抗核抗體熒光模型作用機制與抗ENA譜相關性對自身免疫性疾病的相關價值研究

張優明 王 丹 石 琳 孔凡靜

(齊齊哈爾市中醫醫院 黑龍江 齊齊哈爾 161000)

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院近兩年間在風濕免疫科收治的795例自身免疫性疾病患者，對每一病例進行統計分析分類計算，其中包括類風濕性關節炎(RA)患者311例，干燥綜合(SS)患者155例，過敏性紫癜(AP)患者31例，混合結締組織病(MCTD)患者129例，硬皮病(PSS)患者88例，系統性紅斑狼瘡(SLE)患者81例,對每種自身免疫抗體陽性患者進行統計分析，計算出現頻率，列表統計如下圖表1，然后再對每種陽性抗體的熒光模型表現形式進行統計處理，列表如下圖表2

表1 795例AID患者對應自身抗體結果比較

表2 特異性自身抗體與熒光模型的結果關系(%)

1.2 方法:所有自身免疫性疾病病例患者，均于次日清晨無用藥情況下空腹采集靜脈血3ml,于3500轉/分，十分鐘離心處理，分離出血清備用。抗核抗體熒光模型采用間接免疫熒光法,以Hep-2細胞和鼠肝作為抗原，固定于載玻片上,與受檢者血清反應。血清中抗體與抗原結合后，再加入FITC標記的抗人免疫球蛋白，在熒光顯微鏡下觀察熒光模型表現型。抗核抗體(ANA)抗體陽性以>1：100為準，有一定熒光但不確定模型時可判定為可疑。對陽性樣本將血清稀釋一定倍數,確定最終抗體滴度。抗核提取物抗體(ENA)譜采用歐蒙實驗診斷股份有限公司提供的抗核抗體譜(IgG)檢測試劑盒進行檢測. 血清用三羥甲基氨基甲烷樣品緩沖液1:101稀釋后，放置搖床混勻30分鐘，洗滌3次，洗液按1:9比例進行配置，加酶結合物150微升加1350微升樣品緩沖液混勻30分鐘，洗滌3次后，加底物液1500微升輕微晃動孵育10分鐘，最后用蒸餾水洗滌3次，干燥后與試劑對應型號標準膜條讀取膜條檢測結果。最后所有數據均采用Graph Pad Prism 5軟件進行統計學分析，計數資料應用數值和百分數表示，計量資料數據用x ± s表示，采用兩組獨立樣本的t檢驗，概率值* P < 0.05表示差異有顯著性統計學意義

1.3 結果 在RA疾病中SSA占40.8%抗RNP占23.0%抗組蛋白占48.9%，SSB抗體占16.7%熒光模型主要存在于核均質型和顆粒型,核均質型Hep-2細胞核質呈均質著色細胞染色體熒光強度增強，顆粒型主要與U1RNP,抗SSA, 抗SSB和抗Sm抗體有關, 分為粗顆粒型熒光和細顆粒型熒光, 粗顆粒熒光染色呈粗顆粒有時伴有細小核點, 核仁染色呈陰性, 細胞濃縮染色體陰性。 細胞核質著色呈細顆粒型熒光, 核仁呈陰性表現, 染色體周圍可見細顆粒熒光, 染色體區域呈陰性；在SS疾病中SSA抗體占99.3%SSB抗體占87.7%,熒光模型SSA54.6%SSB19.1%存在顆粒型熒光中，SSA33.4%SSB19.1%存在均質型熒光；在AP疾病中主要是ScI-70占77.8%抗核小體占9.68%對應熒光模型均質型占68%核仁型占45.3%，核仁型Hep-2細胞核仁為熒光加強的均質熒光模型；在MCTD疾病中SSA占83.7%RNP占69.0%，SSB占64.3%，ScI-70占18.6對應熒光模型為顆粒型54.6%，97.5%，19.1%，30.6%胞漿型16.56%11.7%23.8%6.67%均質型33.4%5.52519.0%68.0%；在PSS疾病中抗ScI-70抗體陽性，熒光模型主要存在均質型中；在SLE疾病中抗核小體占92.6%，dsDNA占76.5%SM和組蛋白各占46.9%SSA占39.5%RNP占23.5%熒光模型分別為均質型，胞漿型，顆粒型所占比例各不相同。

1.4 討論 抗核抗體(ANA)免疫熒光抗體檢測陽性見于各種自身免疫性疾病患者，臨床上ANA熒光檢測是一項重要的篩查實驗，滴度增高提示自身免疫性疾病的可能性，熒光模型分類較為復雜分為核仁型，核均質型，核膜型，著絲點型，周邊型，肌動蛋白型等，由于自身抗體的不同可以表現為不同的熒光模型。如在類風濕性關節炎患者中抗SSA,RNP，SSB,組蛋白,daDNA抗體均可表現不同程度陽性反應，主要表現在顆粒型熒光中；在SS自身免疫性疾病中主要呈現SSA和SSB抗體陽性，主要表現在顆粒型和核仁型熒光核型中；在AP自身免疫性疾病中抗ScI-70抗體表現為陽性，熒光模型表現為均質型和核仁型；在SLE自身免疫性疾病中抗RNP抗體，SSA抗體，SSB抗體，抗dsDNA抗體,抗SM抗體均可表現出較高的陽性率，模型主要表現為顆粒型和均質型；系統性硬皮病中也表現出抗ScI-70抗體陽性，存在均質型熒光和核仁型熒光陽性率較高。每種自身免疫性疾病中都會檢測到單種或兩種及以上自身抗體，對疾病診斷帶來一定困擾。自身免疫性疾病(autoimmune diseases，AID)是自身免疫應答過強或持續時間過長，以致造成自身組織細胞損傷，并引起相應的臨床癥狀和體征，其臨床表現多樣，發病機制較為復雜，有明顯的遺傳傾向，且女性發病率高于男性，易反復發作等基本特征。通過血清或淋巴細胞可被動轉移疾病，應用自身抗原或自身抗體可復制出具有相似病理變化的動物模型，用于臨床分析疾病。其誘發因素主要有物理因素如冷，熱，電離輻射等，藥物影響或生物學因素細菌,病毒等均可以改變自身抗原的性質。自身免疫性疾病患者根據自身抗原分布和發病原因的特點分為器官特異性自身免疫病如格雷夫斯病(Graves disease)和系統性自身免疫性疾病如系統性紅斑狼瘡(SLE)。本文主要研究系統性自身免疫病，不同自身免疫性疾病其發病和組織損傷的機制各異，如類風濕關節炎主要表現為關節炎癥，主要抗原為變性IgG;系統性紅斑狼瘡表現為腎小球腎炎，血管炎，關節炎，血細胞減少等，主要抗原為DNA，核蛋白，血細胞膜抗原；干燥綜合征主要病損特征為唾液腺和淚腺上皮細胞炎癥，表現唾液腺，淚腺等腺體細胞自身抗原。自身抗原一般為多器官組織的共有成分如細胞核，線粒體等，表現出各種臨床癥狀和體征。目前，臨床上對自身免疫性疾病患者的治療多限于緩解患者的臨床癥狀，但其具體的發病機制有待繼續研究。由于其病因復雜臨床表現多樣化，加上潛伏期長，患者生活質量嚴重降低等特點，所以對于疾病的早期診斷非常重要。本研究發現熒光模型與自身抗體聯合檢測，對疾病的確立更具有診斷價值。因此，本實驗通過比較不同自身抗體在各自熒光核型中的分布情況，研究抗核抗體熒光核型及自身抗體檢測，對自身免疫性疾病發生和發展的作用和具體機制的相關性。為自身免疫性疾病診斷提供相應依據，為臨床治療自身免疫性疾病提供充足的理論知識[2]。

通過以上熒光模型和自身抗體統計數據可以看出，熒光模型對自身免疫性疾病的確診具有一定的提示作用，但僅根據熒光模型特點來推斷抗體的特異性還不夠確切,需要借助自身抗體和熒光模型綜合分析，通過聯合檢測抗核提取物抗體(ENA)和抗核抗體熒光模型，可以更準確對自身免疫性疾病進行定位分析。自身抗體的檢測可作為自身免疫性疾病分類的重要參考指標。隨著醫學免疫學技術的迅猛發展，抗核抗體熒光模型研究沿著精準醫學方向不斷邁進，為疾病帶來更加精密的數據。通過研究證實抗核抗體熒光核型與自身抗體聯合檢測，可提高對自身免疫性疾病診斷的敏感性和特異性，為疾病的早期診斷提供重要參考價值，為臨床對于自身免疫性疾病的治療提供新的依據，減少患者的痛苦，為臨床治療縮短了療程，減輕患者的負擔，縮短治療周期。