血清ACTN4對宮頸癌診斷及預后評價的價值

應菲菲

鹽城市婦幼保健院檢驗科,江蘇鹽城 224000

據(jù)世界衛(wèi)生組織關于全球惡性腫瘤的流行病學調查顯示,宮頸癌的發(fā)病率居女性惡性腫瘤第二位,死亡率居第四位[1]。近年來,年輕女性尤其是35歲以下女性宮頸癌的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的上升趨勢,給患者的身心健康和家庭帶來了沉重的負擔[2]。盡管早期手術和輔助放化療等多學科綜合治療方案的不斷進步,但中晚期宮頸癌患者的總體生存率仍然很低[3]。如何提高患者的早期診斷率是改善患者生存預后的重要途徑。血清標本是臨床最易獲得的第一手資料,有研究指出,惡性腫瘤組織可早期表達并釋放多種靶向生物活性分子,外周血濃度往往與腫瘤組織表達量有較好的一致性[4-5]。因此,通過篩選血清靈敏度和特異度較高的生物標志物是腫瘤早期診斷的重要方法。

α-肌動蛋白(ACTN)是血影蛋白基因超家族中的重要一員,主要生物學功能是肌動蛋白的結合蛋白,通過與F板層肌動蛋白相互交聯(lián)進而發(fā)揮維持細胞骨架的完整性和控制細胞運動的功能[6]。已知ACTN家族有4個成員,編號為ACTN 1～4,大量存在于人類和其他哺乳動物中。其中ACTN4由ACTN4基因編碼,廣泛表達于許多組織中,尤其是腎小球足細胞中[7]。前期研究發(fā)現(xiàn),ACTN4異常表達參與了多種惡性腫瘤如乳腺癌、結直腸癌、肝癌、肺癌等的發(fā)生和發(fā)展[8-10]。免疫組化染色結果顯示,宮頸癌患者腫瘤組織中ACTN4基因和蛋白的相對表達水平均明顯升高,且與患者的生存預后有關[11]。體外細胞實驗進一步證實,ACTN4高表達可以顯著促進上皮細胞的凋亡,并向間質細胞轉化,參與腫瘤的惡性生物學行為[12]。因此,筆者認為ACTN4可能是調控宮頸癌發(fā)生和發(fā)展的重要靶向分子。基于此,本研究進一步分析血清ACTN4在新發(fā)宮頸癌患者中的表達,以及對診斷宮頸癌和評估生存預后的應用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2018年1月于本院就診且首次病理檢查確診為宮頸癌的患者80例為宮頸癌組和宮頸上皮內瘤變(CIN)患者50例為CIN組。納入標準:(1)年齡18～75歲;(2)符合宮頸癌和CIN的病理學診斷標準;(3)根據(jù)宮頸癌的治療指南采取相應的手術、放化療等方案治療;(4)簽署知情同意書,取得本院倫理委員會批準,臨床和隨訪資料完整。排除標準:(1)既往有宮頸手術史、新輔助放化療史;(2)其他部位原發(fā)惡性腫瘤,如乳腺癌;(3)術后不能遵醫(yī)囑完成規(guī)定療程的放化療,隨意更改治療方案;(4)嚴重肝、腎、心、肺等功能障礙。另選擇同期入院進行體檢的體檢健康者60例為對照組。宮頸癌組年齡42～73歲,平均(53.4±8.9)歲;CIN組年齡43～72歲,平均(52.9±8.6)歲;對照組年齡40～71歲,平均(53.2±10.1)歲,各組年齡比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2方法

1.2.1臨床資料收集 收集宮頸癌患者的年齡、組織學類型(鱗狀細胞癌和腺癌)、國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期、組織學分級(中高分化和低分化)、淋巴結轉移、腫瘤最大徑、宮頸浸潤深度、切緣陽性和宮旁陽性等資料。宮頸癌分期采用2009年修訂版FIGO分期系統(tǒng)進行,腫瘤最大徑采用婦科醫(yī)生進行盆腔檢查時確定的腫瘤最大徑。

1.2.2治療方法 Ⅰa1期無淋巴管間隙浸潤者可全子宮切除,Ⅰa1期有淋巴管間隙浸潤者選擇根治性子宮切除術+盆腔淋巴結切除術;Ⅰa2、Ⅰb1、Ⅰb2、Ⅱa1和Ⅱa2期選擇根治性子宮切除術+盆腔淋巴結切除術,根據(jù)術后有無高危或者中危因素補充放化療,≥Ⅱb期接受放療或放化療聯(lián)合治療。

1.2.3ACTN4檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測受試者的外周血清ACTN4水平。宮頸癌和CIN患者于接受治療前,對照組于清晨空腹采集肘靜脈血5 mL至抗凝管中,室溫下靜置10 min,以1 500 r/min的速度離心15 min,然后將上清液儲存在-80 ℃抗凝管中直到進一步使用。檢測試劑購自中國江蘇碧云天科技有限公司,所有樣品的檢測均嚴格按照制造商提供的說明書進行,并一式兩份,結果取平均值。試劑批間和批內的變異度均小于15%,試劑的精確度為0.01 pg/mL。根據(jù)宮頸癌患者血清ACTN4水平的中位值(48.9 pg/mL)進行分組,分為高表達組和低表達組。

1.2.4隨訪預后 宮頸癌患者出院后定期接受電話或門診隨訪,隨訪截止2021年1月,隨訪時間3～60個月,中位隨訪時間52個月。以總生存期(OS)為研究終點,定義為任何原因的死亡。如果截止2021年1月患者仍然存活,則記錄OS為60個月。

2 結 果

2.1各組血清ACTN4水平比較 宮頸癌組血清ACTN4水平[(48.9±11.3)pg/mL]明顯高于CIN組[(38.6±9.7)pg/mL]和對照組[(35.2±8.3)pg/mL],差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001),但CIN組和對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見圖1。

圖1 各組血清ACTN4水平比較

2.2ACTN4診斷宮頸癌的效能 以血清ACTN4水平作為診斷指標,以宮頸癌為診斷結果納入ROC曲線進行分析,結果顯示,血清ACTN4診斷宮頸癌的曲線下面積(AUC)為0.856(95%CI0.798～0.902,P<0.001),靈敏度和特異度分別為85.6%和77.9%,見圖2。

圖2 ROC曲線分析ACTN4診斷宮頸癌的效能

2.3ACTN4表達與宮頸癌病理特征的關系 宮頸癌患者FIGO分期≥Ⅱb期比Ⅰa～<Ⅱb期、淋巴結轉移陽性比陰性、宮頸浸潤深度≥2/3比<2/3的ACTN4高表達率高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);其他臨床特征之間ACTN4表達情況比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 ACTN4表達與宮頸癌病理特征的關系(n)

2.4ACTN4表達與累積生存率的關系 Kaplan-Meier生存曲線結果顯示,ACTN4高表達患者的累積生存率明顯低于ACTN4低表達患者,差異有統(tǒng)計學意義(42.6%vs.62.8%,χ2=8.625,P<0.001),見圖3。

圖3 ACTN4表達與累積生存率的關系

2.5OS的危險因素分析 將宮頸癌患者的年齡、組織學類型、FIGO分期、組織學分級、淋巴結轉移、腫瘤最大徑、宮頸浸潤深度和ACTN4表達作為篩選指標,以OS作為結果,采用單因素Cox比例風險回歸模型進行分析,差異有統(tǒng)計學意義的指標再采用多因素Cox比例風險回歸模型進行分析。結果顯示,FIGO分期≥Ⅱb期、淋巴結轉移陽性、宮頸浸潤深度≥2/3和ACTN4高表達均是影響OS的獨立危險因素(P<0.05)。見表2、3。

表2 OS的單因素Cox比例風險回歸模型分析結果

表3 OS的多因素Cox比例風險回歸模型分析結果

3 討 論

臨床研究發(fā)現(xiàn),宮頸癌是一種發(fā)病機制相對復雜,并且具有高度異質性的惡性腫瘤[13-14]。遺傳和環(huán)境因素在宮頸癌的發(fā)展中起著重要作用。多個重要基因或蛋白的異常表達逐漸被發(fā)現(xiàn)和確定,其中ACTN4高表達可能與宮頸癌的發(fā)生和臨床預后相關[15-16]。有研究顯示,宮頸癌組血清ACTN4水平明顯高于CIN組和對照組(P<0.05),CIN組和對照組比較差異不明顯(P>0.05)[15-16],提示血清ACTN4異常高表達參與了宮頸癌的發(fā)生。CIN被認為是宮頸癌的癌前病變,但本研究結果顯示CIN組與對照組ACTN4表達差異不明顯(P>0.05),提示ACTN4可能僅在惡性宮頸組織內大量表達,側面反映了腫瘤細胞的惡性程度,也為ACTN4作為宮頸癌早期診斷提供了重要理論依據(jù)。本研究進一步采用ROC曲線分析,結果顯示血清ACTN4診斷宮頸癌的AUC為0.856(P<0.001),靈敏度和特異度分別為85.6%和77.9%;宮頸癌患者FIGO分期≥Ⅱb期比Ⅰa～<Ⅱb期、淋巴結轉移陽性比陰性、宮頸浸潤深度≥2/3比<2/3的ACTN4高表達率高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示ACTN4高表達與宮頸癌的多個惡性參數(shù)如FIGO分期、淋巴結轉移和宮頸浸潤深度有關;Kaplan-Meier生存曲線結果顯示,ACTN4高表達患者的累積生存率明顯低于ACTN4低表達患者(P<0.05),提示ACTN4高表達的宮頸癌患者預后較差;Cox回歸分析結果顯示,FIGO分期≥Ⅱb期、淋巴結轉移陽性、宮頸浸潤深度≥2/3和ACTN4高表達均是影響OS的獨立危險因素(P<0.05),再次證實了ACTN4高表達是宮頸癌發(fā)生和發(fā)展的重要分子基礎。

ACTN4的分子結構特點是N端有一個actin結合域,單體可以通過反向結合形成同型二聚體,形成啞鈴狀結構;功能上主要作為actin的結合蛋白,與增強細胞活力和腫瘤侵襲轉移密切相關[17-18]。ACTN4高表達的癌細胞具有早期轉移的潛能,因為ACTN4蛋白可以刺激肌動蛋白細胞骨架的動態(tài)重建[19-20]。研究表明,ACTN4在乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和肺癌中表達明顯升高[21-22],與肺癌、胃癌的不良預后顯著相關[23]。血清ACTN4水平已被認為是診斷多種惡性腫瘤的重要生物標志物。

綜上所述,宮頸癌患者血清ACTN4高表達可能參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展過程,有望成為疾病診斷和判斷疾病預后的重要生物標志物。本研究的局限性包括:樣本量較小、回顧性分析、單中心結果,下一步可以通過多中心、大樣本的臨床前瞻性試驗進行驗證;本研究僅觀察了入院治療前血清ACTN4表達與宮頸癌患者的關系,接受臨床治療后血清ACTN4表達是否發(fā)生動態(tài)變化還需要進一步檢測;血清與腫瘤組織中ACTN4的表達需要建立一致性分析,進而提高血清檢測的準確度。