獻血者HBV核酸檢測非重復反應性確認及追蹤結果分析

高 磊 趙 梅 高文杰

1 周口市中心血站檢驗科(周口 466000) 2 周口市第二人民醫院婦產科(周口 466000)

隨著人們健康意識、服務保健意識的增強，我國獻血團隊日益擴大。此時對于血站而言，需要確保血液安全，探尋合理、有效的假反應性獻血者的歸隊措施。同時輸血傳播疾病殘余風險一直是醫療工作者重點關注問題，為了提高輸血安全性，減少疾病傳播，我國在2015年開始推廣核酸擴增檢測技術，對血液進行病毒檢測，發現檢測反應者，杜絕其輸血情況，以此減少輸血風險[1-2]。但對初次核酸檢測反應而經鑒定試驗存在非反應性的血液樣本，缺少進一步確認方法，存在假反應性問題，使此類獻血者的歸隊策略模糊不清[3]。尤其是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核酸檢測有反應性者，永久性屏蔽及杜絕對此類獻血者的獻血策略，但單項核酸檢測有反應者是否能夠歸隊，仍有一定爭議。現本文分析獻血者HBV核酸檢測非重復反應性確認情況，予以二次追蹤，了解其追蹤結果。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2019年1月—2020年12月到我站無償獻血者1 200例，男652例，女548例；年齡18～48(35.41±2.52)歲。獻血人員在獻血前通過速率技術、膠體金法技術快速測定后，血液樣本合格，與《獻血者健康檢查要求》[4]的相關標準相符合。所有獻血者留取2管血液樣本5～8 mL，置于EDTA-K2真空抗凝管內，對置有分離膠的真空抗凝管的血液予以核酸反應檢測，篩選單項核酸有反應性的獻血人員予以二次追蹤。所有患者檢測資料完整，有詳細的地址、電話資料；在知情同意下自愿進行追蹤結果及反復確認；該研究無倫理糾紛，符合醫學倫理委員會審批標準。

1.2 檢測方法

所抽取的血液樣本予以酶聯免疫吸附法檢測，檢測診斷儀器(FAME24/30型，瑞士)、340rt酶標儀(奧地利)，對血液樣本行乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、抗-HIV、抗-HC的檢驗，若對一種試劑有反應，需要用兩種試劑進行雙孔檢測，若對1孔有反應即為不合格。核酸檢測：Procleix PANTHER核酸檢測儀(蓋立復)，及配套試劑，對血液行核酸檢測。對單項核酸有反應樣本而鑒定試驗無反應性的樣本(非重復反應性樣本)進行再次確認，并補充乙肝“兩對半”試驗(試劑盒由北京萬泰提供)，用熒光定量PCR技術檢測HBV-DNA，嚴格按說明書操作。

1.3 觀察指標

(1)調查150份血液樣本經核酸檢測有反應性樣本；(2)統計單項核酸檢測反應樣本的不同核酸系統重復測定結果，統計仍有反應性與非反應性的樣本；(3)比較重復檢測的反應性與非反應性組別對象的乙肝兩對半檢測結果包括HBsAg、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、抗-HBs、抗-HBe及抗乙型肝炎核心抗體(抗-HBc)；(4)對血液樣本判定追蹤結果，了解其追蹤結果；(5)不同核酸檢測值HBV-DAN確認陽性率。

1.4 統計學方法

使用SPSS 20.0軟件進行數據統計。計數數據以率(%)表示，采取χ2檢驗；P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 調查結果

1 200份無償獻血血液樣本單項核酸檢測有反應性者150份(12.50%)。

2.2 單項核酸檢測有反應性樣本重復檢測結果分析

150份單項核酸檢測有反應性樣本經重新病毒核酸檢測后，仍有58例樣本有反應性(38.67%)、92例樣本為非反應性(61.33%)。

2.3 單項核酸檢測有反應性的樣本經乙肝兩對半檢測結果比較

單項核酸檢測重復有反應性樣本的抗-HBs陽性率低于重復檢測無反應性樣本，抗-HBc陽性率均高于重復檢測無反應性樣本，差異有統計學意義(P<0.05)，其他HBsAg、HBeAg、抗-HBe檢測陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 單項核酸檢測有反應性的樣本經乙肝兩對半檢測結果比較 n(%)

2.4 追蹤結果

其中有18例獻血者實際召回并到院抽血，完成兩次追蹤，第一次追蹤60～125天，第二次追蹤間隔天數在160～356天，第一次追蹤HBV DNA有反應(+)8例，第二次追蹤仍存在反應(+)；7例HBV DNA有反應者存在抗-HBc陽性(+)，見表2。

表2 18例血清樣本追蹤檢測結果

2.5 不同核酸檢測值HBV-DAN確認陽性率

核酸反應檢測10～17值HBV-DNA陽性37.25%高于核酸反應檢測值<10值的4.17%，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

3 討 論

輸血工作的展開，其中最為顯著的是血液安全隱患。其中與輸血有關的傳染病的主要病原體有HBV、丙型肝炎病毒(HCV)、艾滋病(HIV)，此時在輸血重要工作中，發現輸血病毒檢測有反應性樣本，可減少輸血相關的傳染病癥，提高輸血安全性[5]。自核酸擴增檢測技術在我國血站推廣，可在極大程度上確保血液質量與輸血安全性。但在HBV核酸檢測時，仍存在一定假陽性，使諸多獻血者被永久性屏蔽，拒絕其進入獻血工作，尤其是固定機采集血小板進行獻血時，諸多獻血人員被屏蔽參加獻血工作后，會明顯增加采血、供血的需求矛盾[6-7]。因此對初次核酸檢測有反應的獻血者，是否能歸隊，或如何制定屏蔽措施，或者采用不同檢測方法制定不同的屏蔽方法，仍需要醫務工作者重點解決。有研究證實[8]，對核酸單次檢測有反應性以及混檢樣本(≤8份)在初次、分次拆開檢測均存在反應性的血液樣本，需要采用報廢處理，若再次檢測的血液樣本經重復檢測為假陽性后的獻血者可以再次進入獻血程序。尤其是我國在2019年頒布血站操作技術后，對血清學與核酸共同檢測存在反應性的獻血人員，可以進行永久性屏蔽，但對單次核酸檢測有反應而酶聯免疫檢測無反應獻血者，是否歸隊缺乏明確指引[9]。因此對血站而言，需要看待核酸檢測的假陽性情況。

本組研究調查1 200份無償獻血血液樣本單項核酸檢測有反應性者150份(12.50%)。150份單項核酸檢測有反應性樣本經重新病毒核酸檢測后，仍有58例樣本有反應性(38.67%)、92例樣本為非反應性(61.33%)。據林詩雅等[10]報道單次核酸檢測有反應性樣本進行重復檢測核酸仍有反應性占23.01%，非反應性占301例。其兩者之間的檢測數據存在差異可能是我國各地區HBV感染存在地區差異，或者是核酸檢測流程以及核酸檢測試劑不同導致的數據差異，但大致數據報道基本一致。雖然核酸檢測技術能夠降低輸液傳染病的發生風險，但仍存在HBV傳播風險[11]。

本組研究，單核核酸檢測重復有反應性樣本的抗-HBs陽性率低于重復檢測無反應性樣本，抗-HBc陽性率均高于重復檢測無反應性樣本(P<0.05)，其中有18例獻血者實際召回抽血，完成兩次追蹤，第一次追蹤HBV DNA有反(+)8例，第二次追蹤仍存在反應(+)；7例HBV DNA有反應者存在抗-HBc陽性(+)。核酸反應檢測10～17值HBV-DNA陽性37.25%高于核酸反應檢測值<10值的4.17%(P<0.05)。結果證實核酸檢測有反應性患者均存在一定的乙肝病毒陽性情況，由于獻血者的不理解、不同意，或者聯系方式改變等情況，實際完成二次追蹤人數較少，使研究結果數據的科學性存在一定偏頗。而在二次追蹤結果發現，對核酸檢測有反應者存在HBV暴露史。另外樣本HBV-NDA檢測時，吸取存在HBV-NDA病毒的血清樣本存在一定差異，容易出現核酸檢測結果不一致情況。此時根據核酸檢測反應以及乙肝兩對半檢測結果，可以發現獻血者存在一定的HBV隱匿性感染問題，或者是在病毒感染的恢復期，使其血液存在HBV感染特征。一般隱匿性HBV感染的樣本存在較低的HBV-NDA病毒載量，導致核酸檢測結果出現非重復性結果[12]。而在核酸檢測非重復性檢測結果的樣本中，仍有一定的檢測真陽性，HBV感染風險較高。因此對于血站而言，若獻血者經單項核酸檢測存在反應性，可在2～6個月后再次復查血液項目，若無檢測反應或檢測陽性，可適當使其回歸到獻血團隊，若仍有核酸檢測反應，需要屏蔽此類型的獻血資格。同時要完善核酸檢測過程，制定完善、合理的獻血屏蔽以及歸隊策略，減少獻血人員的流失以及獻血資源的浪費，必要時采用化學發光法，制定合理的獻血歸隊策略，以此提高獻血安全性。

綜上所述，部分單項核酸檢測反應無償獻血者存在一定的輸血傳播HBV風險，多為HBV隱匿性感染，此時需要重視其輸血情況，屏蔽二次追蹤后仍有單項核酸反應性獻血者，考慮獻血的實際需求，提高輸血安全性。