大鼠癲癇持續狀態后海馬神經傳遞環路CB1R表達特征

孟憲棟， 張海鋒

大麻素Ⅰ型受體(CB1R)在中樞神經系統廣泛分布，主要存在于興奮性和抑制性突觸終末，內源性大麻素(endocannabinoids，EC)在神經元活動加強時，可以在突觸后神經元合成、釋放，抑制谷氨酸和GABA釋放[1]，對神經傳導進行調控。近年來，CB1R 介導的信號機制被認為在控制癲癇急性發作上發揮重要作用[2，3]，因此推測CB1R可能與癲癇發生有關，并且在癲癇發生中對CB1R表達進行了探討。海馬內部存在由內嗅區-齒狀回-CA3區-CA1區-下托皮質-內嗅區的單向神經傳遞環路[4]，SE后海馬神經傳遞閉合環路上CB1R表達特征未見報道。因此，我們對大鼠SE后，海馬神經傳遞閉合環路上CB1R進行光密度測定，觀察各區域CB1R表達的時空特征，探討CB1R在癲癇發生中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 3月齡SD大鼠(空軍軍醫大學動物實驗中心)，清潔級，不限雌雄，實驗獲空軍軍醫大學動物倫理委員會批準。

1.1.2 主要試劑 CB1R抗體(Abcam)，GFAP抗體(Sigma)，NeuN抗體(Sigma)。

1.1.3 主要儀器 冰凍切片機(Leica)，正置顯微鏡(Olympus)。

1.2 方法

1.2.1 氯化鋰-匹羅卡品建立慢性癲癇模型 SD大鼠隨機分成實驗組和對照組，建立氯化鋰-匹羅卡品癲癇模型。給大鼠腹腔注射氯化鋰(127 mg/kg)，18～20 h后，甲溴東莨菪堿 (1 mg/kg) 腹腔注射，30 min后，腹腔注射匹羅卡品(30 mg/kg)，對發作進行分級[5]：Ⅰ級：肢體和面部自動癥；Ⅱ級：點頭和咀嚼；Ⅲ級：前肢痙攣；Ⅳ級：伴直立的前肢痙攣；Ⅴ級：摔倒。≥Ⅳ級判定為癲癇持續狀態(status epilepticus，SE)，發作持續1 h，腹腔注射地西泮(10 mg/kg)終止。依據SE后不同時間點，分為SE1 w、2 w、3 w、4 w，每組4只，各時間點設立對照組，對照大鼠腹腔注射0.9%NaCl溶液，其他操作與實驗組相同。

1.2.2 海馬組織標本制備 SE后1 w、2 w、3 w、4 w組SD大鼠以及對照組大鼠，進行10%水合氯醛麻醉，灌注固定。……