無創(chuàng)產前篩查對胎兒染色體非整倍體檢出的臨床價值

周慕平，劉娜，文君，黃艷，鄧禮元

（邵陽市婦幼保健院檢驗科，湖南 邵陽 422000）

染色體非整倍體疾病是染色體數目異常（增多或減少）而引發(fā)的非單倍體整數倍疾病[1]，目前，尚無特異性治療方案，因此，需在孕早期產檢進行診斷方能降低缺陷胎兒出生率，同時，減輕患病家庭的經濟負擔，提升生育質量[2]。近年來，無創(chuàng)產前篩查（NIPT）作為新型胎兒染色體疾病檢測技術應用于產前檢測領域，相較于傳統(tǒng)的臍血穿刺、羊水穿刺、胎兒組織活檢、絨毛活檢等檢查手段更具權威性，且安全性高，通過高通量測序技術檢測產前孕婦外周血中胎兒游離DNA（cell free fetal DNA，cffDNA），使產前篩查、診斷體系更加完整，進一步優(yōu)化產前檢測技術，提升產前檢測整體質量[3]。NIPT 適用于21 三體綜合征、18三體綜合征、13 三體綜合征等目標疾病。有文獻表明[4]，無創(chuàng)產前DNA 檢測技術靈敏度、特異性高，假陽性率低，在全球廣泛使用。2012 年，美國母胎醫(yī)學會(SMFM)和美國婦產科醫(yī)師學會(ACOG)更是針對NIPT 發(fā)表了一致委員會指導意見，將NIPT 全面推廣至高危染色體非整倍體人群初篩檢測中[5]。本研究選取 2017 年 6 月至 2019 年 6 月某院產科收治的產前檢查孕婦102 例作為研究對象，探究無創(chuàng)產前篩查檢測胎兒染色體非整倍體異常的臨床價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年6月至2019年6月某院產科收治的產前檢查孕婦102 例作為研究對象。孕婦年齡21～37歲，平均年齡（29.64±2.07）歲；體質量53～72 kg，平均體質量（64.51±4.28）kg；孕周 11～28 周，平均孕周（22.19±2.88）周；孕次1～3次，平均孕次（2.03±0.07）次；高齡6例。唐氏篩查：高風險73 例，中等風險29 例，胎兒異常8 例。本研究經本院倫理委員會審核批準。患者知情同意并簽署知情同意書。

排除標準：①夫婦一方染色體異常，具有染色體異常分娩史，具體為：夫婦一方存在染色體異常的待產孕婦，具備染色體異常分娩史，均有介入性產前明確診斷指征，應盡快執(zhí)行介入性產前診斷；②待產1年內，孕婦接受過細胞治療、免疫治療、移植手術、異體輸血等，會直接干擾高通量測序產前篩查與診斷結果，降低篩查、診斷的準確度，具體為：若產婦在待產1年內，接受細胞治療、移植手術、細胞治療等非原有細胞和組織中帶有異常21-三體、18-三體、13-三體，則細胞在進行新陳代謝后，基因組DNA 會混合進孕婦外周血漿，使檢測呈假陽性，導致檢測出現(xiàn)錯誤結果；③影像學檢查胎兒懷疑患有其他染色體異常或微缺失微重復綜合征，具體為：上述疾病無法應用NIPT 進行檢測，若胎兒影像學檢測懷疑患有其他染色體異常或微缺失微重復綜合征，應盡快執(zhí)行介入性產前診斷；④各種高風險基因病人群，具體為：基因病無法應用NIPT進行檢測，若家族有高風險基因病遺傳史，應盡快執(zhí)行介入性產前診斷[6]。

1.2 方法 首先，樣本采集5 mL外周靜脈血，置于乙二胺四乙酸抗凝管中，明確標注取血日期及血漿編號。4 ℃環(huán)境下1 600 r/min離心10 min分離血漿。對初步分離出的血漿再次使用離心機，同樣以1 600 r/min轉速行離心操作10 min，除去白細胞和殘留碎片，取微量離心管，將離心后血漿倒入其中，于-80 ℃環(huán)境中貯存。選取新鮮無污染且質量良好樣本送去檢測[7]。其次，在BD管中加入Bindding buffer 2 mL、血漿樣本1 mL、磁珠20 μL、Proteinase K溶液50 μL，將該BD管垂直放置于12 r/min轉速混合儀中，正常室溫條件下使液體混合。用移液器取出混合液中磁珠，放入分離磁珠專用臺上試管內去除上層清液。離心管中加入Wash buffer Ⅰ500 μL，放置至徹底沉淀，去除上層清液。再將Wash buffer Ⅱ500 μL緩慢加入離心管中，重復上述操作。再將Wash buffer Ⅱ550 μL緩慢加入離心管中，重復上述操作。離心管中加入Elution buffer 100 μL，液體混勻后置于50 ℃恒溫水浴鍋中，每2分鐘混合1次，取混合液在磁珠分離臺處放置，去除上層清液。利用核酸定量計生成DNA 文庫，測定核酸片段數量，計算染色體覆蓋深度值，按照此步驟依次進行可直接推算出風險指數。最后，檢測孕婦分娩風險高的須通過羊水穿刺、臍血穿刺等手段進一步分析染色體核型，以診斷胎兒染色體非整倍體情況[8]。

1.3 觀察指標 觀察納入孕婦性染色體非整倍異常情況，并對篩查高風險孕婦行羊水穿刺、臍血穿刺等手段分析染色體核型，評價無創(chuàng)產前篩查與染色體核型分析結果是否一致。同時，對無創(chuàng)產前低風險篩查孕婦進行定期隨訪。

1.4 統(tǒng)計學方法 將所有數據輸入Excel表中進行描述性分析。

2 結果

2.1 性染色體非整倍異常檢測情況 收取外周血標本102份，NIPT檢測顯示性染色體非整倍異常16例。經咨詢發(fā)現(xiàn)，16 例孕婦均自愿接受檢測，其中NIPT 與染色體核型分析結果一致 6 例，包括（45，X）3 例；（46，XXX）1 例；（46，XX）1 例；（47，XXY）1例，見表1。

表1 性染色體非整倍異常檢測情況

2.2 無創(chuàng)產前篩查符合率分析 收取外周血標本102 份，檢測顯示高風險8 例，檢出陽性率7.84%。經染色體核型分析和無創(chuàng)產前篩查，發(fā)現(xiàn)兩種檢測結果完全相同，符合率高達100.00%，見表2。

表2 染色體核型分析和無創(chuàng)產前篩查檢測結果

3 討論

染色體非整倍體包括21-三體異常、18-三體異常、13-三體異常等，是遺傳缺陷的一種表現(xiàn)形式。據研究[9]，染色體非整倍體疾病發(fā)生率與孕婦年齡呈正相關。基于此，孕婦產齡越高所面臨的風險越高，胎兒患病率也就越高，臨床建議高齡孕婦產前行染色體非整倍體檢查診斷。傳統(tǒng)診斷技術的創(chuàng)傷性較高，孕婦行檢查易發(fā)生宮內感染、流產等現(xiàn)象，危及胎兒健康。為有效降低產前檢測風險，需使用新型產前篩查手段。

20 世紀末，相關學者發(fā)現(xiàn)，孕婦外周血內存在胎兒DNA游離片段，胎兒有150 bp 源于胎盤滋養(yǎng)細胞形成的DNA 片段，并在母體妊娠5 周后可檢測顯示[10]。不少學者開始按照這一探索思路進行深入研究，并將這一技術應用到胎兒染色體非整倍體疾病篩查中。無創(chuàng)產前DNA 檢測作為新型產前診斷技術之一，具有安全、無創(chuàng)、快速等優(yōu)勢，后應用高通量測序技術檢測采集母體外周血中游離DNA 數目，判斷胎兒染色體數據異常情況[11]。本研究結果顯示，102份標本中，NIPT 檢測顯示性染色體非整倍異常16 例。經咨詢發(fā)現(xiàn)，16 例孕婦均自愿接受檢測，其中NIPT 與染色體核型分析結果一致6 例。檢測顯示高風險8 例，檢出陽性率7.84%。染色體核型分析結果等同于無創(chuàng)產前篩查檢測結果。

綜上所述，孕早期孕婦可通過無創(chuàng)產前篩查及早發(fā)現(xiàn)胎兒異常染色體非整倍體疾病存在，并在無發(fā)生影響的情況下“止損”處理，降低缺陷兒降生率[12]。結合孕婦實際情況選擇合適臨床檢測方式盡早行產前篩查，針對胎兒染色體非整倍體疾病產前篩查應用無創(chuàng)產前DNA 檢測具有重要臨床價值，由于該檢測技術敏感性較高，因此，具有較高的準確性，且為無創(chuàng)操作，對孕婦及胎兒的傷害較小，是提高生育質量的重要技術。