兩種方法檢測(cè)慢性乙型肝炎患者E 抗原/E 抗體雙陽(yáng)性的情況分析

張莉（通信作者），王桂立

1 北京艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室 （北京 100176）；2 北京小湯山醫(yī)院 （北京 102211）

臨床研究顯示，約有5%～10%的成人乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染者可發(fā)展為慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）[1]，CHB可持續(xù)進(jìn)展為肝硬化或肝癌，實(shí)驗(yàn)室檢查乙型肝炎病毒血清標(biāo)記物（hepatitis B virus markers，HBV-M）對(duì)該病的診斷治療具有重要意義。CHB的進(jìn)展過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)血清學(xué)轉(zhuǎn)換，即乙型肝炎E抗原（hepatitis B E antigen，HBeAg）消失、E 抗體（Anti-HBe）出現(xiàn)，而部分患者在血清學(xué)轉(zhuǎn)換過(guò)程中可同時(shí)檢出HBeAg 與Anti-HBe[2]，這可能提示HBV 復(fù)制增加，故抗原、抗體共存現(xiàn)象的檢出至關(guān)重要。HBV-DNA 是CHB 的確診方法，但臨床一般不將其作為初篩方法。HBV-M 的常見(jiàn)檢測(cè)方法有化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析（chemiluminescence microparticle immuno assay，CMIA）法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法，兩種方法的靈敏度和特異度均較高，但究竟哪種方法更適合作為臨床檢出HBeAg 與Anti-HBe 的初篩方法，相關(guān)研究較少。鑒于此，特展開(kāi)本研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017 年7 月至2021 年6 月于我院經(jīng)CMIA 法檢測(cè)為HBeAg/Anti-HBe 雙陽(yáng)性的350 例CHB 患者的臨床資料，其中男213 例，女137 例，年齡40～57 歲，平均（51.29±5.60）歲；同時(shí)收集經(jīng)ELISA 法檢測(cè)為HBeAg/Anti-HBe 雙陽(yáng)性的84例CHB患者的臨床資料，其中男45 例，女39 例，年齡43～57 歲，平均（50.46±5.22）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書(shū)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：確診為CHB[3]；臨床資料完整；近期接受抗病毒治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并艾滋、丙型肝炎感染；合并自身免疫性疾病；合并肝硬化、糖尿病。

1.2 檢測(cè)方法與儀器

血樣處理：采集靜脈血3 ml，于常溫條件下放置30 min 左右，使血樣自行凝集，再在4 ℃條件下以3 500 r/min 的速度離心10 min，取上層血清樣本待檢。

CMIA 法檢測(cè)：采用雅培ArchitectRi2000 全自動(dòng)免疫分析儀，試劑采用儀器配套試劑盒。

ELISA法檢測(cè)：采用Awareness ChemWell 2910 型酶標(biāo)儀，試劑由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供。

HBV-DNA 檢測(cè)：采用熒光定量PCR 法檢測(cè)，試劑由湖南圣湘生物科技股份有限公司提供，儀器采用羅氏Roche Light Cycler 480 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

參考說(shuō)明書(shū)，Anti-HBs ≥10 mIU/ml 判斷為Anti-HBs 陽(yáng)性；HBeAg ≥1 S/CO 判斷為HBeAg 陽(yáng)性；Anti-HBe ≤1 S/CO 判斷為Anti-HBe 陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s 表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CMIA 法檢測(cè)350 例樣本中不同Anti-HBs 水平下HBeAg、Anti-HBe 水平比較

不同Anti-HBs 水平下的HBeAg、Anti-HBe 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Anti-HBs＞100 mIU/ml 水平下的HBeAg、Anti-HBe 水平高于Anti-HBs10～100 mIU/ml、Anti-HBs＜10 mIU/ml水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），Anti-HBs＜10 mIU/ml 與Anti-HBs 10～100 mIU/ml 水平下的HBeAg、Anti-HBe 水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 CMIA 法檢測(cè)350 例樣本中不同Anti-HBs 水平下HBeAg、Anti-HBe 水平比較（±s）

表1 CMIA 法檢測(cè)350 例樣本中不同Anti-HBs 水平下HBeAg、Anti-HBe 水平比較（±s）

注：與Anti-HBs 水平＜10 mIU/ml 比較，aP＜0.05；與Anti-HBs 水平10～100 mIU/ml 比較，bP＜0.05；HBeAg 為E 抗原，Anti-HBe 為E 抗體

Anti-HBe（S/CO)＜103185.21±1.080.62±0.20 10～100 245.26±1.170.57±0.13＞100 8 8.67±1.40ab 0.76±0.10ab F 335.071475.677 P＜0.001 ＜0.001（mIU/ml）例數(shù)HBeAg（S/CO)Anti-HBs 水平

2.2 不同HBV-DNA 水平下的HBeAg、Anti-HBe 檢測(cè)值比較

350 例患者中263 例行HBV-DNA 測(cè)定，HBVDNA＜ 2～8 水平下的HBeAg、Anti-HBe 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同HBV-DNA水平下的HBeAg 水平：[（6～8）＞（2～ ）＞（＜2）]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同HBV-DNA水平下的Anti-HBe 水平：[（6～8）＜（2～ ）＜（＜2）]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 不同HBV-DNA 水平下的HBeAg、Anti-HBe 檢測(cè)值比較（±s）

表2 不同HBV-DNA 水平下的HBeAg、Anti-HBe 檢測(cè)值比較（±s）

注：與HBV-DNA＜2 比較，aP＜0.05；與HBV-DNA＜2～ 比較，bP＜0.05；HBeAg 為E 抗原，Anti-HBe 為E 抗體；HBV-DNA 結(jié)果為對(duì)數(shù)值

Anti-HBe（S/CO）＜21233.50±0.820.69±0.16 2～118 5.79±1.24a 0.55±0.12a 6～8 2213.44±2.65ab 0.46±0.10ab F 1 449.6171 235.220 P＜0.001 ＜0.001 HBV-DNA例數(shù)HBeAg（S/CO）

2.3 CMIA 和ELISA 法檢測(cè)雙陽(yáng)性的方法學(xué)差異

ELISA 法初檢HBV-M 雙陽(yáng)性84 例，ELISA 法復(fù)檢雙陽(yáng)性45 例，再行CMIA 法檢出雙陽(yáng)性3 例（6.67%）；其他結(jié)果：HBeAg（+）/Anti-HBe（-）、HBeAg（-）/Anti-HBe（+）、HBeAg（-）/Anti-HBe(-)分別為36 例（80.00%）、4 例（8.89%）、2 例（4.44%）。

CMIA 法檢出雙陽(yáng)性中有47 例再行ELISA 法復(fù)檢，檢出雙陽(yáng)性2 例（4.26%）；其他結(jié)果：HBeAg（+）/Anti-HBe（-）、HBeAg（-）/Anti-HBe（+）、HBeAg（-）/Anti-HBe（-）分別為5 例（10.64%）、2 例（4.26%）、38 例（80.84%）。

3 討論

HBV 感染病程超過(guò)6 個(gè)月且有慢性肝炎的臨床表現(xiàn)即可判斷為CHB。在疾病發(fā)展過(guò)程中，患者從免疫耐受期向免疫活動(dòng)期轉(zhuǎn)變，此時(shí)出現(xiàn)血清學(xué)轉(zhuǎn)換，但部分患者表現(xiàn)為HBe 抗原與抗體共存，HBe 抗原陽(yáng)性可能提示HBV 再度活動(dòng)[4]，因此HBeAg 與Anti-HBe 共存現(xiàn)象的檢測(cè)對(duì)于CHB 病情監(jiān)測(cè)具有重要意義。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)HBV-M 水平是評(píng)估CHB 病情的關(guān)鍵手段，其中HBV-DNA 定量是判斷HBV 的直接而準(zhǔn)確的手段，可判定乙肝病毒數(shù)量和傳染程度，但其檢測(cè)步驟煩瑣、成本高昂，難以在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室中普及。ELISA 法可進(jìn)行定量和半定量檢測(cè)，其檢測(cè)成本低、步驟簡(jiǎn)單，但對(duì)低濃度抗原或抗體進(jìn)行檢測(cè)時(shí)易造成漏檢，且檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性易受反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度的影響[5]。隨著電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的逐步成熟，CMIA 法的應(yīng)用逐漸增多，其自動(dòng)化、重復(fù)性較強(qiáng)，定量檢測(cè)更靈敏[6]。而對(duì)于HBeAg/Anti-HBe 雙陽(yáng)性檢出的最適用方法暫不明確。

HBeAg 陽(yáng)性提示HBV 正處于感染復(fù)制階段，傳染性較強(qiáng)，而HBeAg 消失、Anti-HBe 出現(xiàn)則提示感染趨于恢復(fù)。HBeAg、Anti-HBe 同時(shí)檢出陽(yáng)性的情況，可能是由于患者體內(nèi)正處于轉(zhuǎn)換過(guò)程的動(dòng)態(tài)平衡中[7]。羅琳等[8]的研究顯示，HBV編碼HBeAg 的基因組C存在變異株，導(dǎo)致非耐受HBeAg 消長(zhǎng)存在差異。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著Anti-HBs 水平的增加，HBeAg、Anti-HBe 水平呈現(xiàn)上升趨勢(shì)；隨著B(niǎo)HV-DNA 水平的增加，HBeAg 水平亦呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，而Anti-HBe 水平呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，表明部分雙陽(yáng)性患者的HBeAg 水平較高，而Anti-HBe 水平低或處于臨界值，提示HBV 顯現(xiàn)高復(fù)制狀態(tài)，可用于病情的監(jiān)測(cè)。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，行ELISA 法檢測(cè)后再經(jīng)CMIA法復(fù)檢發(fā)現(xiàn)，ELISA 法檢測(cè)出的假陽(yáng)性較多，而行CMIA 法檢測(cè)后再經(jīng)ELISA 法復(fù)檢的檢出率也偏低，說(shuō)明ELISA 法檢出雙陽(yáng)性的陽(yáng)性準(zhǔn)確率偏低，表明CMIA 法的檢測(cè)價(jià)值更高。研究表明，CMIA法檢測(cè)HBsAg 水平，達(dá)到0.1 ng/ml 即可檢出，而ELISA 法需達(dá)到0.5 ng/ml 方可檢出[9]。其原因?yàn)椋珽LISA 以固相包被板式法、競(jìng)爭(zhēng)法、一步法為HBe 的主要檢測(cè)方法，如血樣中的HBeAg 水平較高，可導(dǎo)致后帶現(xiàn)象的出現(xiàn)，大量HBeAg 與酶標(biāo)的Anti-HBe 結(jié)合，使酶標(biāo)物無(wú)法與微孔內(nèi)包被的HBeAg 結(jié)合，造成Anti-HBe 假陽(yáng)性的情況。另外，ELISA 法檢測(cè)的線性范圍較窄，且檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性易受溫育時(shí)間、不同人員吸附手法等因素的影響[10]。而CMIA 法的檢測(cè)原理包括電化學(xué)反應(yīng)和免疫反應(yīng)兩種，通過(guò)Ag/Ab 與對(duì)應(yīng)的試劑產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)而引發(fā)的發(fā)光強(qiáng)度定量評(píng)價(jià)被檢物水平，發(fā)光強(qiáng)度與Ag/Ab 水平呈線性關(guān)系，即可確定被檢物的水平[11]。CMIA 法的干擾因素較少，檢測(cè)的準(zhǔn)確度較高，因此CMIA 法具有較高的檢測(cè)價(jià)值[12]。

綜上所述，不同水平HBV-DNA 下的HBV-M呈多樣性，且不同方法檢測(cè)HBeAg、Anti-HBe 的結(jié)果間存在明顯差異，其中CMIA 法較ELISA 法檢測(cè)出的假陽(yáng)性更少。