不同梅毒血清學檢測策略應用于梅毒診斷中的價值對比

陳俊生，張旭明

深圳市寶安區(qū)石巖人民醫(yī)院 檢驗科，廣東 深圳 518108

0 引言

梅毒由梅毒螺旋體感染引起，常表現為皮膚黏膜病變，近些年來發(fā)病率不斷增加。梅毒的傳播主要是通過性接觸、血液傳播和垂直傳播[1]。目前，對于梅毒的診治和檢測方法較多，常見的有酶聯免疫吸附實驗（TP-ELISA）、梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）及甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）等技術，盡管具有較為廣泛的開展率，但存在一定的不足[2]。TP-ELISA檢查只能說明患者正在感染或曾經感染過，不能判定梅毒活動與否[3]。TPPA試劑較貴、耗時較長，不利于大批量血液的檢測。TRUST易受某些傳染病或自身免疫性疾病的影響。選擇合適的檢測方法，可提高梅毒的診斷效率，避免漏檢。因此，本文對梅毒患者進行不同檢測方法的比較，探討其臨床應用價值，結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經患者及家屬同意并簽署知情同意書及醫(yī)院倫理委員會批準，選取深圳市寶安區(qū)石巖人民醫(yī)院2019年11月-2020年11月收治的80例梅毒患者作為觀察組，50例非梅毒患者作為對照組。對照組男32例，女18例；年齡23～58歲，平均（34.02±2.12）歲。觀察組男62例，女18例；年齡23～58歲，平均（34.42±2.31）歲。兩組患者一般資料對比無統計學差異（P>0.05），具有可比性。

納入標準：①臨床病理診斷標準分期均參照《梅毒診斷標準》[4]；②具有自主行為能力能夠主動配合醫(yī)師；③無其他傳染病疾病者。

排除標準：①服用過影響檢測結果的藥物；②存在精神疾病者；③嚴重的心肺腎等重要器官功能不全者。

1.2 方法

TP-ELISA試劑由英科新創(chuàng)（廈門）科技股份有限公司提供；TRUST試劑由上海榮盛生物技術有限公司提供；TPPA試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供。

（1）TP-ELISA：將制備的血清添加至板條孔內，并放置于溫度為37℃的孵育箱中慢搖60min。用洗板機進行清洗，每次5min，清洗3次，之后在每個孔徑中加入酶標試劑100μL，混勻震蕩，放入37℃的孵育箱中30min，取出后，添加與孔內體積等量的終止液，進行酶標儀的測定。其中測定樣本的吸光度，基準為1=吸光值（樣本/臨界值），當結果大于基準時則為陽性，小于基準值時為陰性。

（2）TRUST：將制備好的樣本取300μL加入卡片圈，抽取試劑盒中的抗原液100μL加入上述卡片圈中，充分混勻，放入水平搖床，10min，轉速為100rpm/min，結束后在光線下分析結果。其中陽性：卡片圈中出現粉色絮狀物，并在底部凝聚，形成凝聚物。陰性：卡片圈中心出現紅色顆粒的聚集，或均勻分布于卡片底部。

（3）TPPA：將制備好的梅毒螺旋抗原放置于紅色顆粒之上，在此基礎上，加入含有梅毒螺旋抗體的血清，通過抗原抗體的相互反應，產生凝結現象。吸取血清反應進行有效實驗，將實驗班放置于振蕩器上，放入37℃的孵育箱中2h，取出觀察結果。陰性：孔底均勻鋪滿粉色凝膠顆粒，邊緣有少量顆粒。陽性：孔底的紅色凝膠顆粒緊縮，分布較緊密。

1.3 觀察指標及評價標準

以臨床病理診斷結果為金標準，分析不同方法檢測的診斷價值（確診率、誤診率以及敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值）。

診斷標準：以病理診斷結果為金標準。

陽性率=確診人數/總人數×100%；誤診率=誤診人數/總人數×100%。

敏感性=病理證實真陽性例數/（假陰性例數+病理證實真陽性例數）×100%。

特異性=病理證實真陰性例數/（假陽性例數+病理證實真陰性例數）×100%。

陽性預測值=診斷例數/病理證實真陽性例數×100%。

陰性預測值=診斷例數/病理證實真陰性例數×100%。

1.4 統計學分析

數據錄入SPSS 22.0軟件中分析，計數資料用%表示，采用χ2檢驗，計量資料用（）表示，采用t檢驗，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 三種檢測方法對梅毒診斷陽性檢測率的比較

TP-ELISA和TPPA法診斷陽性率均高于TRUST（χ2=17.644，P<0.05），但兩者比較差異無統計學意義（χ2=1.344，P>0.05），見表l。

2.2 三種檢測方法的診斷價值比較

TP-ELISA的敏感性及陰性預測值高于TRUST，TPPA的特異性及陽性預測值高于TPELISA及TRUST（P<0.05），見表2。

3 討論

梅毒是一種廣泛流行的性病，一般梅毒的診斷需要結合患者的病史、臨床特征及梅毒抗體的檢測結果綜合判斷，其中梅毒抗體檢測是影響診斷結果的主要依據[5]。其中TP-ELISA多是通過基因重組工程合成梅毒特異性抗原包被在微孔滴定板上，檢測血清中的梅毒特異性抗體是診斷梅毒螺旋體感染的依據之一[6]。但其檢測的是梅毒IgM和IgG的混合抗體，梅毒IgG抗體在治愈后仍然存在較高的陽性率，甚至終生攜帶。TPPA是在血清中抗體與抗原發(fā)生特異反應時，可使包被梅毒螺旋體特異性抗原的顆粒發(fā)生聚集現象，抗體濃度越高明膠顆粒聚集越明顯[7]。TRUST是一種非梅毒螺旋體抗原血清實驗，梅毒螺旋體在破壞組織的同時釋放出一組以卵磷脂為主的半抗原物質，可與梅毒螺旋體中的蛋白質相互結合，最終達到抗原的效果[8]。科學選擇檢測方法是梅毒診斷工作的重要部分。

本研究中，TP-ELISA和TPPA法診斷陽性率均高于TRUST（P<0.05），但兩者比較差異無統計學意義（P>0.05）。表明TP-ELISA及TPPA陽性診斷率較高。TP-ELISA與TPPA均是特異性梅毒螺旋體抗體的血清學試驗[9]。方法簡單、操作便捷快速、安全，準確度高，對梅毒患者的早期發(fā)現、早期診斷及治療具有重要的意義，TPELISA通過抗原夾心法的原來檢測血清中特異性的抗體，可通過酶標儀讀取數據，減少人工讀取的誤差，TPPA是檢測梅毒的特異性方法，通過判斷載體明膠顆粒的顏色，判斷梅毒的準確性，因而此技術在實驗室梅毒診斷中具有可行性以及準確性[10-11]。

本研究中，TP-ELISA的敏感性及陰性預測值高于TRUST，TPPA的特異性及陽性預測值高于TP-ELISA及TRUST（P<0.05）。表明TP-ELISA及TPPA可提高對梅毒診斷的價值。TP-ELISA是梅毒螺旋體中的特異性抗體，通過在微孔板上對梅毒螺旋體特異性反應，純化度較高，進而可提高檢測的靈敏性高、陰性預測值高[12-14]。TPPA通過提取Nichols株梅毒螺旋體特異性抗原與血液中的抗梅毒螺旋體抗體結合產生凝集反應，因而其檢測出的敏感性高，陽性預測值好。由于不同時期的梅毒患者檢出率差異較大，通過TRUST的檢測對于潛伏期患者多呈陰性，其次機體存在較多心磷脂，若患者存在其他類型疾病的存在，例如：麻風、結核、類風濕性關節(jié)炎等，也會降低診斷梅毒的靈敏性及特異性。

綜上所述，相較于TRUST，TP-ELISA和TPPA法可提高對梅毒患者的檢測診斷。