T淋巴細胞、TLR4與NF-κB p65在腦卒中相關性肺炎患者血清中的表達及意義

黃鈺峰，鄭智慧*，楊梅林，洪衛民

（1. 福建中醫藥大學護理學院，福建 福州 350122 ；2. 福建省三明第一醫院神經內科，福建 三明 365000）

腦卒中相關性肺炎(SAP) 是指未接受機械通氣治療的腦卒中患者在發病后7 d 內出現的肺炎[1]。此病是腦卒中患者最常見、最嚴重的并發癥之一。有研究指出，SAP 的發病機制復雜，腦卒中引起的意識障礙、誤吸及免疫抑制是誘發此病的重要因素[2]。相關的研究顯示，腦卒中患者在發生腦損傷后會出現細胞免疫功能下降的情況，這會增加其發生感染（特別是肺部感染）的風險。發生感染又會反過來影響腦卒中患者的恢復，導致其預后不佳。本文主要是探討T 淋巴細胞（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、Toll 樣受體4（TLR4）與核轉錄因子-κB P65（NF-κB p65）在SAP患者血清中的表達及意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選 取2019 年5 月 至2020 年5 月 福 建 省 三明第一醫院收治的17 例SAP 患者和同期該院收治的20 例單純腦卒中患者為研究對象。將17 例SAP 患者作為SAP 組，將20 例單純腦卒中患者作為非SAP 組。SAP 組患者的納入標準是：1）在發病后24 h 內入院；2）經頭顱CT 檢查或MRI檢查被確診患有急性腦卒中；3）病情符合《卒中相關性肺炎診治中國專家共識》[1]中規定的SAP的診斷標準；4）未合并惡性腫瘤、器官功能障礙、自身免疫性疾病及中樞神經系統疾病。非SAP 組患者的納入標準是：1）性別、年齡、NHISS 評分等臨床資料與SAP 組患者相匹配（無顯著差異）；2）在發病后24 h 內入院；3）經頭顱CT 檢查或MRI 檢查被確診患有急性腦卒中；4）未合并惡性腫瘤、器官功能障礙、自身免疫性疾病及中樞神經系統疾病。非SAP 組20 例患者中有男性13 例，女性7 例。SAP 組17 例患者中有男性11 例，女性6 例。兩組患者的性別、年齡、NHISS 評分相比，差異無統計學意義（P ＞0.05），具有可比性。本研究經我院醫學倫理委員會審核通過，研究對象或其家屬已簽署知情同意書。

1.2 方法

在兩組患者入組次日清晨采集其血樣。抽取其空腹靜脈血10 mL（均分為2 管）。使用流式細胞儀（采用流式細胞檢測法）檢測血清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的 水 平， 采 用 熒 光 定量（PCR）法（按照說明書配制反應體系，進行擴增反應）檢測血清TLR4、NF-κB p65 的水平。TLR4 在全血中的修正表達量I 的計算方法是：I=樣本TLR4 Copies/樣本Actin Copies；I×100 表示總RNA100 的情況下目的基因mRNA 的表達量。NF-κB p65 在全血中的修正表達量I 的計算方法是：I=樣本NF-κB p65 Copies/樣本Actin Copies ；I×100 表示總RNA100 的情況下目的基因mRNA 的表達量。

1.3 統計學處理

采用SPSS 22.0 軟件進行數據分析。計量資料用均數± 標準差（±s）表示，采用t 檢驗，計數資料用百分比（%）表示，采用χ2 檢驗。P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者血清T 淋巴細胞水平的對比

兩 組 患 者 血 清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的水平相比，差異無統計學意義（P ＞0.05）。詳見表1。

表1 兩組患者血清T 淋巴細胞水平的對比（± s）

表1 兩組患者血清T 淋巴細胞水平的對比（± s）

組別 D3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+非SAP 組（n=20） 63.92±9.94 41.36±8.83 19.81±9.56 2.60±1.38 SAP 組（n=17） 65.04±7.41 40.92±8.94 21.13±9.75 2.40±1.29

2.2 兩組患者血清TLR4、NF-κBp65 基因mRNA表達量的比較

SAP 組 患 者 血 清NF-κB p65 基 因mRNA 的表達量高于非SAP 組患者，差異有統計學意義（P ＜0.05）。兩 組 患 者 血 清TLR4 基 因mRNA 的表達量相比，差異無統計學意義（P ＞0.05）。詳見表2。

表2 兩組患者血清TLR4、NF-κB p65 基因mRNA 表達量的比較（± s）

表2 兩組患者血清TLR4、NF-κB p65 基因mRNA 表達量的比較（± s）

注：*與SAP 組比較，P ＜0.05。

組別 TLR4（I×100） NF-κB p65（I×100）非SAP 組（n=20） 3.74±3.15 2.32±1.42*SAP 組（n=17） 4.30±3.15 6.64±1.97

2.3 兩組患者血清T 淋巴細胞水平與其血清TLR4、NF-κBp65 基因mRNA 表達量的相關性

兩組患者血清NF-κB p65 基因mRNA 的表達量與其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的水平呈正相關（r=0.144，P ＜0.05；r=0.201，P ＜0.05；r=0.071，P ＜0.05）， 與 其 血 清CD8+的 水 平呈負相關（r=-0.028，P ＜0.05）。兩組患者血清TRL4 基因mRNA 的表達量與其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 呈 正 相 關（r=0.097，P ＜0.05；r=0.260，P ＜0.05；r=0.149，P ＜0.05），與其血清CD8+的水平呈負相關（r=-0.156，P ＜0.05）。詳見表3。

表3 兩組患者血清T 淋巴細胞水平與其血清TLR4、NFκB p65 基因mRNA 表達量的相關性

3 討論

T 淋巴細胞是一種重要的免疫效應細胞，可分 為CD3+、CD4+、CD8+。這 些T 淋 巴 細 胞 均 具有調節人體免疫活動、介導細胞免疫過程的功能。王冬英等[2]的研究結果顯示，SAP 組患者血 清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 均 明 顯 高于非SAP 組患者，其血清CD8+的水平明顯低于非SAP 組患者。有研究指出，SAP 患者血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 會 隨 著 其 病 情危險程度的增高而顯著增高。高危SAP 患者血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 均 高 于 低 危SAP 患者[3]。相關的研究顯示，腦卒中患者發病早期外周血T 淋巴細胞亞群的水平與其SAP 的發生風險密切相關[4]。本研究的結果顯示，兩組患者 血 清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的 水 平相比，差異無統計學意義（P ＞0.05）。這與上述研究結果不符。這可能與本研究的樣本量較小有關。NF-kB 是一種具有多向調節作用的核轉錄因子，可參與諸多生理、病理過程，如炎性反應、細胞凋亡等，尤其是在免疫炎性反應過程中可起到重要的作用。其可控制細胞因子的產生和細胞的凋亡，在免疫或炎性因素的誘導下其可轉移至胞核。有研究指出，NF-kB 的活化及移位可加快信號通路下游多種促炎細胞因子（如TNF-α、IL-1β、IL-6）的分泌，加劇炎癥反應。相關的研究顯示，NF-kB 可參與神經系統疾病發生發展的全過程[5]。本次研究的結果顯示，SAP 組患者血清NF-κB p65 基因mRNA 的表達量高于非SAP 組患者，差異有統計學意義（P ＜0.05）。兩組患者血清NF-κB p65 基因mRNA 的表達量與其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的水平呈正相關（r=0.144，P ＜0.05；r=0.201，P ＜0.05；r=0.071，P ＜0.05），與其血清CD8+的水平呈負相關（r=-0.028，P ＜0.05）。這說明，SAP 的發生可能與NF-κB p65 信號通路被激活有關。Toll 樣受體(Toll-like receptors, TLR)是一種可參與非特異性免疫的Ⅰ類重要蛋白質分子，也是“連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁”。TLR4 是天然免疫識別受體，被激活后可同時啟動Myd88、TRIF 這兩條途徑，進而可活化NF-κB 及IRFs，啟動炎癥基因的表達。有研究顯示，TLR4/NF-κB 信號通路在腦缺血后的神經炎癥反應、腦缺血再灌注損傷中起到重要的作用[6-7]。本次研究的結果顯示，兩組患者血清TRL4 基因mRNA 的表達量與其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的水平呈正相關（r=0.097，P ＜0.05；r=0.260，P ＜0.05；r=0.149，P ＜0.05），與其血清CD8+的水平呈負相關（r=-0.156，P ＜0.05）。有研究指出，TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR9 在腦缺血的發生、發展中均起到重要的作用[8]。王娜等[9]在研究中指出，TLR4/NF-κB 信號通路是與抗炎免疫機制密切相關的一條信號傳導通路，其在炎癥的發生發展中起到重要的作用。相關的研究表明，通過提高腦卒中患者的免疫力，抑制其過度激活的TLR4/NF-κB信號通路，調控其體內SAP 相關炎癥因子的水平可有效降低其SAP 的發生風險。有氧運動、中醫藥療法在抑制炎癥信號通路、調節免疫等方面具有獨特的優勢，值得在SAP 的防治中推廣應用。

綜上所述，腦卒中患者血清TLR4、NF-κB p65 的水平與其血清T 淋巴細胞的水平密切相關。SAP 的發生可能與NF-κB p65 信號通路被激活有關。臨床醫生應對上述情況予以關注。