自噬相關蛋白LC3與宮頸癌風險相關性的Meta分析*

謝珊艷,劉珊珊,楊 蔭△

1.廣州衛生職業技術學院，廣東廣州 510000；2.廣州醫科大學，廣東廣州 510000

宮頸癌位全球36個國家的女性腫瘤死亡原因之首[1]。文獻[2]數據顯示，我國該病的發生和死亡均呈上升趨勢。我國宮頸癌5年生存率隨年齡的增大而逐漸下降，與世界趨勢一致[3]。當下我國老齡化的進程加速，老年患者在診斷時還常伴其他疾病，這些情況均為該病治療和管理帶來挑戰[3]。自噬是真核生物細胞內成分的自我降解過程，通過轉運待降解物到液泡或溶酶體內，并使待降解物在其內被水解酶分解。自噬在癌癥中具有雙向的、環境依賴的作用，通過刺激和抑制自噬的干預措施已被提出可作為癌癥治療的方法[4]。微管相關蛋白1輕鏈3(LC3)是當前研究較多的自噬標志性物質，是酵母ATG8基因的同源物，位于前自噬泡和自噬泡膜的表面，是已知的與成熟自噬體相關的Atg蛋白，被認為是較特異的自噬診斷指標[5-6]。目前，自噬與宮頸癌之間的關系未完全明了。因此，本研究利用Meta分析，對所有相關的研究結果進行系統評價，以期明確在宮頸癌發生發展中LC3蛋白的作用,進而為自噬與宮頸癌之間的關系提供線索。

1 資料與方法

1.1納入和排除標準

1.1.1納入標準 建庫至2021年5月國內外公開發表的中文和英文文獻，有關評價 LC3 蛋白和宮頸癌相關性的病例-對照研究。研究對象為病例取材前未經放療、化療或免疫治療，均經病理結果證實，納入人群不受年齡、種族、國籍限制，且均有完整臨床病理資料；納入文獻研究的問題及方法相似；LC3蛋白的檢測方法均為鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法(SP法)。

1.1.2排除標準 (1)LC3蛋白的檢測非SP法；(2)重復報告的文獻，納入方法學質量較好者；(3)數據不完整；(4)納入研究的對象未經病理學證實或未提供來源。

1.2檢索策略 計算機檢索EMbase、The Cochrane Library、PubMed、萬方數據、中國知網和維普資訊數據庫，收集所有相關研究，檢索時限從建庫到2021年5月。結合關鍵詞、主題詞和自由詞進行檢索。中文檢索詞包括：宮頸、癌、LC3和蛋白表達；英文檢索詞包括：cervical cancer、uterine cervical neoplasms、LC3 protein、human、light chain 3、MAP1LC3A protein、MAP1LC3B protein、MAP1LC3C protein。

1.3篩選文獻、提取資料和質量評價 文獻篩選、資料提取及質量評價均由2人獨立完成。如遇分歧，則交給第三方定奪。資料提取包括了納入研究的基本信息，如作者、文題等；質量評價相關性要素；結果測量相關數據，如淋巴結轉移、組織學分級、臨床分期等；對象基線特征，如樣本量、患者年齡等。采用病例對照研究紐卡斯爾-渥太華質量評價量表(NOS)[7]評價質量。

1.4統計學處理 在RevMan 5.3軟件中執行Meta分析，將OR與其95%CI視為效應量。運用χ2檢驗進行各研究結果間的異質性分析(檢驗水準為α=0.1)，結合I2定量異質性。當I2≥75% 存在高度異質性，I2≥50% 存在中度異質性，I2≥25% 存在低度異質性。若有統計學異質性時，闡述異質性原因后，隨機效應模型行Meta分析；異質性突出，僅行描述性分析；若無統計學異質性，采用固定效應模型進行Meta分析。

2 結 果

2.1文獻檢索 檢索EMbase、Cochrane等數據庫，共檢出文獻105篇，經去重、排除非SP法、數據不全和未獲全文，最終納入9個研究[8-16]，其中中文8個[9-16]，英文1個[8]，包括1 252名研究對象，納入宮頸癌組660例、宮頸上皮內瘤變(CIN)組313例、健康宮頸組279例。

2.2納入研究的基本特征 見表1。

表1 納入研究的基本特征

續表1 納入研究的基本特征

2.3納入研究的方法學質量評價 見表2。

表2 納入研究的方法學質量評價

2.4Meta分析結果

2.4.1宮頸癌組和健康宮頸組LC3蛋白表達情況比較 共9個研究[8-16]描述了兩組的LC3蛋白表達情況，兩組間異質性結果比較，差異無統計學意義(P=0.20，I2=27%)。固定效應模型Meta 分析結果顯示，宮頸癌組LC3蛋白陽性率(陽性例數/總例數40.61%,268/660)顯著低于健康宮頸組(陽性例數/總例數84.23%,235/279)，差異有統計學意義(OR=0.12，95%CI：0.08～0.17，P<0.05)。

2.4.2宮頸癌組和CIN組LC3蛋白表達情況比較 共6個研究[8-10,12,14,16]發表了兩組LC3蛋白表達的情況，兩組異質性結果比較，差異無統計學意義(P=0.18，I2=34%)。固定效應模型 Meta 分析結果顯示，宮頸癌組LC3蛋白陽性率(34.20%,145/424)顯著低于CIN組(65.18%,204/313)，差異有統計學意義(OR=0.23，95%CI：0.17～0.33，P<0.05)。

2.4.3CIN組和健康宮頸組LC3蛋白表達情況比較 共6個研究[8-10,12,14,16]報告了兩組LC3的表達情況，兩組異質性結果比較，差異無統計學意義(P=0.11，I2=44%)。固定效應模型 Meta 分析結果顯示，CIN組LC3蛋白陽性率(65.18%,204/313)低于健康宮頸組(83.44%,126/151)，差異有統計學意義(OR=0.35，95%CI：0.21～0.59，P<0.05)。

2.4.4宮頸癌組中低分化和高分化患者LC3蛋白表達情況比較 共8個研究[8-13,15-16]闡述了宮頸癌組中不同分化患者間LC3蛋白的表達情況，宮頸癌組中低分化和高分化患者異質性結果比較，差異無統計學意義(P=0.63，I2=0%)。固定效應模型 Meta 分析結果顯示，宮頸癌組中低分化患者LC3蛋白表陽性率(36.57%,143/391)低于高分化患者(49.66%,73/147)，差異有統計學意義(OR=0.28，95%CI：0.17～0.44，P<0.05)。

2.4.5宮頸癌組中有、無淋巴結轉移患者LC3蛋白表達情況比較 共8個研究[8,9,11-16]報告了宮頸癌組中有、無淋巴結轉移患者LC3蛋白表達的情況，宮頸癌組中有、無淋巴結轉移患者異質性結果比較，差異無統計學意義(P=0.61，I2=0%)。經固定效應模型 Meta 分析結果顯示，宮頸癌組中有淋巴結轉移患者LC3蛋白陽性率(36.78%,57/155)和無淋巴結轉移患者(49.05%,233/475)比較，差異無統計學意義(OR=0.77，95%CI：0.51～1.15，P>0.05)。

2.4.6宮頸癌組中腫瘤最大徑≤4 cm和腫瘤最大徑>4 cm患者LC3蛋白表達情況比較 共5個研究[9,13-16]報告了宮頸癌組中不同腫瘤最大徑患者LC3蛋白表達的情況，宮頸癌組中不同腫瘤最大徑患者異質性結果比較，差異無統計學意義(P=0.11，I2=47%)。經固定效應模型Meta 分析結果顯示，宮頸癌組中腫瘤最大徑≤4 cm患者LC3蛋白陽性率(59.80%,180/301)和腫瘤最大徑>4 cm患者(50.34%，75/149)比較，差異無統計學意義(OR=1.08，95%CI：0.68～1.70，P>0.05)。

2.4.7宮頸癌組中肌層浸潤深度<1/2肌層和肌層浸潤深度≥1/2肌層患者LC3蛋白表達情況比較 共4個研究[9-11,14]報告了宮頸癌組中肌層浸潤深度<1/2肌層肌層浸潤深度≥1/2肌層患者LC3蛋白的表達情況，宮頸癌組中肌層浸潤深度<1/2肌層和肌層浸潤深度≥1/2肌層患者異質性結果比較，差異無統計學意義(P=0.44，I2=0%)。經固定效應模型 Meta 分析結果顯示，宮頸癌組中肌層浸潤深度<1/2肌層患者LC3蛋白陽性率(35.53%,54/152)與肌層浸潤深度≥1/2肌層患者(43.00%,43/100)比較，差異無統計學意義(OR=0.97，95%CI:0.55～1.72，P>0.05)。

2.4.8宮頸癌組中國際婦產科協會臨床分期Ⅰ期和Ⅱ期患者LC3蛋白表達情況比較 共8個研究[8-12,14-16]報告了宮頸癌組中不同國際婦產科協會臨床分期患者LC3蛋白的表達情況，宮頸癌組中國際婦產科協會臨床分期Ⅰ期和Ⅱ期患者中度、高度異質性結果比較，差異有統計學意義(P=0.001，I2=71%)。隨機效應模型Meta 分析結果顯示，宮頸癌組中國際婦產科協會臨床分期Ⅰ期患者LC3陽性率(52.17%,204/391)和Ⅱ期患者(36.41%,67/184)比較，差異無統計學意義(OR=1.41，95%CI：0.61～3.28，P>0.05)。

3 討 論

自噬是一種進化保守的分解代謝途徑，根據形態和機制上的不同分為巨自噬、微自噬和伴蛋白介導的自噬，通常巨自噬被稱為自噬。有研究表明，自噬在腫瘤的發生發展中也起著重要作用，且對于腫瘤的影響具有雙面性[4]。自噬在腫瘤發生中的致瘤前作用已通過基因工程小鼠模型進行了研究和驗證[17]，該模型證實自噬抑制有利于腫瘤的發生；而在腫瘤形成后，通過降低自噬水平可抑制腫瘤細胞的增長。事實上藥物羥氯喹已經在多個臨床試驗中測試，以評估自噬抑制在胰腺腺癌和其他癌癥中的有效性[18]。另一方面自噬具有抑瘤作用，如自噬可通過降解癌蛋白抑制腫瘤的進展和轉移[19]，部分新型藥物可體外誘導腫瘤細胞發生自噬性死亡[20]等。迄今，已報道有31個自噬相關(Atg)基因[21]，其中，酵母ATG8的編碼基因目前有6個與人類同源，即微管相關蛋白-1輕鏈3家族(MAP1LC3A、 MAP1LC3B、MAP1LC3C)和氨基丁酸受體相關蛋白(GABARAP、GABARAPL1、GABARAPL2)。酵母Apg8/Aut7p是酵母自噬所必需的，在自噬小體的形成中起著關鍵作用[22]。酵母Apg8/Aut7p和大鼠MAP1LC3(與Apg8/Aut7p具有28%的氨基酸同源性)位于自噬膜上，已被用作自噬體膜的標記物[6,23]。早在1983年，VALLEE等[24]在小牛大腦皮質中發現了與含有MAP1A和MAP1B部分共純化的相對分子質量為(17～19)×103的蛋白質，隨后，KUZNETSOV等[25]證實該蛋白為相對分子質量為18×103的蛋白質LC3。接著MAP1LC3被鑒定為與大鼠腦MAP1A和MAP1B共純化的蛋白[26]。而后，HE等[27]發現3個人類蛋白MAP1LC3A、 MAP1LC3B、MAP1LC3C與大鼠MAP1LC3的同源性分別為81%、94%和55%，與大鼠MAP1 LC3的相似性分別為91%、96%和72%；且MAP1 LC3A和MAP1 LC3C與大鼠MAP1 LC3存在幾乎相同的亞細胞定位；另外，在HeLa細胞生存條件由正常改變為應激狀態時，MAP1LC3B的分布從高爾基體/核周模式改變為點狀自噬小體模式。近年，LEE等[28]發現了LC3在經典的自噬途徑中參與貨物的選擇，促進自噬體的關閉和促進膜的融合。

本研究結果顯示：宮頸癌組LC3蛋白陽性率低于健康宮頸組，提示過低的LC3蛋白表達有可能是宮頸癌發生的危險因素。LC3蛋白表達在組織分化上也存在顯著差異，在宮頸癌組中低分化患者明顯低于高分化患者，提示LC3蛋白表達有可能隨著宮頸癌的分化程度降低而降低，這與張晶等[9]、王廷恒[12]、程文青[13]、趙紅萍[15]、馬學華等[16]的研究結果一致。

本研究局限性：(1)納入的文獻均未能按照種族、年齡等因素進行亞組分析，故使用本研究結論時應謹慎；(2)缺乏灰色文獻，可能遺漏陰性的結果；(3)未對納入研究進行偏倚描述及討論；(4)SP法檢測LC3蛋白的試劑盒不統一。

綜上所述，本研究首次對LC3蛋白的表達與宮頸癌及其不同臨床病理特征相關性進行系統評價。依當前證據可見LC3蛋白與宮頸癌及其不同臨床病理特征之間存在著顯著的相關性，揭示在宮頸癌的發生發展中，LC3蛋白可能起著重要作用。進而為細胞自噬水平與宮頸癌發生和發展機制的研究提供了比較有指向性的證據，也為宮頸癌的生物療法提供了較為正確的方向。