結腸癌組織中THBS2、SLC11A1基因表達及與TANs浸潤的關系

侯建彬　李新宇　陳琦瑋　柳燕　賈靜

【摘要】? 目的? ? 分析結腸癌組織中血小板反應蛋白2（THBS2）、溶質載體家族11成員1（SLC11A1）表達及與腫瘤相關性中性粒細胞（TANs）浸潤的關系。方法? ? 選取2020年1月—2022年4月在泉州市第一醫院進行手術切除的120例結腸癌患者的腫瘤組織及癌旁組織，用免疫組化法檢測結腸癌組織及癌旁組織中THBS2、SLC11A1表達，收集患者臨床病理特征，分析THBS2、SLC11A1表達與結腸癌患者臨床病理特征的關系，分析THBS2、SLC11A1與TANs浸潤密度的相關性。結果? ? THBS2在結腸癌組織中主要表達于細胞質，SLC11A1在結腸癌組織中主要表達于細胞膜中，染色均呈現棕黃色；相較于癌旁正常組織，結腸癌組織中THBS2表達明顯降低，SLC11A1表達明顯升高。結腸癌組織THBS2表達與分化程度、淋巴結轉移、TNM分期、血管浸潤具有明顯相關性（P<0.05）；結腸癌組織SLC11A1表達與淋巴結轉移、腫瘤浸潤深度、病理分型、TNM分期、血管浸潤具有明顯相關性（P<0.05）。結腸癌組織中THBS2表達與TANs浸潤密度呈負相關（r=-0.444，P<0.05），SLC11A1表達與TANs浸潤密度呈正相關（r=0.355，P<0.05）。結論? ? 在結腸癌組織中THBS2、SLC11A1均呈現異常表達，與TANs浸潤相互作用共同促進結腸癌的惡性進程，推測兩指標可作為潛在的結腸癌臨床預后因子。

【關鍵詞】? 結腸癌； THBS2； SLC11A1； TANs浸潤； 相關性

Expression of THBS2， SLC11A1 genes and their relationship with TANs invasion in colon cancer

Hou Jianbin，Li Xinyu， Chen Qiwei et al. The First Hospital of Quanzhou City，Quanzhou，Fujian? ?362000

【Abstract】 Objective? ? To analyze the expression of platelet reactive protein 2（THBS2），solute vector family 11 member 1（SLC11A1）and their relationship with tumor associated neutrophil（THBS）infiltration in colon cancer. Methods? ? The tumor tissues and paracancerous tissues of 120 patients with colon cancer who underwent surgical resection in our hospital from January 2020 to April 2022 were selected.The expression of THBS2 and SLC11A1 in colon cancer tissues and paracancerous tissues was detected by immunohistochemical method.The clinicopathological features of patients were collected，and the relationship between the expression of THBS2 and SLC11A1 and the clinicopathological features of colon cancer patients was analyzed；Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between THBS2，SLC11A1 and THBS infiltration density. Results? ? THBS2 was mainly expressed in the cytoplasm and SLC11A1 was mainly expressed in the cell membrane in colon cancer tissues.The staining of THBS2 and SLC11A1 was brownish yellow；Compared with normal adjacent tissues，THBS2 expression was significantly decreased and SLC11A1 expression was significantly increased in colon cancer tissues.THBS2 expression was significantly correlated with differentiation，lymph node metastasis，TNM stage and vascular invasion（P<0.05）；The expression of SLC11A1 in colon cancer was significantly correlated with lymph node metastasis，depth of tumor invasion，pathological classification，TNM stage and vascular invasion（P<0.05）.There was a negative correlation between THBS2 expression and THBS invasion density in colon cancer（r=-0.444，P<0.05），and a positive correlation between SLC11A1 expression and tans invasion density（r=0.355，P<0.05）.Conclusion? ? THBS2 and SLC11A1 are abnormally expressed in colon cancer tissue，and interact with THBS infiltration to promote the malignant process of colon cancer.It is speculated that the two indicators can be used as potential clinical prognostic factors of colon cancer.

【Key Words】? Colon cancer； THBS2； SLC11A1； THBS infiltration； Correlation

中圖分類號：R735.3+5? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1672-1721（2023）19-0016-04

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.19.006

結腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，近年來，隨著人們生活方式的改變，我國結腸癌的發病率和病死率明顯升高，早發現、早診斷及綜合治療為提高結腸癌患者生存率的關鍵所在。尋找新的方法早期預測、診斷結腸癌已成為臨床醫師關注的重點。腫瘤復發和化療藥物耐藥在結腸癌晚期非常常見，轉移和復發是結腸癌患者的主要死因，與腫瘤相關性中性粒細胞（tumor associated neutrophils，TANs）浸潤密切相關[1]。相關資料顯示[2]，TANs與結腸癌的惡性生物學行為及不良預后呈明顯正相關。血小板反應蛋白2（platelet reactive protein 2，THBS2）是一類細胞膜表面鈣結合糖蛋白，近年來相關資料顯示[3]，其在多種腫瘤組織中呈現異常表達，其表達下降與腫瘤新生血管的形成有關，被認為是一種“抑癌基因”。溶質載體家族11成員1（solute carrier family 11 member 1，SLC11A1）為一種促炎性因子，與多種炎癥性疾病的發生密切相關。已有研究證實SLCILAL與感染、自身免疫和癌癥有關，其轉錄抑制可導致細胞增殖和存活[4]。本研究旨在分析結腸癌組織中THBS2、SLC11A1基因表達及與TANs浸潤的關系，報道如下。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 一般資料? ? 選取2020年1月—2022年4月在泉州市第一醫院進行手術切除的120例結腸癌患者的腫瘤組織及癌旁組織，其中男47例，女73例，年齡28～80歲，平均年齡（62.33±8.15）歲。根據免疫組化染色結果分為THBS2陰性組（n=98例）、THBS2陽性組（n=22例）及SLC11A1陰性組（n=31例）、SLC11A1陽性組（n=89例）。

入組標準：（1）研究對象符合結腸癌的診斷標準[5]，且經病理學組織檢查確診；（2）患者術前未接受任何治療；（3）有完整的臨床資料和隨訪記錄；（4）研究經過醫學倫理委員會同意后進行。

排除標準：（1）合并其他惡性腫瘤；（2）患者重要器官存在嚴重功能障礙；（3）嚴重感染性疾病者；（4）對研究不能配合，依從性較差；（5）伴有精神疾病障礙。

1.2? ? 免疫組化法? ? 用免疫組化法檢測結腸癌組織及癌旁組織中THBS2、SLC11A1表達。結腸癌組織及癌旁組織經石蠟包埋后以4 μm厚度連續切片，65 ℃烘烤2 h，然后進行脫蠟；將EDTA緩沖液滴加至修復盒中，加熱后放入切片，進行組織抗原修復；自然冷卻至室溫，PBS緩沖液沖洗3遍，各3 min；3%H₂O₂處理阻斷內源性過氧化酶活性；取用10%鼠抗人THBS2、SLC11A1抗體，在冰箱中4 ℃孵育；將蓋子打開的濕盒放在37 ℃溫箱復溫30 min；在PBS緩沖液洗滌3次，每次5 min，甩掉表面液體；在每個切片中加入75 μL酶標記的山羊抗鼠/兔IgG聚合物，用抗體覆蓋組織，37 ℃孵育30 min；用PBS沖洗切片3次，每次5 min；在每個切片中滴加20 μL 0.02%DAB溶液進行顯色，純水終止顯色；蘇木精復染3 min；1%鹽酸酒精分化，切片置于無菌水中5 min，使其恢復藍色；切片在梯度酒精中依次脫水5 min；二甲苯透明；切片采用中性樹脂密封。

結果判定標準：根據染色強度評分，棕褐色3分、棕黃色2分、淡黃色1分、無色為0分。根據染色細胞占百分比評分，>75%為3分，51%～75%為2分，11%～50%為1分，≤10%為0分。將染色強度評分和染色范圍評分相乘計算結果，0～2分為低表達，3分以上為高表達。

1.3? ? 臨床病理資料收集? ? 收集患者臨床病理資料，包括年齡（≤55歲、>55歲）、性別（男、女）、腫瘤大小（≤5 cm、>5 cm）、分化程度（低分化、中+高分化）、淋巴結轉移（是、否）、血管浸潤（是、否）、腫瘤浸潤深度（T1+T2、T3+T4）、TNM分期（根據國際抗癌協會TNM分期方案[6]進行分期）及病理分型（腫塊型、潰瘍型、浸潤型）。

1.4? ? 統計學方法? ? 使用SPSS 21.0統計學軟件進行數據分析，計數資料以百分比表示，采用χ²檢驗，相關性檢驗采用Pearson相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2? ? 結果

2.1? ? 結腸癌組織中THBS2、SLC11A1表達情況? ? THBS2在結腸癌組織中主要表達于細胞質，SLC11A1在結腸癌組織中主要表達于細胞膜中，染色均呈現棕黃色；相較于癌旁正常組織，結腸癌組織中THBS2表達明顯降低，SLC11A1表達明顯升高（P<0.05），見圖1。

2.2? ? 結腸癌組織中THBS2、SLC11A1表達與臨床病理特征的關系? ? 結腸癌組織THBS2表達與分化程度、淋巴結轉移、TNM分期、血管浸潤具有明顯相關性（P<0.05）；結腸癌組織SLC11A1表達與淋巴結轉移、腫瘤浸潤深度、病理分型、TNM分期、血管浸潤具有明顯相關性（P<0.05），見表1。

2.3? ? 結腸癌組織THBS2、SLC11A1表達與TANs浸潤的關系? ? 結腸癌組織中THBS2表達與TANs浸潤密度呈負相關（r=-0.444，P<0.05），SLC11A1表達與TANs浸潤密度呈正相關（r=0.355，P<0.05），見圖2。

3? ? 討論

結腸癌在全球惡性腫瘤死亡率中排名第三，盡管在結腸癌的診斷和治療方面取得了顯著進展，但轉移性結腸癌的5年總生存率低于15%，早期診斷可提高5年生存率。限制結腸癌患者生存率和治愈率的主要因素是缺乏有效的轉移瘤治療策略，腫瘤及其與周圍組織的浸潤和轉移是患者死亡的主要原因。經過根治性手術及術后輔助化療后患者病死率明顯降低，但仍有60%以上出現復發或轉移。靶向藥物的開發提高了晚期結腸癌患者的生存率和治愈率，尋找新方法早期預測、診斷和治療已成為延長結腸癌患者生存期的主要研究方向[7]。

THBS2是基質細胞Ca2+結合糖蛋白家族成員之一，與生長因子、細胞受體和細胞外基質相互作用，被認為是一種強大的血管生成因子。其可通過與細胞表面結合發揮生物學功能，包括血管生成、細胞黏附、細胞凋亡和細胞運動等。近年來，有研究顯示，THBS2在腫瘤中發揮重要作用。Wang等研究發現，THBS2在胃癌細胞中的表達與患者的生存呈時間依賴性相關，THBS2低表達可能會加速胃癌進展，導致預后不良，THBS2水平越低，胃癌的分化程度越差[8]。Qu報道[9]，THBS2在結直腸腺瘤和結直腸癌正常鄰近組織中均表現出低甲基化。Xu等[10]發現結腸癌患者血漿中THBS2表達高于非癌癥對照。Gimotty PA等[11]確定THBS2可用于開發高特異性的生物標志物，用于檢測癌癥侵襲和預測對新輔助治療的反應，以及針對相應生物學機制的潛在多癌轉移抑制治療。本研究結果顯示，在結腸癌組織中THBS2表達明顯低于癌旁組織，且與患者分化程度、淋巴結轉移、TNM分期、血管浸潤明顯相關，與TANs浸潤密度呈負相關。由此可見，在結腸癌中THBS2呈現低表達時腫瘤轉移及浸潤惡性行為能力增強，可能促進腫瘤惡性進展。

SLC11A1在巨噬細胞的溶酶體區室和中性粒細胞的三級顆粒中表達，在對細胞內微生物感染的先天抵抗中起關鍵作用。SLC11A2是鐵代謝的關鍵參與者，尤其是在近端十二指腸、未成熟的紅細胞、腦、胎盤和腎臟中普遍表達。SLC11A2對巨噬細胞功能產生多效性影響，包括增強腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-1β、誘導型一氧化氮合酶表達，對于自身免疫和癌癥的誘導和維持都很重要。相關資料顯示[12]，SLC11A1 的轉錄抑制導致細胞增殖和存活，如果不加以控制，可能導致癌癥和自身免疫。本研究結果顯示，結腸癌組織中SLC11A1表達明顯高于癌旁組織，與淋巴結轉移、腫瘤浸潤深度、病理分型、TNM分期、血管浸潤明顯相關，與TANs浸潤密度呈正相關。由此可見，SLC11A1在結腸癌表達上調可調控腫瘤的轉移和浸潤等惡性行為，有望成為結腸癌預后標志物和佐劑靶點，為改善患者預后奠定基礎。

綜上所述，在結腸癌組織中THBS2、SLC11A1均呈現異常表達，與TANs浸潤相互作用共同促進結腸癌的惡性進程，推測兩指標可作為潛在的結腸癌臨床預后因子。

參考文獻

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（收稿日期：2023-04-12）