超高效液相色譜-串聯質譜測定桑葚中唑螨酯殘留量

◎ 王 森，李國烈，陳緯成

（南充農產品質量監測檢驗中心，四川 南充 637000）

唑螨酯化學名稱為(E)-α-(1,3-二甲基-5-苯氧基吡唑-4-基亞甲基氨基氧)對甲苯甲酸異丁酯，又名Kiron、Ortus、殺螨王和霸螨靈[1]。唑螨酯作為廣譜殺螨劑，速效性好，持效期長，與其他藥物無交互抗性，主要用于防治紅蜘蛛、銹壁虱等病害[2]。

桑葚，又名桑果，富含維生素、氨基酸和人體所需的微量元素，既可直接食用，也可用于加工制作桑果汁、桑果酒等。近年來，桑果市場發展前景廣闊[3-5]。在桑果生產中，主要通過使用化學藥物來防治病蟲害，不規范的使用化學藥物可能會造成桑葚中農藥殘留超標，危害人體健康[6]。朱興江等[7]采用高效液相色譜法測定了柑桔和白菜中唑螨酯的殘留量。李國烈等[8]報道了桑葚中醚菌酯等藥物的殘留測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters Xevo TQS超高效液相色譜-串聯質譜儀；Sigma3-18KS離心機；Mettler ToledoML802分析天平；IKA Vortex Genius 旋渦混合器；安捷倫石墨化炭黑氨基復合柱500 mg/6 mL。

唑螨酯標準品；甲醇和乙腈（質譜級，霍尼韋爾）；甲苯（色譜級，霍尼韋爾），甲酸（色譜級，阿拉?。?；超純水（屈臣氏）。

1.2 樣品前處理

稱取10 g樣品（精確至0.05 g）至50 mL離心管中，加入5 g氯化鈉、1顆均質子，再加入20.00 mL乙腈，渦旋振蕩提取 15 min，高速離心 5 min（6 000 r·min-1），吸取上清液10.00 mL過柱（預先用10 mL乙腈＋甲苯（75+25）活化小柱，棄去廢液），再用20 mL乙腈＋甲苯（75+25）洗脫，收集所有流出液，40 ℃水浴旋蒸至近干，用5.00 mL 85%甲醇溶液溶解殘渣，渦旋混勻后過濾膜，裝入樣品瓶待檢測。

1.3 儀器條件

色譜柱：Waters Xbridge C18（3.0 mm×50 mm×3.5 μm）。采用0.1%甲酸乙腈溶液（A）、0.1%甲酸水溶液（B）作為流動相，梯度洗脫程序見表1。柱溫：35 ℃；進樣量：1.00 μL；掃描模式：多反應監測模式（MRM）；霧化氣流速：1 200 L·h-1；錐孔氣流速：200 L·h-1；碰撞氣流速：0.10 mL·min-1；鞘氣溫度為500 ℃。其他相關參數見表2。

表1 流動相及梯度洗脫程序表

表2 質譜參數表

1.4 標準曲線和檢測限

取唑螨酯標準品 1 mL（1 000 μg·mL-1）于 10 mL容量瓶，用色譜級甲醇定容，得100 μg·mL-1標準儲備溶液，-20 ℃保存，3個月內可使用。根據需要，將儲備液用桑葉空白基質配制為一定濃度的標準溶液，按照1.3中儀器條件進行分析。以質量濃度為橫坐標、對應色譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線。通過添加一系列已知質量濃度的樣品進行測定，以3倍信噪比（S/N=3）時的樣品質量濃度為檢出限。

1.5 回收率和精密度

在桑葚空白樣品中，選擇 1 μg·kg-1、10 μg·kg-1、100 μg·kg-13個濃度的添加水平進行加標回收試驗，每個水平進行6個平行實驗，計算回收率和精密度。

1.6 基質效應

使用85%甲醇水溶液配制的標液稱為試劑標液（A），使用桑葚空白基質配制的標液稱為基質標液（B），以兩者峰面積比值來評價基質效應。

2 結果與分析

2.1 方法選擇性

桑葚樣品經前處理、上機分析，得色譜圖見圖1-圖4。結果表明，采取該方法檢測樣品凈化效果好、基質干擾小、峰形及分離度良好，同時可獲得較強的信號響應。

圖1 唑螨酯標液圖譜（1.00 μg·L-1，試劑標）圖

圖4 唑螨酯加標樣品圖譜（1.00 μg·kg-1）圖

2.2 線性范圍和檢測限

該試驗條件下，唑螨酯在質量濃度1.00～100.00 μg·L-1時線性關系良好，標準曲線回歸方程為y=2.042 55×107x+2 719.46，R2=0.999。 檢 測 限（S/N=3）為 0.25 μg·kg-1，以 4倍檢測限為定量限，則定量限為 1.00 μg·kg-1[9]。

2.3 方法回收率和精密度

在 1 μg·kg-1、10 μg·kg-1、100 μg·kg-1共 3 個添加濃度水平下，唑螨酯的回收率為83.9%～89.2%，相對標準偏差（RSD）為3.13%～4.31%，見表3。結果表明，該方法具有較高的回收率和準確度。日內精密度RSD（n=6）為2.99%～4.39%，日間精密度RSD（n=3）為2.76%～3.26%，見表4。結果表明，該方法具有很好的重現性和穩定性，滿足質量控制要求。

表3 方法回收率表（n=6）

表4 方法精密度表（n=6）

2.4 基質效應

基質效應結果見表5。在不同濃度條件下，唑螨酯在桑葚中的基質效應分別為80.38%～84.50%，即基質抑制作用。因此為了提高方法的準確性和靈敏度，采用本方法測定桑葚中的唑螨酯時應采用桑葚基質匹配標準曲線對實際樣品進行定量。

表5 方法基質效應表（n=5）

圖2 桑葚空白樣品圖譜圖

圖3 唑螨酯標液圖譜（1.00 μg·L-1，桑葚基質標）圖

3 結論

本試驗建立了測定桑葚中唑螨酯殘留量的超高效液相色譜-串聯質譜方法，樣品經乙腈提取，固相萃取小柱凈化，超高效液相色譜分離，質譜多反應監測模式檢測，外標法定量。方法檢出限為0.25 μg·kg-1，定量限為 1.00 μg·kg-1，符合殘留限量的要求（0.1 mg·kg-1），平均回收率為83.9%～89.2%，精密度為2.76%～4.39%，適用于桑葚中唑螨酯殘留量的測定。