甘肅栽培肉蓯蓉質(zhì)量分析*

蘇學(xué)秀，楊世琴，張富嫻，賈存勤，楊 麗，陳小娟，滕澤學(xué)△

（1.甘肅省白銀市藥品檢驗(yàn)檢測中心，甘肅 白銀 730900；2.甘肅匯勤生物科技有限公司，甘肅 白銀 730600）

肉蓯蓉為列當(dāng)科植物肉蓯蓉Cistanche deserticolaY.C.Ma 的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖，有補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸通便功效，主治腎陽不足、精血虧虛、陽痿不孕、腰膝酸軟、筋骨無力、腸燥便秘［1］。肉蓯蓉主要含有苯乙醇苷、環(huán)烯醚萜及苷、木脂素、多糖等成分［2］，其中松果菊苷和毛蕊花糖苷等苯乙醇苷類成分具有補(bǔ)腎陽作用［3］，常作為控制肉蓯蓉質(zhì)量的指標(biāo)性成分。本研究中對甘肅栽培肉蓯蓉藥材樣本的初加工方法進(jìn)行了優(yōu)選，并采用高效液相色譜法測定了其中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量以及醇溶性浸出物總量，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定其重金屬及有害元素（鉛、鎘、汞、砷、銅）的殘留量［4－9］，以評價肉蓯蓉的整體質(zhì)量。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260 型高效液相色譜儀（包括四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測器）、8800 型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（安捷倫科技有限公司）；101A－2 型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海瑯軒儀器有限公司）；FA／JA 型電子天平（梅特勒儀器有限公司）；ETHOS UP 型消解儀（北京萊伯泰科公司，配備智能樣品處理器）；KQ－100DB 型超聲波情況儀（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱蒸鍋（周村鑫旭電器廠，功率為2 100 W）。

1.2 試藥

松果菊苷對照品（批號為111670－201907，含量為91.8%），毛蕊花糖苷對照品（批號為111530－201713，含量為92.5%），均購自中國食品藥品檢定研究院；鉛、鎘、砷、銅標(biāo)準(zhǔn)液（10 μg／mL，安捷倫科技公司），汞標(biāo)準(zhǔn)液（1 000 μg／mL，中國計(jì)量科學(xué)研究院）；甲醇、硝酸為色譜純，甲酸、過氧化氫均為分析純，水為超純水；肉蓯蓉藥材為2018 年10 月采挖于甘肅省酒泉市、張掖市、武威市和白銀市肉蓯蓉種植基地，經(jīng)賈存勤正高級工程師鑒定為正品。

2 方法與結(jié)果

2.1 產(chǎn)地加工

藥材樣品制備：取肉蓯蓉鮮品，去掉頂部［1］，用軟毛刷刷洗干凈，瀝干水分，以切片（段）曬干、陰干、烘干、微波干燥、蒸制及整枝蒸制方式制備藥材樣品［10－13］。

2.2 水分測定

取28 批藥材樣品，每批3 份，按2020 年版《中國藥典》中有關(guān)烘干法的水分測定方法測定水分，并計(jì)算每批的平均值。結(jié)果見表1。

表1 28 批次藥材樣品水分、含量、醇溶性浸出物總量測定結(jié)果（%，n＝3）Tab.1 Determination results of moisture，content and total extract in 28 batches of medicinal materials（%，n＝3）

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱：AgilentXDB－C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇（A）－0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫（洗脫程序見表2）；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL／min；檢測波長：330 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

2.3.2 溶液制備

稱取松果菊苷對照品、毛蕊花糖苷對照品各適量，精密稱定，加50%甲醇，制成每1 mL 各含0.2 mg 的混合對照品溶液［1］。取藥材樣品粉末約1 g，精密稱定，置100 mL 棕色容量瓶中，精密加入50 %甲醇50 mL，密塞，搖勻，稱定質(zhì)量，浸泡30 min，超聲（功率250 W，頻率35 kHz）處理40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，加50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液［1］。

2.3.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：精密吸取2.3.2 項(xiàng)下混合對照品溶液、供試品溶液各適量，按2.3.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果理論板數(shù)按松果菊苷峰、毛蕊花糖苷峰計(jì)均應(yīng)不低于3 000，分離度均大于1.5，基線分離良好。詳見圖1。

1.松果菊苷 2.毛蕊花糖苷A.混合對照品溶液 B.供試品溶液圖1 高效液相色譜圖1.echinacoside 2.verbascosideA.Mixed reference sulution B.Test solutionFig.1 HPLC chromatograms

線性關(guān)系考察：精密吸取松果菊苷、毛蕊花糖苷混合對照品溶液2，5，10，15，20 μL 進(jìn)樣測定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）、進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（μg，X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，松果菊苷為Y1＝1.40×106X1－7.53×103（r＝1.000 0，n＝5），毛蕊花糖苷為1.94×106X－1.28×103（r＝1.000 0，n＝5）。結(jié)果表明，松果菊苷、毛蕊花糖苷進(jìn)樣量分別在0.392 5～3.925 4 μg和0.388 9～3.888 7 μg 范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取2.3.2 項(xiàng)下混合對照品溶液10 μL，按2.3.1 項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測定。結(jié)果松果菊苷、毛蕊花糖苷峰面積積分值的RSD分別為0.24%和0.22%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取2.3.2 項(xiàng)下供試品溶液10 μL，室溫下分別于0，3，5，7，9，24 h 時進(jìn)樣測定。結(jié)果松果菊苷、毛蕊花糖苷峰面積積分值的RSD分別為0.28%和0.30%（n＝6），表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：稱取肉蓯蓉（編號24）粉末1 g，6 份，精密稱定，依法制備供試品溶液，按2.3.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算含量。結(jié)果松果菊苷、毛蕊花糖苷含量平均值分別為1.18%和0.18%，RSD分別為0.06%和0.48%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品粉末9 份，每份0.5 g，精密稱定，加入高中低質(zhì)量濃度的單一對照品溶液，按供試品制備方法制備溶液，按2.3.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算。結(jié)果松果菊苷、毛蕊花糖苷加樣回收率分別為104.78%和99.37%，RSD分別為0.20%和1.66%（n＝9）。

2.3.4 樣品含量測定

取28 批藥材樣品各適量，分別按2.3.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，供試品溶液各10 μL，按2.3.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，平行測定3 次，計(jì)算松果菊苷、毛蕊花糖苷含量及總量。同法取84 份藥材樣品粉末，按2020 年版《中國藥典（四部）》中的浸出物測定方法，以稀乙醇為溶劑測定醇溶性浸出物總量［14］。每批樣品的平均值按干燥品計(jì)。結(jié)果見表1。

2.4 重金屬及有害元素殘留量測定

取蒸制陰干、烘干及自然陰干3 種初加工方法處理的12 批藥材樣品，按2020 年版《中國藥典（四部）》通則2321，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（射頻功率：1550W；載氣流速：0.99 L／min；輔助氣體流速：0.90 L／min；等離子體流速：15.00 L／min；矩管水平位置－0.20 mm、垂直位置0.10 mm；蠕動泵轉(zhuǎn)速：0.1 r／s；霧化氣溫度：2.02 ℃；采樣深度：8 mm）測定鉛、鎘、砷、汞、銅含量［14］。結(jié)果見表3。

表3 12 批藥材樣品中鉛、鎘、汞、砷、銅含量測定結(jié)果（mg／kg）Tab.3 Determination results of lead，cadmium，mercury，arsenic and copper in 12 batches of Cistanches Herba（mg／kg）

3 討論

3.1 含量

藥材樣品中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量平均值排序如下，蒸制整枝品＞蒸制切片品＞整枝陰干品＞切片烘干品＞切段曬干品＞切片微波品＞切片陰干品，除切片陰干和切片微波干燥樣品含量較低外，其余初加工樣品皆為藥典標(biāo)準(zhǔn)（不得少于0.30%）［1］的2～8 倍；其中酒泉市金塔縣的藥材樣品在各種加工處理方法下的含量均高于藥典標(biāo)準(zhǔn)8 倍，且高于其他產(chǎn)地加工品。

3.2 醇溶性浸出物總量

各方法加工后樣品醇溶性浸出物總量平均值，蒸制整枝品（56.12%）、蒸制切片品（56.50%）、整枝陰干品（56.14%）、切段曬干品（55.77%）、切片烘干品（56.74%）、切片微波品（56.04%）、切片陰干品（56.35%）均無顯著差異，且均高于2020 年版《中國藥典（一部）》規(guī)定的“應(yīng)不得少于35.0%”［1］。

3.3 重金屬及有害元素殘留量

12 批藥材樣品中重金屬及有害元素殘留量測定結(jié)果顯示，鉛、鎘、汞、砷、銅檢測值均明顯小于2020 年版《中國藥典（一部）》的規(guī)定值［1］。

3.4 加工方法評價

本研究結(jié)果顯示，初加工方法對肉蓯蓉藥材樣品中主要活性成分松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量有顯著影響［15－20］，除切段曬干、切片陰干品及切片微波干燥樣品2 個成分含量較低但可達(dá)到2020 年版《中國藥典》規(guī)定的水平外，其余加工藥材樣品高于2020 年版《中國藥典》規(guī)定限度的2～8 倍不等；切段曬干和切片陰干品含量偏低與未進(jìn)行加熱殺霉保苷處理有關(guān)，切片陰干可能還與切片較薄（3～4 mm）有關(guān)，切片微波干燥樣品含量較低可能與切片較薄（3～4 mm）及微波照射時間短（5 min）有關(guān)，有待進(jìn)一步研究；蒸制整枝的指標(biāo)性成分含量最高，建議作為肉蓯蓉的初加工方法推廣應(yīng)用；酒泉市金塔縣的各種初加工品含量皆高于其他產(chǎn)區(qū)，這可能與該區(qū)域的自然環(huán)境（位于鼎新盆地）適合肉蓯蓉的生產(chǎn)有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。初加工方法和產(chǎn)地對醇溶性浸出物總量無顯著影響，皆達(dá)到2020 年版《中國藥典》規(guī)定限度。肉蓯蓉重金屬及有害元素污染程度較低，安全性高。

3.5 小結(jié)

甘肅栽培肉蓯蓉質(zhì)量可達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)，安全性高，可供藥用，建議甘肅省大力發(fā)展肉蓯蓉種植業(yè)；蒸制整枝的指標(biāo)性成分含量最高，建議作為肉蓯蓉的初加工方法推廣應(yīng)用；酒泉地區(qū)質(zhì)量較優(yōu)，建議作為酒泉地區(qū)的優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)大力開發(fā)。本研究為甘肅栽培肉蓯蓉的初加工優(yōu)選、質(zhì)量評價提供了科學(xué)的依據(jù)。