絕經后女性2 型糖尿病合并骨質疏松與DKK1基因多態性關系的研究

王童瑤，李思源，李軍，胡倩，趙會榮，邵晗，侯澤鑫

1.石河子大學醫學院第一附屬醫院內分泌代謝科，新疆石河子 832000；2.石河子大學醫學院組織學與組胚學教研室，新疆石河子 832000；3.江蘇省南通市第二人民醫院老年醫學科，江蘇南通 226000

2 型糖尿病 （type 2 diabetes mellitus，T2DM）是一種由遺傳和環境引起的慢性代謝性疾病， 在我國的發病率逐年增加。 骨質疏松（osteoprosis，OP）是好發于老年人的一種以骨量減少為特征的退行性疾病， 而OP 又是T2DM 的常見并發癥之一。 研究表明， 絕經后女性T2DM 合并OP 患者多于非絕經女性，絕經為T2DM 合并OP 的常見危險因素[1-2]。

Wnt 信號通路為一個復雜的蛋白質網絡， 參與了多種生物學過程的調控[3]，經典的Wnt/β-catenin信號促進骨髓間充質干細胞 （bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs） 向成骨細胞分化[4]，而DKK 分泌蛋白1（DKK1）為信號通路的拮抗劑，通過與LRP5/6 結合促進OP 的發生[5]。 目前DKK1基因多態性通過Wnt/β-catenin 信號通路在絕經后T2DM 合并OP 中的研究鮮有報道。該研究通過分析2016 年10 月—2017 年10 月收集的136 例絕經后女性DKK1 基因rs1373004、rs1528877 位點單核苷酸多態性與骨代謝指標的相關關系， 為該病的靶向治療提供理論依據。 現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

于石河子大學醫學院第一附屬醫院內分泌代謝科門診就診以及住院的絕經女性中， 一共收集了136 份數據。 將這些數據劃分為A、B、C、D，共4 組。納入標準：符合1999 年WHO 糖尿病診斷標準。 排除標準：有1 型糖尿病、特殊類型糖尿病等影響糖代謝的內分泌疾病患者； 有甲狀旁腺功能亢進等影響骨代謝的疾病患者。

1.2 方法

記錄身高、體質量、絕經年齡、BMI 以及WHR。禁食、禁水8~10 h，于次日晨抽取靜脈血5 mL。全自動生化分析儀測定Ca、P、空腹血糖（FPG）、三酰甘油(TG)、LDL-C、HDL-C，堿性磷酸酶（ALP）等生化指標；高壓液相色譜法檢測HbA1c；DEXA 骨密度儀測定骨密度；采用DNA 提取試劑盒提取DNA；飛行時間質譜法測定其基因狀況以及基因多態性。

1.3 統計方法

采用SPSS 20.0 統計學軟件進行數據處理，符合正態分布的計量資料以（±s）表示，采用t檢驗和方差分析；計數資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 4 組一般資料比較

A 組和D 組的女性在絕經年齡以及年限比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表1。

表1 4 組患者一般資料比較（±s）

表1 4 組患者一般資料比較（±s）

注：與A 組相比，**P＜0.01

?

2.2 4 組生化指標和骨密度比較

A 組的FPG 及HbA1c 較低，BMD、TG 偏高，與C、D 組相比差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表2。

表2 4 組生化指標和骨密度比較(±s)

表2 4 組生化指標和骨密度比較(±s)

注：與A 組相比，*P＜0.05，**P＜0.01

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2.3 Hardy-Wernberg 遺傳平衡檢測

分析不同組的基因型分布狀況， 并研究其實驗對象的人群代表性，DKK1 基因兩位點具有較好的分布頻率， 同時其均衡狀況較好， 其分布滿足Hardy-Weinberg 平衡，差異有統計學意義（P＜0.05），這說明該研究中選擇的人群代表性較好。

2.4 DKK1 基因SNP 位點基因型頻率

在rs1373004 位點，A 組和B、D 組相比， 差異有統計學意義（P＜0.05）。 在rs1528877 位點，D 組與B組具有不同的分布狀況， 差異有統計學意義 （P＜0.05）。 見表3。

表3 DKK1 基因位點基因型及等位基因分布頻率比較[n(%)]

2.5 多元線性回歸分析

以年齡、 絕經年限、WHR、BMI、HbA1c、FPG、Ca、P、TG、LDL-C、HDL-C、ALP、基因多態性為自變量開展多元回歸分析，結果顯示，rs1373004 位點基因多態性、TG 與BMD（L1-4）成正相關（P＜0.05）。見表4。

表4 BMD 影響因素的多元線性回歸分析

3 討論

研究發現，絕經后女性雌激素會逐漸降低，接連出現骨質問題，破骨細胞和成骨細胞也會發生變化，其骨吸收作用相對較好，骨含量會逐漸降低，容易出現骨質疏松[6-7]。 Wnt 信號通路在不同位置以及細胞分化中效果和作用不同， 同時其蛋白抑制效果也存在一定差異，在信號通路中，DKK1 蛋白在骨質疏松中能夠發揮較好的效果。

該研究中， 兩位點的基因型和等位基因的頻率分布結果顯示，rs1373004 位點，T2DM 合并OP 組與對照組相比，差異有統計學意義（P＜0.05）；考慮rs1373004位點的基因多態性可能分別與骨代謝、 糖代謝異常有關系。 這與一項納入111 萬余例北美、歐洲、東亞及澳大利亞人群， 對17 個GWA 研究進行的薈萃分析， 結果顯示DKK1 基因rs1373004 多態性與股骨頸、腰椎BMD 及骨折風險相關一致[8]。這與Wang JY等[9]的研究結果：DKK1rs1528877 多態性分別與腰椎和全髖的基線BMD 相關一致。與Zhang W 等[10]的研究，T2DM 患者女性中rs1373004 的基因多態性與糖代謝有關相一致。該研究多元線性回歸分析結果示：在新疆石河子地區絕經后女性患者中，rs1373004 位點，基因多態性、TG 升高的是BMD（L1-4）升高的保護因素。 這與陳文聰等[11]研究的結論存在一致性，即女性體內的脂肪含量和股骨頸BMD 具有高度一致性。 女性在絕經之后，其雌性激素逐漸降低，雌激素分泌的下降也使得其骨保護作用在逐漸削弱， 對破骨細胞以及骨吸收也有一定影響， 骨含量降低逐漸提高其骨質疏松的可能性[12]。 通過分析發現，脂肪組織和雌激素存在一定關聯，較高脂肪含量也能對骨骼有一定的保護作用，為絕經后女性提供雌激素來源，延緩骨質疏松的發生。而Simona 等在斯洛文尼亞人群中的研究表明DKK1 基因不具有多態性， 因為所有受試者具有相同的基因型。 因此該研究應擴大樣本量加強研究[13-14]。

綜上所述，近年來，關于糖尿病合并骨質疏松已有較多研究， 但目前關于DKK1 基因多態性對絕經后女性T2DM 合并OP 的研究鮮少。該文得出DKK1基因rs1373004、rs1528877 位點基因多態性及可能參與了絕經后女性2 型糖尿病人群糖、 骨代謝的過程， 因此為治療絕經后女性T2DM 合并OP 提供精準靶點提供理論依據。