B77 同源體6 在乳腺癌中的表達及對患者免疫治療療效和預后的評估價值

2021-08-19 01:37:44卜亞軍馬思芬羅桃艷

癌癥進展 2021年11期

卜亞軍，馬思芬，羅桃艷

開遠市人民醫院腫瘤血液科，云南開遠 661600

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，發病率呈逐年上升的趨勢，且有年輕化的傾向。目前，臨床主要采用手術、放療、化療、內分泌藥物治療、靶向藥物等治療乳腺癌，隨著診療技術的提高，程序性死亡受體1（programmed cell death 1，PDCD1，也稱PD-1）/程序性死亡受體配體1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也稱PD-L1）等免疫藥物開始逐漸應用于乳腺癌免疫治療并可明顯改善患者的生活質量，延長生存期，但其相關作用機制、遠期療效及對患者免疫功能的影響尚有待進一步明確。

腫瘤免疫逃逸是引起腫瘤細胞侵襲、轉移的重要機制之一，其中T 淋巴細胞介導的免疫應答是重要環節，T淋巴細胞活化不僅需要抗原肽復合物提供刺激信號，還需要協同刺激分子提供輔助信號。B7是重要的協同刺激分子家族成員，可結合抗原提呈細胞配體和T 細胞受體，誘導T 細胞活化。B7同源體6（B7 homolog 6，B7-H6）是重要的B7 家族成員，相關研究提示，B7-H6 在卵巢癌患者中異常高表達，但目前關于B7-H6 在乳腺癌中的研究不多，因此，本研究探討B7-H6 在乳腺癌患者免疫治療及預后評估中的意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年10 月至2019 年10 月開遠市人民醫院收治的三陰性乳腺癌患者。納入標準：①均經病理學檢查確診為乳腺癌，均為女性；②雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）均表達陰性；③均為復發或轉移乳腺癌；④具有可測量的病灶；⑤臨床、隨訪資料完整。排除標準：①距上次治療時間﹤3 個月；②合并其他系統惡性腫瘤。依據納入和排除標準，本研究共納入84 例三陰性乳腺癌患者，年齡41～72 歲，平均年齡（57.87±10.41）歲；美國癌癥聯合委員會（American Joint Committee on Cancer，AJCC）分期：Ⅲ期（TNM、TNM、TNM，TNM）60 例，Ⅳ期（TNM）24 例。同期選取50 例乳腺良性病變患者作為對照組，年齡38～70 歲，平均（56.68±9.54）歲；病理類型：乳腺脂肪瘤19 例，乳腺結節21 例，乳腺纖維瘤10 例。取84 例三陰性乳腺癌患者的乳腺癌組織和50 例乳腺良性病變患者的正常乳腺組織。

1.2 療效評價標準

PD-1 免疫治療3 個月后，參照實體瘤療效評價標準1.1 版（response evaluation criteria in solid tumor 1.1，RECΙST1.1）評價80 例乳腺癌患者的臨床療效：完全緩解（complete response，CR），腫瘤病灶完全消失，且至少維持4 周；部分緩解（partial response，PR），腫瘤病灶最大徑之和減少≥30%，且至少維持4 周；疾病穩定（stable disease，SD），腫瘤病灶最大徑之和減少﹤30%或增加﹤20%，且至少維持4 周；疾病進展（progressive disease，PD），腫瘤病灶最大徑之和增加≥20%或出現新病灶。

1.3 實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（quantitative reverse transcription-polymerase chain reac--tion，qRT-PCR）檢測B77-H6 mRNA的相對表達量

取乳腺癌組織和正常乳腺組織石蠟包埋，4 μm 厚度連續切片，置于潔凈離心管內，提取DNA，采用紫外分光光度儀測定樣本濃度和純度，進行質控。采用基因檢測試劑盒加樣上機進行PCR反應，待PCR完成后，按照試劑盒結果判讀標準記錄結果。PCR 反應過程：95 ℃變性5 min，1 個循環；95 ℃變性25 s，64 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，15個循環；93 ℃變性25 s，60 ℃退火35 s，72 ℃延伸20 s，31 個循環。

1.4 隨訪方法

采用來院進行影像學評估的方式進行隨訪，每3 個月1 次，隨訪截止時間為2021 年1 月，記錄無進展生存期（progression-free survival，PFS）。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 B77-H6 相對表達量的比較

乳腺癌組織中

mRNA 相對表達量為（5.41±1.24），明顯高于正常乳腺組織的（1.35±0.38），差異有統計學意義（

=28.691，

=0.000）。依據RECΙST1.1，84 例三陰性乳腺癌患者中CR+PR共8 例，SD+PD 共76 例，CR+PR 患者

mRNA的相對表達量為（5.01±0.62），明顯低于SD+PD 患者的（5.52±0.50），差異有統計學意義（

=2.683，

=0.009）。

2.2 B7-H6 mRNA 相對表達量對三陰性乳腺癌患者近期療效的預測價值

mRNA 相對表達量預測三陰性乳腺癌患者近期療效的AUC 為0.844（95%CΙ：0.782～0.901，

﹤0.05），最佳截斷值為5.30 時，靈敏度和特異度分別為86.00%和87.00%。（圖1）

圖1 B7-H66 mRNA相對表達量預測三陰性乳腺癌患者近期療效的ROC曲線

2.3 不同臨床特征三陰性乳腺癌患者乳腺癌組織中B7-H6 mRNA 相對表達量的比較

不同年齡、腫瘤直徑、分化程度、病理類型、Ki-67表達情況、

P53

突變情況及手術情況三陰性乳癌腺癌患者乳腺癌組織中

mRNA 相對表達量比較，差異均無統計學意義（

﹥0.05）。AJCC 分期為Ⅳ期的三陰性乳癌腺癌患者乳腺癌組織中

mRNA 的相對表達量明顯高于AJCC 分期為Ⅲ期的患者，差異有統計學意義（

﹤0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征三陰性乳腺癌患者乳腺癌組織中B7-H6 mRNA 相對表達量的比較（n=84）

2.4 不同B7-H6 mRNA 相對表達量三陰性乳腺癌患者預后情況的比較

以

mRNA 相對表達量5.30 為臨界值，將84 例三陰性乳腺癌患者分為高表達組（

=51，

mRNA 相對表達量≥5.30）和低表達組（

=33，

mRNA 相對表達量﹤5.30），高表達組患者的中位PFS 為11 個月（95%CΙ：10.19～11.81），明顯短于低表達組患者的18 個月（95%CΙ：14.54～21.46），差異有統計學意義（

=6.887，

=0.009）。（圖2）

圖2 B7-H6 mRNA高表達組（n=51）和低表達組（n=33）三陰性乳腺癌患者的PFS曲線

3 討論

相關數據顯示，三陰性乳腺癌約占所有乳腺癌類型的15%，與其他類型的乳腺癌相比極具侵襲性，三陰性乳腺癌對常見的內分泌療法或HER2 靶向療法均不敏感。研究顯示，三陰性乳腺癌患者腫瘤突變負荷大、PD-L1 陽性比例高、腫瘤浸潤性淋巴細胞比例高，因此，免疫治療可能對其有效，但遠期預后評估還有待進一步明確。

B7-H6 是自然殺傷（natural killer，NK）細胞和T 淋巴細胞活化的重要配體，能夠通過分泌細胞因子產生抗腫瘤免疫作用。研究發現，B7-H6 在白血病、淋巴瘤、黑色素瘤及其他原發腫瘤細胞中均高表達，而在正常細胞中幾乎不表達。本研究通過實時熒光qRT-PCR 法檢測三陰性乳腺癌組織及正常乳腺組織中

mRNA 的相對表達量，并分析其對PD-1 免疫治療的預測價值及對患者預后的影響，旨在為臨床乳腺癌的免疫治療提供參考。本研究結果顯示，乳腺癌組織中

mRNA的相對表達量明顯高于正常乳腺組織。NK 細胞可廣泛參與炎性反應與適應性免疫應答反應，通過釋放趨化因子和細胞因子在抗腫瘤、抗病毒感染及干細胞移植等方面發揮重要作用，是固有免疫系統的重要組成部分，而NK 細胞的活化受其細胞表面抑制信號及活化信號的共同調控。相關研究提示，B7-H6 在細胞從良性逐漸向惡性轉化時表達上調，與NKp30 受體結合并激活NK 細胞，進而介導機體固有免疫反應機制。B7-H6 表達與乳腺癌臨床病理研究結果顯示，國際婦產科聯盟（Ιnternational Federation of Gynecology and Obstetrics，FΙGO）分期為Ⅳ期的乳腺癌患者乳腺癌組織中

mRNA 的相對表達量明顯高于Ⅲ期患者。上述結果表明，隨著乳腺癌的進展，B7-H6 的表達逐漸升高。B7-H6/NKp30 途徑主要通過促進其分泌ΙL-2 和ΙFN-γ等細胞因子分泌和誘導NK 細胞活化，進而提升NK 細胞殺傷能力，發揮抗腫瘤免疫作用。國外研究發現，整合素金屬蛋白酶10（a disintegrin and metalloprotease 10，ADAM10）可以抑制NK 細胞通過NKp30 受體途徑識別腫瘤細胞，介導腫瘤細胞外B7-H6分子的脫落，因此，通過抑制ADAM10活性，可上調腫瘤細胞B7-H6的表達，進而提高NKp30介導的NK細胞活化能力，這也為B7-H6 的機制研究提供了基礎。因此，B7-H6/NKp30 途徑具有抑制腫瘤細胞逃避免疫監視的作用，這也可能是B7-H6 介導乳腺癌進展的重要基礎。B7-H6 主要表達于腫瘤細胞表面，免疫組化法可在胃癌及非小細胞肺癌等腫瘤組織中檢測到B7-H6 蛋白的表達，但關于其表達情況與治療預后的研究還不夠深入。本研究以

mRNA 相對表達量5.30 最佳截斷值，將84 例三陰性乳腺癌患者分為高表達組和低表達組，結果顯示，高表達組患者的中位PFS為11個月，明顯短于低表達組患者的18 個月。表明通過分析三陰乳腺癌患者B7-H6的表達情況，可有效評估對免疫治療療效及患者的預后。B7-H6 不僅能夠在NK 細胞的生物學功能及活化進程發揮重要作用，亦可通過基因修飾途徑參與T 淋巴細胞介導的抗腫瘤免疫應答。相關動物實驗發現，通過特異性地識別表達B7-H6 的腫瘤細胞而促進淋巴瘤小鼠模型

基因的表達，分泌γ干擾素（interferon-γ，ΙFN-γ）并殺傷腫瘤細胞，進而抑制小鼠腫瘤細胞的生長，進而為乳腺癌的免疫治療提供新思路。

既往關于B7-H6 與乳腺癌的治療研究較少，本研究針對性地對乳腺癌免疫治療的靶向因子進行了相關機制分析，為臨床乳腺癌的治療提供參考，亦可為臨床藥物的進一步研究提供新的思路，具有一定的臨床價值和創新性。

綜上所述，B7-H6 在三陰乳腺癌中表達上調，AJCC 分期越高，B7-H6 表達越高，可有效預測免疫治療療效及患者的預后。