葉酸受體1、間皮素蛋白在卵巢癌中的表達及臨床意義

黃華民，康燕，崔英，李嫻

青海紅十字醫院婦二科，西寧 810000

卵巢癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤，發病率較高，患者預后較差。由于其發病隱匿，70%以上的患者在就醫時伴有遠處轉移，進入腫瘤晚期。晚期卵巢癌的標準治療方法是手術和鉑類化療，但2 年內復發率較高，并且復發后缺乏有效的治療方法。因此，尋找高靈敏度和高特異度的實驗室卵巢癌標志物對早期診斷和準確評估病情具有重要意義。葉酸受體1（folate receptor 1，FOLR1）是葉酸受體家族的特征成員，在婦科惡性腫瘤中，FOLR1 的表達異常升高，并且由于FOLR1 易于從腫瘤細胞表面脫落到血液中，因此血清檢測靈敏度高。但目前FOLR1 在卵巢癌中高表達的機制仍不清楚，其在卵巢癌發生和發展中的作用尚有爭議。間皮素（mesothelin，MSLN）主要通過糖基磷脂酰肌醇附著在細胞膜上，在各種惡性實體瘤中均有較高水平。有研究認為，MSLN 和糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）共同促進卵巢癌的轉移。本研究主要通過回顧性分析觀察卵巢癌患者FOLR1、MSLN 蛋白表達情況的變化，并分析其臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017 年3 月至2020 年6 月在青海紅十字醫院接受治療的卵巢癌患者的病歷資料。納入標準：①符合卵巢癌的診斷標準；②無其他系統嚴重疾病；③具有完整的臨床資料。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②有自身免疫性疾病、甲狀腺疾病等其他疾病；③2 周內應用過抗生素。根據納入、排除標準，共納入80 例卵巢癌患者，年齡18～80歲，平均（56.74±2.28）歲；國際婦產科聯盟（Ιnternational Federation of Gynecology and Obstetrics，FΙGO）分期：Ⅰ期32 例，Ⅱ期20 例，Ⅲ期15 例，Ⅳ期13 例；分化程度：高分化35 例，中分化25 例，低分化20 例；化療≥6 個周期48 例，﹤6 個周期32 例；有淋巴結轉移33 例，無淋巴結轉移47 例；伴腹腔積液45 例，無腹腔積液35 例。取80 例卵巢癌患者的卵巢癌組織及癌旁正常卵巢組織。

1.2 檢測及評價方法

采用免疫組織化學法檢測FOLR1、MSLN 的表達，檢測儀器為美國西門子醫學診斷股份有限公司的ATELLΙCA 化學發光儀及配套套件。手術切除的標本組織，經10%甲醛固定24～48 h，石蠟包埋。石蠟標本連續切片4 張，厚度約為4 mm，于60 ℃烘烤3 h，常規脫蠟，加入3%HO10 min，在室溫下孵育，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）洗滌3 次，每次3 min，檸檬酸溶液修復，PBS 洗滌3 次，每次3 min，加一抗孵育過夜，PBS 洗滌3 次，每次3 min，添加聚合物增強劑，在室溫下孵育20 min，PBS 洗滌3 次，每次3 min，室溫下添加酶標記的抗小鼠聚合物（二抗），在室溫下孵育30 min，PBS 洗滌3 次，每次3 min，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色后用水沖洗，蘇木素復染，常規脫水封片。試劑盒購自北京中山生物制品有限公司。

根據染色強度及陽性細胞百分比計分。染色強度：無色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；陽性細胞百分比：無陽性細胞為0 分，1%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3分，76%～100%為4 分；染色強度和陽性細胞百分比得分的乘積作為最終得分，0～4 分為蛋白質表達陰性（-），﹥4 分為蛋白質表達陽性（+）。

1.3 觀察指標

采用免疫組織化學法檢測FOLR1、MSLN 在卵巢癌組織及癌旁正常卵巢組織中的表達，比較不同臨床特征卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 蛋白的差異。

1..4 統計學分析

2 結果

2.1 FOLR1、MSLN 蛋白表達情況的比較

卵巢癌組織中的FOLR1、MSLN 陽性表達率均明顯高于癌旁正常卵巢組織，差異均有統計學意義（

P

﹤0.01）。（表1）

表1 卵巢癌組織及癌旁正常卵巢組織中FOLR11、MSLN蛋白表達情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 蛋白表達情況的比較

低分化、FΙGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的卵巢癌患者的卵巢癌組織中FOLR1 陽性表達率分別高于高中分化、FΙGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移患者，差異均有統計學意義（

χ

=4.706、7.602、6.312，

P

﹤0.05）；低分化、FΙGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的卵巢癌患者的卵巢癌組織中MSLN 陽性表達率分別明顯高于高中分化、FΙGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移患者，差異均有統計學意義（

χ

=15.038、23.375、33.229，

P

﹤0.01）。不同年齡、化療周期卵巢癌患者的卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 陽性表達率比較，差異均無統計學意義（

P

﹥0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR11、MSLN蛋白表達情況

2.3 卵巢癌患者FOLR1、MSLN 蛋白表達情況影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統計學意義的因素作為自變量（分化程度：高中分化=0，低分化=1；FΙGO分期：Ⅰ～Ⅱ期=0，Ⅲ～Ⅳ期=1；淋巴結轉移：無=0，有=1），將卵巢癌患者的FOLR1、MSLN 表達作為因變量，進行多因素回歸分析。結果顯示，FΙGO 分期是影響卵巢癌患者FOLR1、MSLN 表達的因素（

P

﹤0.05）。（表3）

表3 卵巢癌患者FOLR11、MSLN 蛋白表達情況影響因素的多因素分析

3 討論

卵巢癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，由于卵巢位于骨盆腔的深處，卵巢癌缺乏特異的癥狀和體征，發病隱匿，發現時患者大多處于晚期，并且失去了最佳治療機會。晚期卵巢癌患者預后較差，如果在疾病的早期可以診斷卵巢癌，可能會提高治愈率和生存率。提高卵巢癌的早期診斷準確率對于改善患者的預后具有重要意義。血清腫瘤標志物是由腫瘤細胞異常表達產生的蛋白質和生物抗原，有助于惡性腫瘤的診斷和病情評估。由

FOLR1

基因編碼的葉酸受體α通過糖基磷脂酰肌醇與細胞膜表面偶聯的單鏈糖蛋白結合并轉運葉酸進入細胞。FOLR1 在許多惡性腫瘤細胞（例如宮頸癌、肝癌、子宮內膜癌等）的基底膜和側膜上顯著表達。腫瘤細胞可以通過上調FORL1 增加葉酸的攝取，并促進DNA 合成以確保腫瘤細胞的快速增殖。研究認為，FOLR1 有利于腫瘤細胞的增殖和修復，與腫瘤細胞的惡性行為密切相關，并且與患者的臨床特征有一定關系。本研究結果顯示，卵巢癌組織中的FOLR1 陽性表達率明顯高于癌旁正常卵巢組織，并且低分化、FΙGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR1 陽性表達率較高，該結果表明，FOLR1 的表達對卵巢癌具有一定的診斷價值，這是因為FOLR1 有利于腫瘤細胞的生長和增殖，可以促進腫瘤細胞轉移和其他惡性行為。本研究結果顯示，卵巢癌組織中的FOLR1、MSLN 陽性表達率均明顯高于癌旁正常卵巢組織，這表明FOLR1 和MSLN 可能共表達發揮作用。低分化、FΙGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的卵巢癌患者卵巢癌組織中MSLN 陽性表達率較高，可見，卵巢癌患者MSLN 蛋白陽性表達率較高，與臨床分期、分化程度和淋巴結轉移密切相關。這表明MSLN 可能是卵巢癌重要的不良預后因素。因此，抑制MSLN 的表達可能是減緩卵巢癌侵襲和耐藥性的重要方向。

MSLN

基因位于16p13.3 號染色體上，含有17 個外顯子，編碼628 個氨基酸，在細胞內被蛋白酶水解并剪接成兩部分，羧基端的疏水序列被糖基磷脂酰肌醇取代并偶聯到細胞膜上，稱為MSLN。MSLN 屬于一種可以被單克隆抗體K1特異性識別的抗原，其基因編碼產生的膜結合蛋白在常見的惡性腫瘤組織如卵巢癌、肺癌和宮頸癌中高表達。MSLN 是一種腫瘤分化抗原，主要影響惡性腫瘤細胞的分化程度及其生物學特性。在體外卵巢癌細胞實驗中，已發現該蛋白的異常升高可能與惡性腫瘤細胞的增殖有關。研究表明，上皮性卵巢癌患者的臨床分期越高、分化程度越低且有淋巴結轉移患者的MSLN 蛋白陽性表達率越高，這與本項研究結果一致，本研究中低分化、FΙGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 陽性表達率均較高，不同年齡、化療周期卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 陽性表達率無差別。FOLR1、MSLN 表達水平可用于評估臨床分期、分化程度和淋巴結轉移，可預測疾病發展和預后。將卵巢癌患者的FOLR1、MSLN 水平作為因變量，將單因素分析中差異有統計學意義的因素作為自變量，進行多因素回歸分析。結果顯示，FΙGO 分期是影響卵巢癌患者FOLR1、MSLN 表達的因素。該結果表明，卵巢癌患者中FOLR1和MSLN的水平與FΙGO分期密切相關，三者的水平升高可反映卵巢癌的發展和惡化，可作為卵巢癌診斷和病情評估的指標。

目前臨床對于卵巢癌的臨床診斷指標尚不統一，本研究通過對卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 蛋白陽性表達率進行研究，以期及時對卵巢癌患者進行早期診斷及改善預后。但本研究樣本量很小，結果可能會存在偏差，因此下一步研究中需要擴大樣本量以獲得更準確的診斷結果。

綜上所述，卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 蛋白陽性表達率均較高，且受FΙGO 分期的影響，可以用于卵巢癌的早期診斷。