熒光定量聚合酶鏈反應法與免疫學化學發光法檢測乙型肝炎病毒的比較

王文萍

【摘要】? 目的? ? 比較熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCR）法與免疫學化學發光法（CLEIA）檢測乙型肝炎病毒（HBV）的價值。方法? ? 選擇2020年8月—2022年6月上饒市人民醫院檢驗科341份應用FQ-PCR法測定HBV-DNA陽性血清標本作為研究對象，所有血清標本均采用FQ-PCR法及CLEIA檢測。分析HBV-DNA陽性標本中乙肝5項[乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝核心抗體（HBcAb）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝e抗原（HBeAg）]陽性檢出率在不同血清模式下HBV-DNA載量分布情況，對比HBV-DNA載量于HBeAg陽性與HBeAb陽性中的分布情況。結果? ? HBsAg+、HBcAb+、HBeAg+及HBsAg+、HBcAb+、HBeAb+陽性檢出率最高，分別為38.42%、43.70%；HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAg+陽性檢出率為4.99%，HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAb+陽性檢出率為4.69%。另外，HBcAb陽性標本共331份，約占所有HBV-DNA陽性標本數的97.07%。大三陽組（131例）患者HBV-DNA平均載量為 5.65×108 U/mL，其中低載量占全組比例為17.56%（23/131）、中載量占全組比例為17.56%（23/131）、高載量占全組比例為64.89%（85/131）；小三陽組（149例）患者HBV-DNA平均載量為 1.82×106 U/mL，其中低載量占全組比例為81.88%（122/149）、中載量占全組比例為15.44%（23/149）、高載量占全組比例為2.68%（4/149）。HBeAg陽性患者于高載量HBV-DNA中占比為60.67%，HBeAb陽性患者于低載量HBV-DNA中占比為77.71%，差異均有統計學意義（P<0.05）。結論? ? 2種方法聯合檢測在判斷HBV感染中具有較高的應用價值，可為診斷及治療方案制定等提供可靠的參考依據。

【關鍵詞】? 乙型肝炎病毒； 熒光定量聚合酶鏈反應； 免疫學化學發光法； 乙肝5項

中圖分類號：R512.6+2? ? ? ? 文獻標識碼：A

文章編號：1672-1721（2023）22-0118-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.22.039

乙型肝炎（乙肝）現已成為危害公共衛生安全的嚴重疾病之一，與艾滋病及肺結核共同為臨床常見的傳染性疾病。乙肝為乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染所致，盡早明確HBV感染對改善患者預后具有重要作用[1-2]。現階段，臨床在HBV檢測中主要采用免疫學化學發光法（CLEIA）及熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCR）法，其中CLEIA具有較高的特異度及靈敏度，且線性范圍較寬，檢測時自動化程度較高，現已廣泛被應用于HBV感染的檢測，其檢測內容包括HBV及HBV-DNA載量、乙肝病毒所致的抗原及抗體，如乙肝5項分別為乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝核心抗體（HBcAb）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝e抗原（HBeAg）[3-4]。FQ-PCR法因具有較高的準確度、靈敏度及特異度等，在HBV鑒別診斷中受到廣大檢驗人員及患者的青睞，多被用于HBV-DNA檢測[5]。2種方法檢測均具有操作便捷、經濟、靈敏度及特異度均較高等特點。本研究對比了FQ-PCR法與CLEIA檢測HBV的結果，旨在探究其臨床應用價值，報告如下。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 一般資料? ? 選擇2020年8月—2022年6月上饒市人民醫院檢驗科341份應用FQ-PCR法測定HBV-DNA陽性血清標本作為研究對象，血清標本對應患者中，男性189例，女性152例；年齡15～83歲，平均年齡（49.83±3.90）歲；住院患者254例，門診患者87例。納入標準：所有血清樣本均經FQ-PCR法檢測明確HBV-DNA載量≥5.00×102U/mL，并判定為HBV-DNA陽性；血清樣本均得到有效保存，質量均合格；血清樣本來源明確；均應用CLEIA檢測乙肝5項指標。

1.2? ? 方法? ? 采集患者5? mL清晨空腹肘靜脈血，將血液標本放置于離心機內，以3 500? r/min速度離心10? ?min，離心半徑10? ?cm獲得上層血清，隨后將血清置于-20? ?℃環境中保存待檢，所有血清標本均采用FQ-PCR法及CLEIA檢測。

FQ-PCR法檢測：血清樣本中HBV-DNA水平的測定應用安普利公司生產的型號為Anadas? 9850的全自動核酸提純熒光定量PCR分析儀，相關試劑盒由廈門安普利生物工程有限公司提供。

CLEIA檢測：檢測血清中HBsAb、HBsAg、HBcAb、HBeAb、HBeAg水平應用強生公司生產的型號為Maccura i3000全自動免疫分析儀及配套試劑測定，所有操作均嚴格遵循試劑盒要求；同時要求質量控制需每日執行，且每個監測批次中均包括HBV陽性定量參考品與陰性質控品，HBsAb、HBsAg、HBcAb、HBeAb、HBeAg載量為5.00×103 U/mL、5.00×104 U/mL、5.00×105 U/mL、5.00×106 U/mL、5.00×107U/mL，對其行重復檢測，以獲得最佳結果。

1.3? ? 觀察指標? ? （1）分析HBV-DNA陽性標本中乙肝5項陽性檢出率，依據乙肝5項檢測后HBsAb陽性、HBsAg陽性、HBcAb陽性、HBeAb陽性、HBeAg陽性對患者進行分組，計算陽性檢出率。（2）分析不同血清學模式下標本的HBV-DNA載量分布情況，依據HBV-DNA載量不同對所有患者進行分級，包括低載量、中載量及高載量3個等級。（3）對比HBeAg陽性與HBeAb陽性標本HBV-DNA載量分布。

1.4? ? 統計學方法? ? 使用SPSS 22.0統計學軟件進行數據處理，計數資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2? ? 結果

2.1? ? 乙肝5項陽性檢出情況分析? ? HBsAg+、HBcAb+、HBeAg+及HBsAg+、HBcAb+、HBeAb+陽性檢出率最高，分別為38.42%、43.70%；HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAg+與HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAb+陽性檢出率分別為4.99%、4.69%。另外，HBcAb陽性標本共331份，約占所有HBV-DNA陽性標本數的97.07%（331/341），見表1。

2.2? ? HBV-DNA載量分布情況? ? 大三陽組患者（131例）HBV-DNA平均載量為5.65×108 U/mL，其中低載量占全組比例為17.56%（23/131），中載量占全組比例為17.56%（23/131），高載量占全組比例為64.89%（85/131）；小三陽組患者（149例）HBV-DNA平均載量為1.82×106 U/mL，其中低載量占全組比例為81.88%（122/149），中載量占全組比例為15.44%（23/149），高載量占全組比例為2.68%（4/149），見表2。

2.3? ? HBeAg陽性與HBeAb陽性患者HBV-DNA載量分布情況? ? 高載量HBV-DNA占所有HBeAg陽性患者的60.67%（91/150），而低載量HBV-DNA占所有HBeAb陽性患者的77.71%（136/175），差異均有統計學意義（P<0.05），見表3。

3? ? 討論

乙型肝炎現已成為我國常見慢性傳染性疾病之一，隨著病情發展，可引發肝硬化、肝癌等，對患者生活質量及生命健康均可造成嚴重影響。因此，盡早明確診斷對改善患者病情尤為重要。實驗室檢測現已成為輔助診斷乙肝的有效方法，目前臨床多采用定量檢測的方式診斷乙型肝炎，該方法是通過免疫技術及分子技術進行檢測，包括HBV-DNA載量及HBV相關抗原及抗體水平[6-7]。對檢測結果進行判讀有助于及時了解HBV感染情況及免疫情況，為臨床進一步診療提供可靠的參考依據[8]。

FQ-PCR法與CLEIA均為臨床常用的定量檢測方法，因為2種檢測方法原理存在差異，所獲得的檢測結果無法直接進行比較。其中FQ-PCR檢測方法是利用分子水平直接對HBV-DNA的復制情況進行測定，能夠充分反映患者的治療及恢復情況[9]。而CLEIA檢測可有效避免HBV檢測窗口期效應的影響。將2種檢測方法聯合使用，可更好地動態監測HBV感染患者病情轉歸情況，并對患者預后恢復有更加全面的了解[10]。本研究結果顯示，乙肝5項陽性檢出情況以HBsAg+、HBcAb+、HBeAg+及HBsAg+、HBcAb+、HBeAb+陽性檢出率最高，其次為HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAg+與HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAb+，大三陽組患者（131例）HBV-DNA平均載量為5.65×108 U/m，其中低載量占全組比例為17.56%、中載量為17.56%、高載量為64.89%；小三陽組患者（149例）HBV-DNA平均載量為1.82×106 U/mL，其中低載量占全組比例為81.88%、中載量為15.44%、高載量為2.68%，表明血清中HBeAg、HBeAb與HBV-DNA水平存在明顯相關性。分析原因為患者HBV感染情況與其病情轉歸屬于動態過程，FQ-PCR檢測HBV-DNA載量與CLEIA檢測的乙肝5項指標水平在判斷HBV感染嚴重程度中均具有重要作用，因患者間機體免疫功能存在較大差異，造成HBV反應度存在不同[11]。FQ-PCR技術已在乙肝早期診斷及療效判斷中得到應用，但需注意藥物對HBV-DNA檢測結果造成的干擾；而CLEIA檢測乙肝5項具有較高的靈敏度，可有效減少HBV檢測窗口期效應的影響[12]。

綜上所述，FQ-PCR法與CLEIA聯合在HBV檢測中具有較高的應用價值，可更加全面地反映患者病情轉歸情況及預后狀況，為臨床診療提供可靠參考。

參考文獻

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（收稿日期：2023-05-16）