離子色譜法測定牛黃清胃丸中二氧化硫殘留量

張 燁,李 靜,丁 華,陳羽涵,聶黎行*,姚令文*

(1. 鄂爾多斯市檢驗檢測中心,內蒙古 鄂爾多斯 017010；2. 中國食品藥品檢定研究院,北京 100050；3. 鄂爾多斯市蒙醫醫院,內蒙古 鄂爾多斯 017010)

二氧化硫因其干燥、漂白、防霉、防蟲等作用,廣泛用于中藥材的初加工和倉儲等環節[1]。經過硫磺熏蒸(簡稱硫熏)的藥材,色澤美觀、不易霉變生蟲、含水量高、貯藏期長。但過度熏蒸會改變藥性和化學成分,從而影響藥效[2],且易導致二氧化硫殘留,對人體產生潛在危害[3],故《中國藥典》2015年版對山藥、牛膝、黨參等10種中藥材及飲片中二氧化硫的限量作出了規定：二氧化硫殘留量不得超過400 mg·kg-1；其他中藥材及飲片中二氧化硫殘留量不得超過150 mg·kg-1。

牛黃清胃丸由人工牛黃、麥冬、大黃、菊花、桔梗等17味中藥材配研制成,具有清胃瀉火、潤燥通便的功效,用于心胃火盛,頭暈目眩,口舌生瘡,牙齦腫痛,乳蛾咽痛,便秘尿赤[4]。方中大黃、菊花、桔梗、麥冬等原料易變色或變質,為追求色澤美觀,延長儲存時間,在產地加工時可能使用硫熏[5-6],從而將二氧化硫殘留風險引入中成藥。隨著藥品分析技術的發展,中藥材及飲片中二氧化硫的檢測方法已基本成熟[6],中成藥中二氧化硫的測定尚未見報道。本文采用離子色譜法建立了牛黃清胃丸中二氧化硫的檢查方法[7],并首次提出了中成藥中二氧化硫的擬定殘留限度,為相關藥品的安全性研究提供了示范和參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240十萬分之一電子天平(瑞士Mettler公司),ICS-1100離子色譜儀,配有陰離子抑制器和電導檢測器(美國Dionex公司)。

1.2 藥品與試劑

本研究所用49批次牛黃清胃丸均為2018年國家藥品監督抽驗樣品,產自18個生產單位。硫酸根標準溶液(1000 mg/L)購于中國計量測試研究院。30%過氧化氫(優級純)、氫氧化鉀(分析純)、亞硫酸鈉(分析純)、鹽酸(優級純)購于國藥集團化學試劑有限公司,實驗用水為市售純凈水經Millipore純水處理系統純化所得。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：賽默飛-Thermo Dionex IonPac AS19 IC 色譜柱(250 mm × 4 mm),配有AG11-HC保護柱(50 mm × 4 mm),柱溫：35 ℃。氫氧化鉀溶液作為洗脫液進行梯度洗脫：0～20 min：8 mmol/L；20～25 min：40 mmol/L；25～30 min：8 mmol/L,流速1.0 mL/min。抑制器電流：60 mA。電導檢測器檢測池溫度：35 ℃。進樣體積：100 μL。

2.2 溶液的制備2.2.1 對照品溶液的制備

精密量取硫酸根標準溶液適量,分別加水稀釋制成濃度為0.5、1.0、2.0、10、20 mg/L的系列對照溶液,作為工作對照。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品重量差異項下的大蜜丸,剪碎,混勻,取約5.0 g,精密稱定,置兩頸燒瓶中,加水50 mL,振搖使分散均勻,接通水蒸氣蒸餾瓶。吸收瓶中加入3%過氧化氫溶液20 mL,吸收管下端插入吸收液液面以下。兩頸燒瓶中沿瓶壁快速加入鹽酸5 mL,立即密封,開始蒸餾。保持蒸餾瓶沸騰并調整蒸餾火力,使吸收管端的餾出液的流出速率約為2 mL/min。至吸收瓶中液體接近100 mL時,停止蒸餾,用水洗滌尾接管并轉移至吸收瓶中。加水定容至刻度,搖勻,靜置1 h,取上清液,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,取續濾液,即得。

2.2.3 空白溶液的制備

不加樣品,自“加水50 mL”起,按“2. 2. 2”項下方法操作,即得。

2.3 測定法

取系列工作對照溶液和供試品溶液,按“2.1”項下色譜條件進樣,標準曲線法測定供試品溶液中硫酸根離子含量,再以二氧化硫/硫酸根離子= 0.6669的分子量比折算樣品中二氧化硫殘留量。

2.4 方法學驗證2.4.1 專屬性實驗

分別取對照品溶液、供試品溶液與空白溶液,按“2.1”項下色譜條件進樣,由圖1可見,空白溶液不干擾硫酸根離子(二氧化硫)的測定。

圖1 HPLC色譜圖

2.4.2 線性關系、檢出限和定量限

取系列濃度的對照品溶液,進樣測定,以濃度為橫坐標X,峰面積為縱坐標Y,繪制標準曲線,并進行線性回歸,結果硫酸根離子在0.5～20 mg/L范圍內線性關系良好,回歸方程為Y=0.61X+0.03,相關系數(r)為0.9999。精密量取濃度為1 mg/L的對照品溶液適量,稀釋至不同濃度,進樣測定,測得檢出限(信噪比3∶1)為0.12 mg/L,定量限(信噪比10∶1)為0.37 mg/L。

2.4.3 精密度實驗

取濃度為1 mg/L的對照品溶液,按“2.1”項下色譜條件,連續進樣6次,測定硫酸根離子峰面積,計算RSD值為0.93%(n=6),表明儀器精密度良好。

2.4.4 重復性和回收率實驗

取本品重量差異項下的1號樣品,剪碎,混勻,取約5.0 g,精密稱定,置兩頸燒瓶中,精密加入亞硫酸鈉溶液1.5 mL(亞硫酸鈉溶液臨用新配,并用碘量法[8]標定,以二氧化硫計,濃度為0. 5010 g/L),自“加水50 mL”起,按“2. 2. 2”項下方法制備6份加樣回收溶液,按“2.1”項下色譜條件測定,計算得平均回收率為98.55%,RSD值為1.33%(n= 6),表明方法準確性和重復性良好,見表1。

表1 二氧化硫加樣回收率(n=6)

2.4.5 樣品測定結果

取18個廠家生產的牛黃清胃丸49批次,依法測定,結果所有樣品均未檢出二氧化硫。

3 討論

聯合國糧食及農業組織/世界衛生組織(Food and Agriculture Organization/World Health Organization,FAO/WHO)食品添加劑聯合專家委員會(Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives,JECFA)不定期對有害物質進行風險評估,制定并發布每千克體重每月/周/日可耐受攝入量。二氧化硫及亞硫酸鹽類物質作為食品添加劑的每千克體重每日可耐受攝入量(ADI)為0.7 mg/kg[9]。成年人的平均體重(BW)以60 kg計,則二氧化硫每日可耐受攝入量為42 mg。根據藥品標準或藥品使用說明書中用量計算,牛黃清胃丸每日服用量(F)為24 g。根據公式MRL=ADI×BW/F,得到牛黃清胃丸中二氧化硫的最大殘留限度(MRL)為1.75 mg/g。按此擬定限度評價,本文所測樣品二氧化硫均未超標,提示該品種二氧化硫殘留風險低。