蕪菁酸性多糖結(jié)構(gòu)及對(duì)脂多糖誘導(dǎo)肺損傷小鼠的保護(hù)作用

卡地爾亞·庫(kù)爾班，阿吉然姆·阿布拉，陳卓爾，米合熱尼沙·阿木熱江，海力茜·陶爾大洪,*，楊 飛,2,*

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆維吾爾自治區(qū)分析測(cè)試研究院，新疆 烏魯木齊 830011）

急性肺損傷（acute lung injury，ALI）是一種由COVID-19[1]、膿毒血癥[2]、PM2.5[3]、輸血[4]、肺癌放化療[5]等多種因素導(dǎo)致的高發(fā)病率、高病死率危重病[6]。其特征為炎癥介質(zhì)的大量釋放導(dǎo)致中性粒細(xì)胞聚集并過(guò)度激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，形成“細(xì)胞因子風(fēng)暴”，最終導(dǎo)致肺組織嚴(yán)重?fù)p傷甚至引發(fā)多個(gè)器官的損傷及衰竭[7]。

近年來(lái)，核轉(zhuǎn)錄因子-κB/NOD樣受體3（nuclear factor kappa B/NOD-like receptor 3，NF-κB/NLRP3）信號(hào)通路在炎癥相關(guān)疾病中的作用機(jī)制成為研究熱點(diǎn)，此通路的激活或抑制可調(diào)控肺損傷的發(fā)生過(guò)程[8]。NLRP3炎性小體的啟動(dòng)過(guò)程由模式識(shí)別受體信號(hào)通路觸發(fā)，例如Toll樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）或腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）信號(hào)通路激活，隨后通過(guò)NF-κB依賴通路介導(dǎo)NLRP3、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-18的轉(zhuǎn)錄激活，促進(jìn)炎癥和損傷的發(fā)生[9]。

蕪菁（Brassica rapaL.）為新疆、西藏等高海拔地區(qū)普遍種植的一種藥食同源植物[10]。蕪菁為十字花科蕓薹屬草本植物[11]，肉質(zhì)塊根為其主要食用與藥用部位[12-13]。《本草綱目》記載“蕪菁，味辛、苦、平，無(wú)毒。塞北、河西種者。能下能利小便，明目解毒，其效甚偉”[14]。蕪菁含有多糖[15]、蛋白質(zhì)[16]、多酚[17]、揮發(fā)油[18]等多種活性成分。研究發(fā)現(xiàn)蕪菁多糖具有免疫調(diào)節(jié)[19]、抗衰老[20]、抗氧化[21]等多種生理活性，但缺乏其干預(yù)呼吸系統(tǒng)疾病、炎癥性疾病相關(guān)報(bào)道。本研究旨在探討蕪菁酸性多糖（Brassica rapaL.acidic polysaccharide-1，BRAP-1）的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)和組成，及其對(duì)脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的急性肺損傷的保護(hù)作用和相關(guān)機(jī)制，以期為蕪菁多糖藥理活性研究及作為肺損傷保健食品、治療藥物提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

健康SPF級(jí)BALB/c小鼠，雄性，4～6 周齡（體質(zhì)量（20±2）g），購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，使用許可證號(hào)：SYXK（新）2018-0003；飼養(yǎng)環(huán)境：溫度為20～25 ℃，相對(duì)濕度為40%～60%，12 h光照12 h黑暗，墊料、飲用水經(jīng)高壓滅菌處理，自由進(jìn)食、定時(shí)更換墊料。

蕪菁采收于新疆柯坪縣，經(jīng)北京大學(xué)藥學(xué)院張英濤副教授鑒定為十字花科蕓薹屬植物蕪菁的干燥塊莖。

LPS 美國(guó)Sigma公司；小鼠TNF-α、IL-6、IL-10、干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒 上海江萊生物科技有限公司；Prime Script RT reagent Kit with gDNA Eraser逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、TB Green Premix ExTaqII擴(kuò)增試劑盒 日本TAKARA公司；BCA蛋白質(zhì)量濃度測(cè)定試劑盒 美國(guó)Thermo Fisher公司。

1.2 儀器與設(shè)備

5424R離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司；F50型酶標(biāo)儀瑞士Tecan公司；Eclipse E100顯微鏡 日本Nikon公司；7500實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative realtime polymerase chain reaction，qPCR）儀 美國(guó)Applied Biosystems公司；傅里葉變換紅外光譜（Fourier transform infrared spectroscopy，F(xiàn)T-IR）儀 美國(guó)熱電公司；1200高效凝膠滲透色譜系統(tǒng)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）儀 美國(guó)Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 BRAP-1制備

根據(jù)課題組前期研究方法，通過(guò)水提醇沉法獲得蕪菁總多糖，再經(jīng)DEAE-650M陰離子交換柱、Sepharose 6B瓊脂糖凝膠柱、Sephacryl S-300葡聚糖凝膠色譜柱分離純化后得到分子質(zhì)量均一、高純度蕪菁酸性均一多糖BRAP-1[22]。

1.3.2 BRAP-1化學(xué)組成分析

采用苯酚硫酸法測(cè)定總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝0.000 8x+0.005 0（R2＝0.999 3）；采用間羥基聯(lián)苯法測(cè)定樣品糖醛酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝0.000 8x+0.023 0（R2＝0.999 5）；考馬斯亮藍(lán)蛋白分析法測(cè)定蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝0.001 0x+0.169 3（R2＝0.998 6）[22]。

1.3.3 BRAP-1表觀分子質(zhì)量測(cè)定

配制不同分子質(zhì)量（1、5、1 2、5 0、8 0、150、270、410、670、2 000 kDa）的Dextran T標(biāo)準(zhǔn)品溶液及BRAP-1多糖溶液，進(jìn)行高效凝膠滲透色譜分析。檢測(cè)參數(shù)：進(jìn)樣量10 μL，PL aquagel-OH MIXED-H色譜柱（7.5 mm×300 mm，8 μm），示差折光檢測(cè)器，流動(dòng)相為0.1 mol/L硝酸鈉溶液，柱溫35 ℃，流速0.6 mL/min。以標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間為橫坐標(biāo)，分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程y＝－0.652x+13.330（R2＝0.998 2），將BRAP-1保留時(shí)間代入方程計(jì)算表觀分子質(zhì)量。

1.3.4 BRAP-1的FT-IR分析

溴化鉀粉末與冷凍干燥的BRAP-1粉末以質(zhì)量比1∶100混合，研磨后壓片，進(jìn)行FT-IR分析。掃描范圍4 000～400 cm－1。

1.3.5 BRAP-1單糖組成分析

以肌醇為溶劑配制7 種單糖混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1 μg/μL）和BRAP-1多糖溶液（0.2 μg/μL）。三氟乙酸水解2 h，N2吹干溶劑，甲醇洗滌3 次后利用醋酸酐和1-甲基咪唑進(jìn)行乙酰化處理，收集備用。GC-MS檢測(cè)條件：HP-5MS色譜柱（30.0 m×0.25 mm，0.25 μm），載氣He，柱升溫條件：160 ℃保持1 min，2 ℃/min升溫至190 ℃，再以0.4 ℃/min升溫至280 ℃，保持5 min，檢測(cè)器溫度280 ℃。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間確定樣品單糖組成，通過(guò)樣品單糖峰的峰面積之比計(jì)算單糖物質(zhì)的量比。

1.3.6 動(dòng)物分組及給藥

將40 只BALB/c小鼠隨機(jī)分成5 組，每組8 只，分別為正常組，模型組，BRAP-1低、中、高劑量組。各組給藥劑量根據(jù)小鼠體質(zhì)量計(jì)算。實(shí)驗(yàn)連續(xù)給藥10 d，期間正常組、模型組灌胃0.5 mL/d生理鹽水。BRAP-1低、中、高劑量組分別灌胃50、100、200 mg/（kgmb·d）的BRAP-1。末次給藥2 h后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%水合氯醛麻醉小鼠，正常組氣管滴注無(wú)菌磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS），模型組及BRAP-1給藥組氣管滴注LPS（5 mg/kgmb）。模型建立24 h后，小鼠眼眶采集血液，立即收集臟器，稱質(zhì)量后于－80 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.7 肺濕質(zhì)量/干質(zhì)量比值測(cè)定

1.3.8 肺泡灌洗液總細(xì)胞數(shù)、蛋白質(zhì)量濃度測(cè)定

取完整的肺組織，手術(shù)線結(jié)扎左肺，將留置針置入氣管中用棉線結(jié)扎固定，進(jìn)行肺泡灌洗。取0.5 mL冰上預(yù)冷無(wú)菌PBS沿總支氣管流入肺，此操作過(guò)程中可觀察到小鼠右肺部變大，輕輕按揉5 次并抽回，重復(fù)3 次。3 000×g離心15 min后收集上清液，采用BCA法檢測(cè)小鼠肺泡灌洗液中總蛋白質(zhì)量濃度，操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，沉淀用PBS重懸后用顯微鏡進(jìn)行總細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.3.9 肺組織病理學(xué)觀察

利用質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%甲醛固定液固定肺組織，經(jīng)脫水、透明、石蠟包埋后切片，厚度約5 μm，再經(jīng)烤片、脫蠟、透明、脫水，進(jìn)行蘇木精-伊紅（hematoxylineosin，HE）染色，中性樹(shù)膠封片，晾干，光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織病理學(xué)變化。

1.3.10 血清細(xì)胞因子水平測(cè)定

采集的血液樣品置于4 ℃保存2 h，1 000×g離心20 min后取上清液，分裝，放置于－80 ℃冰箱，防止重復(fù)凍融。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定血清TNF-α、IL-6、IL-10、IFN-γ質(zhì)量濃度。

1.3.11 NF-κB/NLRP3通路關(guān)鍵基因表達(dá)水平測(cè)定

所謂的解釋，就是說(shuō)明某種現(xiàn)象何以如此。語(yǔ)用學(xué)的研究目的之一就是解釋語(yǔ)言形式何以如此。在Givón(1979:3-4)認(rèn)為語(yǔ)言學(xué)的解釋需要涉及下面一個(gè)或多個(gè)“自然解釋性參數(shù)”：命題內(nèi)容、話語(yǔ)語(yǔ)用學(xué)、語(yǔ)言處理器、認(rèn)知結(jié)構(gòu)、世界觀語(yǔ)用學(xué)、個(gè)體發(fā)生學(xué)的發(fā)展、歷時(shí)演變和種系發(fā)生學(xué)的進(jìn)化。這些參數(shù)就是我們稱之為外部解釋的參數(shù)。語(yǔ)體與命題內(nèi)容、話語(yǔ)語(yǔ)用學(xué)、認(rèn)知結(jié)構(gòu)等參數(shù)密切相關(guān)，那么語(yǔ)體研究能為語(yǔ)言學(xué)提供什么樣的解釋？這是本文試圖回答的問(wèn)題。

取肺組織適量，放入裝有TRIzol的預(yù)冷研磨管進(jìn)行組織研磨，提取總RNA后測(cè)定濃度和純度。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。按表1設(shè)計(jì)PCR引物。實(shí)時(shí)熒光定量PCR程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s；60 ℃退火/延伸34 s，40 個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參基因，用2－ΔΔCt法計(jì)算腫瘤壞死因子受體（tumor necrosis factor receptor，TNFR）、TLR4、p65、NLRP3、IL-1β相對(duì)表達(dá)量。

表1 PCR引物序列Table 1 Primer sequences used for PCR

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 26軟件進(jìn)行分析，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間差異采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 BRAP-1理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)和組成分析

2.1.1 BRAP-1化學(xué)組成和表觀分子質(zhì)量

根據(jù)總糖、糖醛酸、蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得到BRAP-1總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為56.7%，糖醛酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13.1%，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8.9%。

如圖1所示，BRAP-1高效凝膠滲透色譜圖呈對(duì)稱單峰，說(shuō)明其分子質(zhì)量均一，將BRAP-1保留時(shí)間（14.64 min）代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程得到分子質(zhì)量為6 080 Da。

圖1 BRAP-1高效凝膠滲透色譜圖Fig.1 High performance gel permeation chromatogram of BRAP-1

2.1.2 BRAP-1的FT-IR分析結(jié)果

BRAP-1樣品在3 376 cm－1處的較寬吸收峰是糖殘基—OH的伸縮振動(dòng)峰，2 930 cm－1處為C—H伸縮振動(dòng)峰（圖2），是多糖的特征吸收峰[23]。1 628 cm－1處為糖醛酸羧基伸縮振動(dòng)峰，證明BRAP-1是含有糖醛酸結(jié)構(gòu)的酸性多糖[24]。位于1 403 cm－1的吸收峰為多糖分子中多個(gè)C—H彎曲振動(dòng)吸收峰[25]。1 031 cm－1處的吸收峰為吡喃環(huán)C—O伸縮振動(dòng)峰[26]，結(jié)合900～800 cm－1處吸收峰可知樣品含β-吡喃糖[27]。綜上所述，BRAP-1具有多糖結(jié)構(gòu)特征，并含有β-吡喃糖、糖醛酸結(jié)構(gòu)，為典型的酸性多糖。

圖2 BRAP-1 FT-IR譜圖Fig.2 FT-IR spectrum of BRAP-1

2.1.3 BRAP-1單糖組成

經(jīng)酸水解和乙酰化后BRAP-1單糖組成的GC-MS圖如圖3所示。根據(jù)對(duì)照品峰及樣品峰保留時(shí)間可知，BRAP-1主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖組成，根據(jù)3 種單糖峰面積得到BRAP-1單糖物質(zhì)的量比為n（葡萄糖）∶n（半乳糖）∶n（阿拉伯糖）＝4.53∶2.20∶2.07。

圖3 BRAP-1單糖組成GC-MS譜圖Fig.3 GC-MS chromatograms showing the monosaccharide composition of BRAP-1

2.2 BRAP-1對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠肺濕質(zhì)量/干質(zhì)量比值的影響

如圖4所示，與正常組相比，模型組小鼠肺濕質(zhì)量/干質(zhì)量比值高度顯著升高（P＜0.001），表明LPS氣管滴注后誘導(dǎo)了小鼠肺組織損傷，引起組織水腫。與模型組相比，BRAP-1低、中、高劑量組小鼠肺濕質(zhì)量/干質(zhì)量比值呈劑量依賴性降低（P＜0.001），說(shuō)明BRAP-1可緩解小鼠肺組織水腫癥狀。

圖4 BRAP-1對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠肺濕質(zhì)量/干質(zhì)量比值的影響Fig.4 Effect of BRAP-1 on the wet/dry mass ratio of lung in LPSinduced ALI mice

2.3 BRAP-1對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠肺泡灌洗液蛋白質(zhì)量濃度、總細(xì)胞數(shù)的影響

如圖5 所示，與正常組相比，模型組小鼠肺泡灌洗液中蛋白質(zhì)量濃度、總細(xì)胞數(shù)高度顯著升高（P＜0.001），提示LPS誘導(dǎo)使小鼠肺組織細(xì)胞膜通透性改變、組織蛋白滲漏、大量炎性細(xì)胞滲出并彌散于損傷的肺組織間隙。與模型組相比，BRAP-1低、中、高劑量組肺泡灌洗液蛋白質(zhì)量濃度呈劑量依賴性降低（P＜0.001）。雖然BRAP-1組肺泡灌洗液總細(xì)胞數(shù)也呈劑量依賴性減少，但與模型組相比，僅中、高劑量組有顯著性差異（P＜0.01、P＜0.001），綜上，BRAP-1對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠肺組織蛋白滲漏、通透性改變、炎性滲出程度有一定的緩解作用。

圖5 BRAP-1對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠肺泡灌洗液蛋白質(zhì)量濃度（A）、總細(xì)胞數(shù)（B）的影響Fig.5 Effect of BRAP-1 on the protein concentration (A) and total cell count (B) of alveolar lavage fluid in LPS-induced ALI mice

2.4 BRAP-1對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠肺組織損傷病理變化的影響

如圖6所示，正常組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常、形態(tài)規(guī)則、肺泡腔清晰，肺泡及間質(zhì)無(wú)明顯充血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組小鼠肺組織出現(xiàn)結(jié)構(gòu)紊亂、形態(tài)不規(guī)則、肺泡間隔增厚，肺泡及間質(zhì)明顯充血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等肺損傷特征，提示肺損傷模型建立成功。與模型組相比，BRAP-1各劑量組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)形態(tài)較為規(guī)則，肺泡間隔增厚、肺泡及間質(zhì)充血等情況減輕，肺泡腔內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，肺損傷明顯改善。

圖6 小鼠肺組織HE染色圖Fig.6 Images of HE stained lung tissue sections from mice

2.5 BRAP-1對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠免疫因子水平的影響

如圖7 所示，與正常組相比，模型組小鼠血清TNF-α、IL-6、IL-10、IFN-γ質(zhì)量濃度高度顯著升高（P＜0.001），提示LPS誘導(dǎo)肺損傷可過(guò)度激活免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致大量細(xì)胞因子釋放并聚集于小鼠肺部，進(jìn)一步加重肺損傷。低、中、高劑量BRAP-1可劑量依賴性降低小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10、IFN-γ的含量，與模型組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05、P＜0.001）。根據(jù)小鼠血清免疫因子水平變化情況可知，BRAP-1對(duì)過(guò)度激活的免疫系統(tǒng)有明顯的調(diào)節(jié)作用，說(shuō)明其對(duì)小鼠肺損傷的保護(hù)作用是通過(guò)調(diào)節(jié)受損肺組織抗炎-促炎免疫調(diào)節(jié)失衡來(lái)實(shí)現(xiàn)。

圖7 BRAP-1對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠血清TNF-α（A）、IL-6（B）、IL-10（C）、IFN-γ質(zhì)量濃度（D）的影響Fig.7 Effect of BRAP-1 on serum TNF-α (A),IL-6 (B),IL-10 (C) and IFN-γ (D) concentrations in LPS-induced ALI mice

2.6 BRAP-1對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠NF-κB/NLRP3通路關(guān)鍵基因表達(dá)的影響

如圖8所示，與正常組相比，模型組小鼠肺組織中TNFR、TLR4、p65、IL-1β、NLRP3mRNA相對(duì)表達(dá)水平均高度顯著升高（P＜0.001），表明LPS誘導(dǎo)的肺損傷可激活NF-κB/NLRP3通路，導(dǎo)致NLRP3炎性小體的過(guò)度表達(dá)，并進(jìn)一步活化機(jī)體免疫系統(tǒng)，促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放加重肺損傷。與模型組相比，BRAP-1組小鼠肺組織中TNFR、TLR4、p65、IL-1β、NLRP3mRNA相對(duì)表達(dá)水平不同程度降低，提示BRAP-1可通過(guò)下調(diào)NF-κB/NLRP3通路關(guān)鍵基因轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)炎癥因子的產(chǎn)生與釋放。

圖8 BRAP-1對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠肺組織TNFR（A）、TLR4（B）、p65（C）、NLRP3（D）、IL-1β（E）mRNA表達(dá)水平的影響Fig.8 Effect of BRAP-1 on the mRNA expression levels of TNFR (A),TLR4 (B),p65 (C),NLRP3 (D) and IL-1β (E) in the lung tissue of LPS-induced ALI mice

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)BRAP-1化學(xué)組成、分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)及單糖組成進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其總糖、糖醛酸、蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為56.7%、13.1%、8.9%，表觀分子質(zhì)量為6 080 Da，并具有β-吡喃糖、糖醛酸結(jié)構(gòu)，主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖組成，單糖物質(zhì)的量比為4.53∶2.20∶2.07，上述結(jié)果可為其肺損傷保護(hù)作用研究提供基礎(chǔ)支撐。

LPS是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要生物活性成分[28]，長(zhǎng)期以來(lái)被廣泛用于肺損傷動(dòng)物模型的誘導(dǎo)，病理模型癥狀與臨床癥狀吻合度較高。因此，本實(shí)驗(yàn)采用LPS氣管滴注法建立小鼠ALI模型。已有大量研究證實(shí)肺濕質(zhì)量/干質(zhì)量比值、肺泡灌洗液蛋白質(zhì)量濃度、總細(xì)胞數(shù)及組織切片是肺損傷重要病理指標(biāo)，其變化可提示肺組織水腫、細(xì)胞膜通透性、蛋白滲漏、炎性滲出及組織病變程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與肺損傷模型組相比，BRAP-1給藥組小鼠肺濕質(zhì)量/干質(zhì)量比值、肺泡灌洗液蛋白質(zhì)量濃度、總細(xì)胞數(shù)均高度顯著降低（P＜0.001），HE染色切片中肺組織形態(tài)均有所改善，肺損傷程度明顯減弱，提示BRAP-1對(duì)LPS引起的肺損傷具有保護(hù)作用。

研究發(fā)現(xiàn)致病物質(zhì)（如LPS、COVID-19）感染肺部時(shí)導(dǎo)致機(jī)體TNF、IL、IFN等細(xì)胞因子和趨化因子等炎癥介質(zhì)大量釋放，且釋放水平與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)[29-30]。機(jī)體產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)是一種防御性機(jī)制，釋放細(xì)胞因子以建立正常的免疫反應(yīng)，然而過(guò)多細(xì)胞因子釋放導(dǎo)致的“細(xì)胞因子風(fēng)暴”會(huì)急劇加重感染癥狀，甚至導(dǎo)致死亡[31]。本研究發(fā)現(xiàn)，BRAP-1能明顯抑制肺損傷小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10、IFN-γ質(zhì)量濃度，說(shuō)明BRAP-1能夠調(diào)節(jié)受損肺組織抗炎-促炎免疫平衡、改善免疫因子過(guò)度釋放狀態(tài)，對(duì)小鼠的炎癥反應(yīng)有顯著調(diào)節(jié)作用。

進(jìn)一步研究作用機(jī)制發(fā)現(xiàn)，BRAP-1對(duì)炎癥相關(guān)疾病中的關(guān)鍵通路NF-κB/NLRP3具有調(diào)節(jié)作用。BRAP-1給藥組小鼠肺組織中，與啟動(dòng)此通路相關(guān)的兩種關(guān)鍵受體——TLR4和TNFR的mRNA表達(dá)量降低。與此同時(shí)，NLRP3炎性小體及其上游NF-κB p65和下游關(guān)鍵細(xì)胞因子IL-1β的基因mRNA表達(dá)量均顯著降低。提示BRAP-1可調(diào)控NF-κB/NLRP3通路相關(guān)因子轉(zhuǎn)錄水平。

綜上所述，BRAP-1對(duì)小鼠肺損傷有保護(hù)作用。其機(jī)制為，一方面調(diào)節(jié)受損肺組織抗炎-促炎免疫調(diào)節(jié)平衡，從而減輕肺組織損傷；另一方面，可能通過(guò)下調(diào)NF-κB/NLRP3通路相關(guān)因子轉(zhuǎn)錄水平抑制炎癥因子的產(chǎn)生與釋放。然而，BRAP-1三維空間結(jié)構(gòu)及其對(duì)小鼠肺損傷保護(hù)作用的分子結(jié)構(gòu)關(guān)聯(lián)還需進(jìn)一步的研究與探討。