助性T淋巴細胞，其在白血病等腫瘤細胞表達增高，通過抑制免疫效應細胞及增加免疫耐受降低機體抗腫瘤能力[13]。Th17是近年來新發現的T淋巴細胞亞群成員，通過分泌IL-17等細胞因子發揮抗腫瘤免疫作用[14]。Foxp3、RORγt是Treg、Th17細胞特異性表達的轉錄因子，在調控二者分化、發育和功能維持方面發揮重要調控作用[15,16]。本研究結果表明，2組治療前Treg細胞、Th17細胞、Treg/Th17、Foxp3、RORγt mRNA表達比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后Treg細胞、Treg/Th17、Foxp3 mRNA表達均較治療前顯著降低，Th17細胞、RORγtmRNA表達均較治療前顯著升高(P<0.05)，且聯合組Treg細胞、Treg/Th17、Foxp3 mRNA表達低于HAG組，Th17細胞、RORγt mRNA表達高于HAG組(P<0.05)。說明聯合組通過調控轉錄因子表達影響Treg/Th17細胞分化，從而改善細胞免疫應答。

T淋巴細胞亞群失衡通過分泌多種細胞因子調節骨髓造血細胞的分化、成熟，參與MDS發生發展。其中IFN-γ、TNF-α是單核巨噬細胞分泌的造血負調控因子，具有促進骨髓干/祖細胞增殖、誘導骨髓細胞凋亡的作用，從而導致骨髓病態造血及全血細胞減少[17]。本研究結果表明，2組治療前IFN-γ、TNF-α比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后IFN-γ、TNF-α均較治療前顯著降低(P<0.05)，且聯合組IFN-γ、TNF-α低于HAG組(P<0.05)。說明聯合組通過調控細胞分子分泌改善免疫抑制狀態，從而增強骨髓造血功能。