上海市青浦區(qū)非結(jié)核分枝桿菌肺病的臨床特征及菌種分布分析*

彭 榮,龔 倩,楊馨怡

復旦大學附屬中山醫(yī)院青浦分院檢驗科,上海 201700

非結(jié)核分枝桿菌(NTM)是指在分枝桿菌屬中，除結(jié)核分枝桿菌復合群(MTC)和麻風分枝桿菌之外的其他分枝桿菌。目前共發(fā)現(xiàn)190余種NTM[1]。NTM廣泛存在于自然環(huán)境中，可在水、土壤和灰塵中被檢出[2],少部分NTM可對人體致病，以肺部感染最為常見，引起NTM肺病[3]。據(jù)文獻報道，不同地區(qū)NTM肺病發(fā)生率不同，氣候濕潤地區(qū)高于干燥地區(qū)，東南沿海地區(qū)高于內(nèi)陸地區(qū)[4]。上海市青浦區(qū)位于東南沿海，氣候濕潤，本研究旨在更好地了解該地區(qū)NTM肺病患者的臨床特征和菌種分布特點。

1 資料與方法

1.1一般資料 通過查閱電子病歷，收集2017年1月至2020年12月于本院住院痰培養(yǎng)陽性且鑒定為NTM患者的臨床癥狀、合并癥、影像學表現(xiàn)等資料，參照《非結(jié)核分枝桿菌病實驗室診斷專家共識》[5]的相關標準，最終80例臨床資料完整且符合NTM肺病診斷標準的患者納入本研究。

1.2方法

1.2.1涂片抗酸染色與菌種培養(yǎng) 收集患者痰液或肺泡灌洗液標本制片，抗酸染色，顯微鏡下觀察涂片結(jié)果。通過分枝桿菌培養(yǎng)，初步分離出NTM。涂片抗酸染色和分枝桿菌培養(yǎng)參照《結(jié)核病實驗室檢驗規(guī)程》[6]。

1.2.2菌種鑒定方法 采用16S-23S rRNA測序[7]，根據(jù)16S rRNA基因高變區(qū)設計合成引物16S-P1:TGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAG，16S-P2：ACCGCGGCTGCTGGCAC，目的片段長度為514 bp。16S rRNA基因PCR反應條件為：94 ℃ 5 min；再經(jīng)過30個循環(huán)，每個循環(huán)為94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s；最后72 ℃延伸5 min。將16S rRNA基因的PCR擴增產(chǎn)物送至上海派森諾生物科技有限公司進行測序，測序結(jié)果經(jīng)Geneious檢查測序質(zhì)量后上傳至NCBI網(wǎng)站進行標準序列比對，相似度達99%以上者為16S rRNA基因測序的菌種鑒定結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學處理 采用Excel 2010進行數(shù)據(jù)處理和分析。

2 結(jié) 果

2.1患者年齡和性別構(gòu)成分析 80例NTM肺病患者中男40例，女40例，男女比例為1∶1；年齡24～84歲，中位年齡62.28歲。根據(jù)年齡的不同，將患者分為青年組(24～<46歲)、中年組(46～<60歲)及老年組(≥60歲)。各組性別構(gòu)成情況見表1。

表1 不同年齡組患者性別構(gòu)成情況[n(%)]

2.2首發(fā)癥狀 80例NTM肺病患者中,首發(fā)癥狀以咳嗽、咳痰最多見，有68例(85.0%)，咯血有14例(17.5%)，氣促有4例(5.0%)，發(fā)熱有4例(5.0%)，胸痛有2例(2.5%)。

2.3合并疾病 80例NTM肺病患者中，合并支氣管擴張40例，占50.0%；合并慢性阻塞性肺疾病2例，占2.5%；合并其他基礎疾病：糖尿病6例，占7.5%；高血壓12例，占15.0%；冠心病16例，占20.0%；慢性胃炎6例，占7.5%；血吸蟲肝病2例，占2.5%；有手術(shù)史者4例，占5.0%，其中2例為肺癌切除術(shù)后，2例為甲狀腺癌切除術(shù)后。

2.4病原學檢查結(jié)果

2.4.1涂片抗酸染色結(jié)果 顯微鏡觀察結(jié)果顯示，80例NTM肺病患者中，涂片抗酸染色陽性30例，占37.5%。

2.4.2菌種分布 通過16S-23S rRNA測序，鑒定出胞內(nèi)分枝桿菌48株(60.0%)，堪薩斯分枝桿菌16株(20.0%)，鳥結(jié)核分枝桿菌6株(7.5%)，膿腫分枝桿菌4株(5.0%)，龜分枝桿菌膿腫亞種、偶發(fā)分枝桿菌、戈登分枝桿菌各2株(2.5%)。

2.5影像學表現(xiàn) 80例NTM肺病患者中影像學表現(xiàn)為支氣管擴張40例(50.0%)，結(jié)節(jié)24例(30.0%)，空洞18例(22.5%)，斑片影6例(7.5%)，胸膜鈣化2例(2.5%)，肺大泡2例(2.5%)。

3 討 論

NTM肺病患者數(shù)量在全球范圍內(nèi)呈不斷上升趨勢，其發(fā)病率在發(fā)達國家已超過肺結(jié)核,在發(fā)展中國家亦呈明顯上升趨勢[8]。NTM肺病的臨床癥狀、影像學表現(xiàn)、涂片抗酸染色陽性與肺結(jié)核非常相似，極易發(fā)生誤診，故加強對NTM肺病臨床特征以及菌種分布等的認識至關重要。

在本研究中，NTM肺病可以出現(xiàn)在各個年齡段，在老年人群占比最高，為65.0%(52/80)，這與大部分的研究結(jié)果一致[9-11]。關于NTM感染者的性別構(gòu)成情況各研究結(jié)果不一，在安徽省的1項研究中，NTM感染者中女性比例明顯高于男性[12]；在浙江省的1項研究中，NTM感染者中男性比例高于女性[13]。本研究中，男女NTM肺病患者人數(shù)相等，與上述研究結(jié)果不同可能與本研究納入樣本量較少及納入研究人群不同(本研究為NTM肺病患者)有關，也可能與不同地區(qū)人口基數(shù)的差異有關。本研究中青年組有12例男性患者，但無女性患者這一結(jié)果值得臨床關注。

本研究中，NTM肺病患者首發(fā)癥狀以咳嗽、咳痰最多見，因此咳嗽、咳痰2周以上，不光要考慮肺結(jié)核，也要考慮NTM肺病；合并疾病以支氣管擴張最多。據(jù)報道，具有結(jié)構(gòu)性或先天性肺部疾病的人群(如支氣管擴張、慢性阻塞性肺疾病、肺結(jié)核、塵肺患者)感染NTM的風險明顯增加，因此加強這些人群的健康宣教很重要[14]。本研究中NTM肺病患者影像學表現(xiàn)以支氣管擴張最常見,與相關報道結(jié)果一致[12]。病原學分析顯示，37.5%的患者標本涂片抗酸染色陽性，提示標本抗酸染色陽性的老年患者，肺部有支氣管擴張改變，特別是合并肺氣腫而長期進行治療的免疫功能低下患者，需高度懷疑NTM感染。NTM的菌種分布存在明顯的地域性差異，北美、澳大利亞、南非、日本、韓國等地區(qū)以鳥一胞內(nèi)分枝桿菌復合群為主要菌種，其次為膿腫分枝桿菌；歐洲則以蟾分枝桿菌、瑪爾摩分枝桿菌為主[11]。我國的1項多中心研究表明，胞內(nèi)分枝桿菌是東部地區(qū)檢出的主要NTM菌種，膿腫分枝桿菌在南部地區(qū)檢出率高[15]。本研究顯示，上海市青浦區(qū)檢出的NTM以胞內(nèi)分枝桿菌最多，占60.0%；其次是堪薩斯分枝桿菌，占20%。本研究發(fā)現(xiàn)的NTM分布特點可為上海市青浦區(qū)NTM的流行趨勢研究提供參考，但本研究也具有一定的局限性，未對檢出的NTM進行藥敏試驗，同時缺乏隨訪和轉(zhuǎn)歸數(shù)據(jù)以評價患者的治療效果，后期應考慮在既往研究的基礎上進一步完善藥敏試驗和隨訪結(jié)果分析。