藏藥柳茶的化學(xué)成分研究*

閆志慧，楊宗發(fā)，趙 娜，楊永建，朱仝飛△

（1.重慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，重慶 401331；2.重慶市藥物制劑工程技術(shù)研究中心，重慶 401331；3.蘭州大學(xué)，甘肅 蘭州 730000）

窄葉鮮卑花Sibiraea angustata（Rehd.）Hand.－Mazz.為薔薇科（Rosaceae）鮮卑花屬（Sibiraea）多年生落葉灌木植物，主要分布于青海、甘肅、四川、云南、西藏等地，生長(zhǎng)于海拔3 000～4 000 m 山坡灌木叢中或山谷砂石灘上。窄葉鮮卑花常被藏區(qū)牧民代茶飲用，因其葉片形似柳葉，故名“柳茶”?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，柳茶具有調(diào)節(jié)血脂［1］、降血糖［2］、保肝［3］、抗氧化［4］等作用?；瘜W(xué)成分研究表明，柳茶中含有三萜類［5－6］、單萜及其苷類［7－8］、有機(jī)酸及有機(jī)酯類［9－10］、黃酮及其苷類等化合物［11］。本研究中通過硅膠柱色譜、凝膠柱色譜，從柳茶葉的90%甲醇提取物中分離得到11 個(gè)化合物?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Bruker AVANCE－500 型核磁共振光譜儀（瑞士Bruker 公司）；LCMS－IT－TOF 型離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（日本Shimadzu 公司）；Waters Pro150 型制備高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；YMCODS－A 型色譜柱（250mm×10mm，5μm；日本YMC 公司）；RV3 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國IKA公司）；ZF－Z型三用紫外檢測(cè)儀（上海市安亭電子儀器廠）；KQ3200DE 型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

200～300 目柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；制備型薄層色譜硅膠F254（德國Merck 公司）；Sephadex LH－20（Amersham Pharmacia Biotech AB）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為純化水，色譜用水為超純水。柳茶藥材采自甘肅省甘南藏族自治州合作市市郊，經(jīng)蘭州大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)研究所楊永建教授鑒定為正品，藥材樣品標(biāo)本（2018517）保存于重慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校標(biāo)本館。

2 方法

2.1 提取與分離

取柳茶干燥葉2.5 kg，粉碎，用10 L 90%甲醇超聲（功率為500 W，頻率為8 kHz）提取3 次，每次2 h，提取液減壓濃縮，回收溶劑，得總浸膏0.56 kg。將總浸膏用1.5 L 水混懸，分別以等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3 次，減壓濃縮，回收溶劑，得乙酸乙酯層浸膏73.8 g和正丁醇層浸膏95.4 g。

將乙酸乙酯層浸膏經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次以二氯甲烷－丙酮（80∶1，50∶1，30∶1，15∶1，8∶1，1∶1，V／V）梯度洗脫，合并相同流分，得8 個(gè)組分Fr.1～8。Fr.3 經(jīng)硅膠柱色譜及制備薄層色譜分離，得化合物3（7.9 mg）、化合物4（9.3 mg）、化合物5（15.1 mg）、化合物6（9.6 mg）；Fr.4 經(jīng)凝膠柱色譜、制備薄層色譜，得化合物7（15.4 mg）、化合物8（11.2 mg）；Fr.5 經(jīng)硅膠柱色譜、凝膠柱色譜及制備液相色譜分離，得化合物1（17.3 mg）、化合物2（13.2 mg）；Fr.6 經(jīng)硅膠柱色譜、凝膠柱色譜及重結(jié)晶，得化合物9（8.7 mg）。

正丁醇層浸膏經(jīng)D101 大孔樹脂色譜，依次以乙醇－水（90%，70%，50%，30%及純水）梯度洗脫，將30%洗脫部分經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次以二氯甲烷－甲醇（80∶1，50∶1，30∶1，15∶1，8∶1，1∶1，V／V）梯度洗脫，合并相同流分，得13 個(gè)組分Fr.1～13。Fr.9 經(jīng)凝膠柱色譜得8 個(gè)亞組分Subfr.1～8，將Subfr.6 經(jīng)制備液相色譜分離，以18%甲醇等度洗脫，得化合物10（18.7 mg）、化合物11（24.6 mg）。化合物1～11 的化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 柳茶中化合物1～11 的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 The chemical structures of compounds 1－11 extracted from Sibiraea angustata

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 化合物1

黃色無定形粉末（甲醇）。ESI－MSm／z235［M ＋Na］＋。1H－NMR（500 MHz，DMSO－d6）δ：6.41（1H，s，H－2，6），3.71（6H，s，3，5－OCH3），3.39（2H，t，J＝8.5 Hz，H－9），2.48（2H，t，J＝10 Hz，H－7），1.67（2H，m，H－8）。13C－NMR（125 MHz，DMSO－d6）δ：134.0（C－1），106.3（C－2，6），148.5（C－3，5），132.8（C－4），32.3（C－7），35.2（C－8），60.8（C－9），56.5（OCH3）。以上分析結(jié)果與文獻(xiàn)［12］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1 為二氫芥子醇。

2.2.2 化合物2

白色粉末（甲醇）。ESI－MSm／z205 ［M ＋Na］＋。1H－NMR（500 MHz，CD3OD）δ：6.73（1H，d，J＝1.2 Hz，H－2），6.81（1H，dd，J＝7.8，1.2 Hz，H－6），6.67（1H，d，J＝7.8 Hz，H－5），3.86（3H，s，3－OCH3），3.55（1H，t，J＝6.6 Hz，H－9），2.71（2H，t，J＝6.6 Hz，H－7），1.80（2H，m，H－8）。13C－NMR（125 MHz，CD3OD）δ：134.2（C－1），111.5（C－2），147.2（C－3），145.2（C－4），115.3（C－5），122.0（C－6），32.8（C－7），35.9（C－8），62.4（C－9），56.4（OCH3）。以上分析結(jié)果與文獻(xiàn)［13］報(bào)道基本一致，故化合物2 鑒定為二氫松柏醇。

2.2.3 化合物3

淡黃色粉末（甲醇）。ESI－MSm／z217 ［M ＋Na］＋。1H－NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.51（1H，d，J＝16.0 Hz，H－7），7.01（1H，d，J＝2.0 Hz，H－2），6.91（1H，dd，J＝8.4，2.0 Hz，H－6），6.75（1H，d，J＝8.4 Hz，H－5），6.23（1H，d，J＝16.0 Hz，H－8），3.72（3H，s，OCH3）。13C－NMR（125 MHz，CD3OD）δ：127.5（C－1），114.6（C－2），146.8（C－3），149.4（C－4），115.1（C－5），122.7（C－6），146.5（C－7），116.4（C－8），169.6（C－9），51.7（OCH3）。以上分析結(jié)果與文獻(xiàn)［14］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3 為咖啡酸甲酯。

2.2.4 化合物4

白色結(jié)晶（丙酮）。ESI－MSm／z229 ［M ＋Na］＋。1H－NMR（500 MHz，DMSO－d6）δ：8.02（1H，d，J＝7.8 Hz，H－4），6.71（1H，d，J＝1.8 Hz，H－8），6.37（1H，d，J＝1.8 Hz，H－6），6.24（1H，d，J＝7.8 Hz，H－3），4.03（3H，s，7－OCH3），3.91（3H，s，5－OCH3）。13C－NMR（125 MHz，DMSO－d6）δ：158.6（C－2），108.4（C－3），141.2（C－4），158.6（C－4a），152.4（C－5），95.1（C－6），159.2（C－7），89.1（C－8），106.7（C－8a），59.4（7－OCH3），54.2（5－OCH3）。以上分析結(jié)果與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定化合物4 為5，7－二甲氧基香豆素。

2.2.5 化合物5

褐色結(jié)晶（甲醇）。ESI－MSm／z201 ［M ＋Na］＋。1H－NMR（500 MHz，MeOD）δ：7.61（1H，d，J＝16.0 Hz，H－7），7.45（2H，d，J＝8.6 Hz，H－2，6），6.80（2H，d，J＝8.7 Hz，H－3，5），6.32（1H，d，J＝15.9 Hz，H－8），3.75（3H，s，OCH3）。13C－NMR（125 MHz，MeOD）δ：127.1（C－1），131.1（C－2，6），116.8（C－3，5），161.3（C－4），146.6（C－7），114.9（C－8），169.8（C－9），52.0（OCH3）。以上分析結(jié)果與文獻(xiàn)［16］報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5 為4－甲氧基肉桂酸。

2.2.6 化合物6

白色粉末（甲醇）。ESI－MSm／z177 ［M ＋Na］＋。1H－NMR（500 MHz，DMSO－d6）δ：7.32（1H，d，J＝1.8 Hz，H－2），7.28（1H，dd，J＝1.8，8.2 Hz，H－6），6.77（1H，d，J＝8.2 Hz，H－5）。13C－NMR（125 MHz，DMSO－d6）δ：121.7（C－1），116.6（C－2），144.9（C－3），150.0（C－4），115.1（C－5），121.8（C－6），167.3（C－7）。以上分析結(jié)果與文獻(xiàn)［17］報(bào)道基本一致，故化合物6 鑒定為3，4－二羥基苯甲酸。

2.2.7 化合物7

淡黃色粉末（甲醇）。ESI－MSm／z295［M ＋Na］＋。1H－NMR（500 MHz，DMSO－d6）δ：12.14（1H，s，5－OH），10.84（1H，s，7－OH），9.60（1H，s，4′－OH），7.31（2H，d，J＝8.5 Hz，H－2′，6′），6.79（2H，d，J＝8.5 Hz，H－3′，5′），5.89（2H，s，H－6，8），5.43（1H，dd，J＝3.0，12.8 Hz，H－2），3.25（1H，dd，J＝12.8，17.1 Hz，H－3b），2.70（1H，dd，J＝3.0，17.1 Hz，H－3a）。13C－NMR（125 MHz，DMSO－d6）δ：78.4（C－2），42.0（C－3），196.3（C－4），163.5（C－5），95.8（C－6），166.7（C－7），95.0（C－8），162.9（C－9），101.7（C－10），128.8（C－1′），128.2（C－2′），115.1（C－3′），157.7（C－4′），115.1（C－5′），128.2（C－6′）。以上分析結(jié)果與文獻(xiàn)［18］報(bào)道基本一致，從而推斷化合物7 為柚皮素。

2.2.8 化合物8

黃色粉 末（甲醇）。ESI－MSm／z309［M ＋Na］＋。1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ：8.05（2H，d，J＝9.2 Hz，H－2′，6′），6.88（2H，d，J＝9.2 Hz，H－3′，5′），6.38（1H，d，J＝2.0 Hz，H－8），6.19（1H，d，J＝2.0 Hz，H－6）。13C－NMR（CD3OD，125 MHz）δ：157.2（C－2），134.2（C－3），178.2（C－4），161.7（C－5），98.6（C－6），164.6（C－7），93.5（C－8），157.8（C－9），104.4（C－10），121.5（C－1′），131.0（C－2′，6′），114.8（C－3′，5′），160.2（C－4′）。以上分析結(jié)果與文獻(xiàn)［19］報(bào)道基本一致，故化合物8 鑒定為山柰酚。

2.2.9 化合物9

黃色粉末（甲醇）。ESI－MSm／z471［M ＋Na］＋。1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ：8.05（2H，d，J＝9.2 Hz，H－2′，6′），6.88（2H，d，J＝9.2 Hz，H－3′，5′），6.38（1H，d，J＝2.0 Hz，H－8），6.19（1H，d，J＝2.0 Hz，H－6），5.24（1H，d，J＝7.6 Hz，gle－H－1″），3.70～3.40（6H，m，H－2″～6″）。13C－NMR（CD3OD，125 MHz）δ：157.2（C－2），134.2（C－3），178.2（C－4），161.7（C－5），98.6（C－6），164.6（C－7），93.5（C－8），157.7（C－9），104.4（C－10），121.5（C－1′），131.0（C－2′，6′），114.8（C－3′，5′），160.2（C－4′），102.9（glc－C－1″），74.4（C－2″），76.7（C－3″），70.0（C－4″），77.1（C－5″），61.3（C－6″）。以上分析 結(jié)果與文獻(xiàn)［20］報(bào)道基本一致，故化合物9 鑒定為山柰酚－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷。

2.2.10 化合物10

白色粉末（甲醇）。ESI－MSm／z383［M ＋Na］＋。1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.97（1H，dt，J＝1.4，5.3 Hz，H－2），5.15（1H，brd，J＝9.2 Hz，H－6），5.01（1H，dd，J＝3.0，9.2 Hz，H－5），4.74（1H，overlapped，H－4），4.73（1H，overlapped，H－1a），4.61（1H，dd，J＝5.1，15.8 Hz，H－1b），4.37（1H，d，J＝7.8Hz，H－1′），1.81（3 H，brs，H－10），1.80（3 H，brs，H－8），3.23～3.87（6H，m，H－2′～6′ ）。13C－NMR（CD3OD，125 MHz）δ：67.0（C－1），141.7（C－2），132.1（C－3），73.1（C－4），84.5（C－5），122.2（C－6），142.4（C－7），25.8（C－8），171.6（C－9），18.5（C－10），104.1（C－1′），75.0（C－2′），78.1（C－3′），71.5（C－4′），78.1（C－5′），62.7（C－6′）。以上分析結(jié)果與文獻(xiàn)［21］報(bào)道基本一致，故化合物10 鑒定為假升麻苷A。

2.2.11 化合物11

白色粉末（甲醇）。ESI－MSm／z383［M ＋Na］＋。1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.66（1H，dt，J＝1.9，5.7 Hz，H－2），5.23（1H，brd，J＝9.1 Hz，H－6），5.00（1H，ddd，J＝1.8，6.0，16.0 Hz，H－1a），4.92（1H，dd，J＝5.0，9.1 Hz，H－5），4.84（1H，overlapped，H－1b），4.61（1H，dd，J＝5.1，15.8 Hz，H－1b），4.35（1H，d，J＝7.8 Hz，H－1′），1.83（3H，brs，H－8），1.81（3H，brs，H－10），3.24～3.89（6H，m，H－2′～6′）。13C－NMR（CD3OD，125 MHz）δ：67.0（C－1），144.1（C－2），131.2（C－3），75.5（C－4），84.5（C－5），122.1（C－6），142.3（C－7），25.9（C－8），170.1（C－9），18.6（C－10），104.6（C－1′），75.0（C－2′），78.1（C－3′），71.6（C－4′），78.1（C－5′），62.8（C－6′）。以上分析結(jié)果與文獻(xiàn)［21］報(bào)道基本一致，故化合物11 鑒定為假升麻苷B。

3 討論

本研究中主要分離純化了藏藥柳茶的乙酸乙酯層和正丁醇層浸膏的化學(xué)成分，從乙酸乙酯層中分離得到了6 個(gè)游離的苯丙素類化學(xué)成分，分別為二氫芥子醇（1）、二氫松柏醇（2）、咖啡酸甲酯（3）、5，7－二甲氧基香豆素（4）、4－甲氧基肉桂酸（5）、3，4－二羥基苯甲酸（6），以及2 個(gè)黃酮苷元［柚皮素（7）、山柰酚（8）］和1 個(gè)黃酮苷［山柰酚－3－O－β－D－吡喃葡萄糖（9）］。從正丁醇中分離得到了2 個(gè)單萜苷類化合物，分別為假升麻苷A（10）和假升麻苷B（11）。以上11 個(gè)化合物均為從柳茶中首次分離得到，其中除化合物1，3，6 外，其余均為首次從鮮卑花屬植物中分離得到。

從乙酸乙酯層中分離得到的化合物1～9，在大多數(shù)植物中較常見，極性較適中，因此以常規(guī)分離方法，如硅膠柱色譜、凝膠柱色譜或制備薄層色譜即可達(dá)到較好的分離效果。從正丁醇層中分離得到的化合物10和化合物11，為該植物中比較有代表性的2 個(gè)單萜苷類成分，其中，化合物10、化合物11 的2 位分別為E和Z構(gòu)型，兩者互為同分異構(gòu)體，導(dǎo)致兩者的理化性質(zhì)差異很小；同時(shí)，兩者的極性大，通過常規(guī)的分離方法無法有效分離，因此，需以制備型高效液相色譜分離。經(jīng)預(yù)試驗(yàn)得出制備型高效液相色譜的流動(dòng)相為18%甲醇時(shí)，化合物10和化合物11 的分離度最好。本研究中得到的11 個(gè)化合物進(jìn)一步豐富了藏藥柳茶的化學(xué)物質(zhì)種類，為該藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)及相關(guān)藥理活性的研究奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。