淋巴管密度、微血管密度水平與胃癌病理特征的關系＊

文 /保麗玲

腫瘤通過淋巴結轉移主要是由于腫瘤細胞對淋巴管侵犯破壞了淋巴管網絡，使淋巴管僅殘存剩余的內皮細胞使其喪失了免疫功能[1]。腫瘤外周通過誘導新淋巴管生成促進淋巴結轉移，而淋巴管侵犯以及新淋巴管的生成與惡性腫瘤不良的預后存在相關的聯系[2]。現階段，由于無針對淋巴管的特異標志物，導致臨床上缺乏淋巴管生成對腫瘤轉移影響的研究。有相關報道表明，單克隆抗體D2-40作為一種IgG抗體通過識別淋巴管內皮糖蛋白中一個固定抗原表位，可以嚴格區分血管內皮和淋巴內皮，因此，可以作為淋巴管內皮的特異性標志物[3]。血管生成促進了腫瘤的進展和轉移，而血管生成通常采用MVD作為測量指標[4]。由于目前臨床上關于淋巴管密度、微血管密度水平與胃癌病理特征的關系缺乏足夠的科學理論，故本研究將對我院2018年12月-2019年12月收治的120例胃癌手術患者為研究對象，分析腫瘤組織中LVD與MVD與胃癌病理特征的關系，現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2018年12月至2019年12月期間收治的120例胃癌手術患者為研究對象，其中男性56例，女性64例，最小年齡37歲，最大年齡76歲，平均年齡（67.5±3.5）歲，患者腫瘤直徑3.5-8.3cm,其中5cm以下者62例，超過5cm者58例，術后對患者的胃癌組織進行研究發現，腺管狀胃癌32例，乳頭狀胃癌33例，黏液狀胃癌31例，印戒細胞胃癌24例。所有患者術前均無其他輔助性治療并排除合并其他臟器器質性病變患者。

1.2 檢驗試劑

以即用型D2-40單克隆抗體、即用型CD31單克隆抗體、SP免疫組化試劑為檢驗試劑進行免疫組織化學染色后，以光學顯微鏡輔助下觀察并統計腫瘤邊緣及腫瘤中心的MVD及LVD形態及數量分布情況。

1.3 檢測方法

將腫瘤組織以10%福爾馬林浸泡并實施石蠟包埋后進行免疫組化染色。取4-6um腫瘤組織切片以二甲苯行脫蠟處理后進行復水操作。內源性過氧化物酶以3%過氧化氫阻滯15min并行SP法。以檸檬酸鈉緩沖液聯合加熱操作使D2-40抗原修復。對組織切片進行EDTA預處理后觀察CD-31抗體的抗原表達。阻斷非特異性抗體結合反應時使用普通兔血漿。加入經稀釋的D2-40和CD-31抗體，使組織切片在4℃的夜間進行孵化。以3-氨基和-9乙基咔唑為色原體，觀察抗原抗體反應情況。采用蘇木素對組織切片進行反染后計數。以PBS代替主要抗體作為陰性，以淋巴管瘤切片為陽性對照。

1.4 判定標準

在光學顯微鏡輔助下采用雙盲法觀察組織切片的抗原抗體反應顯影。腫瘤邊緣部位D2-40單克隆染色體陽性呈黃色顆粒狀，而腫瘤中央部位則數量較少甚至未見表現，因此可以確定其具有標記作用，在腫瘤組織中可以作為淋巴管內皮的特異性標志物。有關醫療研究人員指出了評估MVD和LVD的具體方法如下：以兩組胃癌組織切片為例，用低倍鏡觀察D4-20免疫染色顯影情況，選取2個最高密度脈管化區域進行仔細檢查，取2個高倍鏡視對視野下的D2-40陽性淋巴管進行計數并取平均值代表LVD；以低倍鏡觀察CD-31免疫染色顯影情況，選取2個最高密度脈管化區域進行仔細檢查。取2個高倍鏡對視野下CD-31陽性的血管進行計數并取平均值代表MVD。在腫瘤細胞中對腫瘤中心脈管進行計數，而高倍鏡視野范圍內對圍繞在腫瘤細胞邊緣的脈管計數為瘤周脈管。

1.5 評價指標

分析癌邊緣及癌中心MVD和LVD[5-6]與胃癌腫瘤大小、淋巴結轉移、病理類型的關系。

1.6 統計學分析

對本次研究數據采用SPSS22.0進行分析，計量資料采用（）表示，計數資料用%表示，以t和x2檢驗，以P＜0.05為準，差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 淋巴管密度（LVD）。

癌細胞內LVD總體為（4.7±1.8）個；癌細胞邊緣LVD為（7.8±2.6）個且癌細胞邊緣LVD與腫瘤大小、淋巴結轉移有關（P＜0.05）,但與組織病理學類型無關（P＞0.05）。癌細胞內LVD與胃癌腫瘤大小、淋巴結轉移及組織病理學類型均無關聯性（P＞0.05）。詳見表 1。

表1 LVD對胃癌臨床病理學參數的影響（，個）

表1 LVD對胃癌臨床病理學參數的影響（，個）

臨床病理學參數 癌邊緣LVD 癌中心LVD腫瘤 ＜5cm 5.7±1.5 5.5±2.1腫瘤≥5cm 9.3±2.8 5.8±3.4腺管狀和乳頭狀 6.7±2.8 /粘液狀 7.1±3.8 5.5±1.5印戒細胞 8.7±4.2 5.4±2.3無淋巴結轉移 3.5±2.4 3.7±1.3有淋巴結轉移 9.3±4.1 4.2±2.4

2.2 微血管密度（MVD）

癌細胞內MVD為（48.7±14.5）個，癌細胞邊緣MVD為（46.2±13.2）個；癌細胞內及癌細胞邊緣MVD與腫瘤大小、淋巴轉移情況、組織病理學類型均無關聯性（P＞0.05）,詳見表2。

表2 MVD對胃癌臨床病理學參數的影響（，個）

表2 MVD對胃癌臨床病理學參數的影響（，個）

臨床病理學參數 癌邊緣MVD 癌中心MVD腫瘤 ＜5cm 43.2±16.6 42.7±17.9腫瘤≥5cm 47.6±14.7 48.5±16.3腺管狀和乳頭狀 42.6±17.0 50.2±16.8粘液狀 35.4±14.9 42.9±12.6印戒細胞 54.1±13.1 40.7±11.7無淋巴結轉移 42.3±14.5 41.6±13.9有淋巴結轉移 45.7±16.2 47.9±15.8

3 討論

新生血管對腫瘤具有促進發展和轉移的作用已得到科學驗證。淋巴結作為腫瘤的最初轉移途徑，其轉移程度直接影響患者的臨床癥狀及預后情況。雖然腫瘤最初經淋巴轉移，但腫瘤細胞因何進入淋巴系統以及腫瘤誘導的新生淋巴管或原淋巴管是否促進淋巴轉移，有待醫療學者提供科學證實[7]。

此前，相關學者通過采用除D2-40外不同的淋巴管標志物分析胃癌與淋巴管生成的關系，發現在胃癌中淋巴管密度與淋巴結轉移有關，但因缺乏深入的探討，故研究意義有待考量[8-9]。近年來，有醫療學者發現，D2-40單克隆抗體可以作為針對淋巴管內皮的選擇性標志物，因此，眾多醫學研究人員以D2-40區分血管內皮和淋巴內皮檢驗手段對胃癌及其他惡性腫瘤新生淋巴管進行研究[10]。

以上研究結果顯示淋巴管在胃癌組織的中心區域與邊緣區域呈現出不同的表現形態及密度水平。較腫瘤中心內淋巴管細小，扁平的形態不同的是，腫瘤邊緣區域的淋巴管呈增大、擴張狀態，而且數量較多。筆者認為，增殖的腫瘤細胞及瘤內持續的高壓導致了瘤內淋巴管萎縮塌陷或者癌細胞對淋巴管的侵犯使得瘤內淋巴管僅剩下內皮細胞，從而喪失了其免疫功能，而腫瘤邊緣區域的淋巴則促進了腫瘤細胞的傳播轉移。

本研究結果表明，胃癌患者腫瘤邊緣的淋巴管能夠促進腫瘤轉移，進而加快腫瘤的進展速度。而腫瘤中心的LVD與胃癌的臨床病理并無關聯性。此外，本研究結果還顯示，胃癌患者的腫瘤中央部位及邊緣部位的MVD與胃癌臨床病理各參數之間均無關聯性。因此說明胃癌患者的微血管密度對胃癌的轉移和進展不具有影響力。

綜上所述，胃癌患者腫瘤邊緣的淋巴管生成可能為腫瘤細胞的轉移和傳播提供了途徑，加速了胃癌的進展，因此采用D2-40法研究可能胃癌與淋巴管生成的關系對胃癌的風險轉移評估具有一定的臨床參考價值。