IL-6、IL-10及相關(guān)炎癥指標(biāo)在川崎病冠狀動(dòng)脈損傷中的作用

周玉杰 陳杰 譚超超 曹友德 袁華敏

川崎?。╧awasaki disease，KD）是一種被稱為皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征的自身免疫性疾病，以發(fā)熱、結(jié)膜充血、皮疹及淋巴結(jié)腫大等為主要臨床癥狀，川崎病的心血管損傷程度與疾病發(fā)展程度和預(yù)后影響有關(guān)，冠狀動(dòng)脈病變是KD 常見的并發(fā)癥之一[1]。KD 為出疹疾病，可活化機(jī)體炎癥細(xì)胞，其產(chǎn)生的炎癥因子可侵犯全身的小血管，進(jìn)一步導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈發(fā)生狹窄、瘤變、擴(kuò)張等病變[2]。關(guān)于川崎病的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確，認(rèn)為可能與鏈球菌感染有關(guān)。另外，還有一些研究表明，川崎病的表現(xiàn)與一種動(dòng)物間致病的耶爾森菌中的假結(jié)核型株感染所引起的黏膜皮膚淋巴結(jié)綜合征相似[3-4]。亦有相關(guān)研究表明，KD 合并CALs與機(jī)體的免疫炎癥反應(yīng)及血液高凝狀態(tài)相關(guān)[5]。但是目前尚未找到確切的證據(jù)來證明。本研究擬通過測(cè)定KD 患兒血清中的白介素-6（interleukin-6，IL-6）、白介素-10（interleukin-10，IL-10）以及臨床常見的相關(guān)炎癥指標(biāo)，研究這些炎癥指標(biāo)在川崎病患兒病情進(jìn)展過程中的變化情況及其相互關(guān)系，以確定它們是否可以作為川崎病早期診斷的標(biāo)志物，以及預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈病變發(fā)生的能力。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取湖南省職業(yè)病防治院和湖南省人民醫(yī)院2022 年1—12 月臨床診斷為KD 的40 例患兒作為KD 組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均符合KD 相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。（2）持續(xù)發(fā)熱≥3 d，伴有頸部淋巴結(jié)腫大、皮疹等癥狀。（3）臨床相關(guān)資料齊全。（4）入院前未經(jīng)大劑量丙種球蛋白治療及阿司匹林等相關(guān)治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并腫瘤、感染性等疾病者。（2）伴凝血功能嚴(yán)重障礙者。（3）繼發(fā)性細(xì)菌感染者。（4）伴先天性心臟病患兒。收集KD 患兒住院時(shí)的急性期（病程不超過2 周，未經(jīng)阿司匹林及大劑量丙種球蛋白治療）血清及全血標(biāo)本，另通過隨機(jī)化原則選取湖南省職業(yè)病防治院或湖南省人民醫(yī)院健康體檢中心的年齡相近的40 名正常健康體檢者作為健康對(duì)照組，且健康對(duì)照組需近3 個(gè)月內(nèi)無使用激素、發(fā)生感染和炎癥。KD 組男童15 例，女童25 例；年齡1～9 歲，平均（4.15±0.15）歲；體質(zhì)量9.1～37.2 kg，平均（23.34±1.02）kg；健康對(duì)照組男童20 名，女童20 名；年齡2～11 歲，平均（5.21±0.12）歲；體質(zhì)量8.9～38.2 kg，平均（24.45±2.11）kg。兩組性別、年齡、體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

儀器采用上?？迫A公司的ST-360 型酶標(biāo)儀，試劑采用購(gòu)自上海凡科維公司的ELISA 試劑盒。

1.3 觀察指標(biāo)

收集兩組炎癥指標(biāo)，包括C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、血小板（platelet，PLT）、紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）、降 鈣 素 原（procalcitonin，PCT）。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)血清IL-10、IL-6 濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以 （±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。采用Logistic 回歸分析冠狀動(dòng)脈損傷的危險(xiǎn)因素。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康對(duì)照組和KD 組炎癥指標(biāo)比較

與健康對(duì)照組比較，KD 組急性期PCT、ESR、CRP、PLT 明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組抗炎因子IL-10 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組促炎因子IL-6 比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 健康對(duì)照組和KD 組急性期炎癥指標(biāo)比較（±s）

表1 健康對(duì)照組和KD 組急性期炎癥指標(biāo)比較（±s）

組別 例數(shù) PCT（μg/L） ESR（mm/H） CRP（mg/L） PLT（×109/L） IL-10（pg/mL） IL-6（pg/mL）健康對(duì)照組 40 0.37±0.03 10.33±4.36 8.01±0.92 210.00±106.44 743.46±62.94 28.93±6.20 KD 組 40 1.36±0.12 53.31±27.01 79.90±12.76 503.18±150.32 801.36±90.15 40.19±6.22 t 值 - 2.095 2.607 3.617 -10.067 -3.331 -0.788 P 值 - 0.001 0.031 0.020 0.021 0.006 0.073

2.2 CALs 組與NCALs 組炎癥指標(biāo)比較

KD 組急性期根據(jù)是否出現(xiàn)冠狀動(dòng)脈病變又劃分為CALs 組（n＝9）與非冠狀動(dòng)脈病變（non-coron aryartery lesions，NCALs）組（n＝31）。兩組PCT、ESR、CRP 比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩組PLT 以及抗炎因子IL-10 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組促炎因子IL-6 比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 CALs 組與NCALs 組炎癥指標(biāo)比較（±s）

表2 CALs 組與NCALs 組炎癥指標(biāo)比較（±s）

組別 例數(shù) PCT（μg/L） ESR（mm/H） CRP（mg/L） PLT（×109/L） IL-10（pg/mL） IL-6（pg/mL）CALs 組 9 1.48±0.64 55.29±32.05 89.20±12.43 508.17±163.60 850.15±32.11 41.96±9.92 NCALs 組 31 1.35±0.34 52.57±30.38 68.65±11.07 368.61±117.40 769.95±63.00 36.76±4.54 t 值 - 0.123 0.234 0.958 2.874 5.149 1.527 P 值 - 0.061 0.074 0.065 0.023 0.005 0.071

2.3 Logistic 回歸分析冠狀動(dòng)脈損傷的危險(xiǎn)因素

Logistic 回歸分析顯示，PLT 的OR 值為1.898，患兒PLT 每增加100×109/L，其發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷的風(fēng)險(xiǎn)增加1.898 倍；PLT 是KD 患兒發(fā)生冠狀動(dòng)脈病變的獨(dú)立影響因素。見表3。

表3 冠狀動(dòng)脈損傷危險(xiǎn)因素分析

3 討論

KD 的發(fā)病機(jī)制一直是研究熱點(diǎn)，KD 病因尚未明確。目前主要考慮以下幾種病因：（1）感染因素，現(xiàn)已知KD與多種病原體有關(guān)，這些病原體包括肺炎支原體、細(xì)菌和病毒等。另外，流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，感染也與KD 的發(fā)病有關(guān)[7]。（2）遺傳易感因素，有研究揭示了多個(gè)基因中的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）與KD 以及冠狀動(dòng)脈瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)突顯了遺傳因素在KD 的發(fā)病機(jī)制中的重要地位，并且正在成為研究關(guān)注的熱點(diǎn)。（3）環(huán)境因素，川崎病發(fā)病存在季節(jié)性差異，春夏季節(jié)發(fā)病率較高，冬季發(fā)病率較低[7]。此外，如果兒童長(zhǎng)時(shí)間暴露在陽光下，可提高發(fā)生KD 的風(fēng)險(xiǎn)性。在委內(nèi)瑞拉KD 發(fā)病率最高的地區(qū)是蟲媒病毒感染最嚴(yán)重的地區(qū)。同時(shí)，國(guó)外的相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)，KD 的暴發(fā)與蟲媒病毒感染的季節(jié)性高峰有所重疊，這些病原體可能可以導(dǎo)致KD 的發(fā)生[7]。（4）免疫炎癥因素，目前認(rèn)為，引起KD免疫異?；罨闹饕蛴袃煞N學(xué)說，即細(xì)胞超抗原學(xué)說和普通抗原學(xué)說。免疫系統(tǒng)失調(diào)和T 細(xì)胞功能紊亂在KD 的發(fā)生與發(fā)展中扮演了關(guān)鍵的角色。KD 患兒的主要病理生理特征表現(xiàn)為免疫系統(tǒng)的失控和T 細(xì)胞功能的紊亂。當(dāng)T 細(xì)胞被激活后，它會(huì)引發(fā)強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答反應(yīng)；同時(shí)，T 細(xì)胞的激活還會(huì)引發(fā)細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，這種級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)在KD 中同樣出現(xiàn)了異常，導(dǎo)致血管炎的進(jìn)一步加重和免疫系統(tǒng)的異?；罨痆7]。T 細(xì)胞在KD 的發(fā)病過程中可以誘導(dǎo)B 淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡減少和多克隆活化，釋放大量細(xì)胞因子，包括IL-6、IL-10 等。這些細(xì)胞因子和抗體可以促進(jìn)炎癥反應(yīng)，使得免疫應(yīng)答更加劇烈和持久。同時(shí)，在這些因子的刺激作用下，可以促使血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)一些相關(guān)黏附分子，導(dǎo)致血管壁進(jìn)一步受損。此外，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子也在這個(gè)過程中發(fā)揮了一定的作用，它可以進(jìn)一步加重血管壁的損傷。本研究致力于深入探索KD 的發(fā)病與進(jìn)展過程，特別關(guān)注免疫系統(tǒng)在這一過程中的角色。

常見的臨床檢測(cè)指標(biāo)通常包括PCT、PLT、CRP、ESR等，這些指標(biāo)目前已廣泛應(yīng)用于大量炎癥疾病的診斷和治療中，缺點(diǎn)是這些炎癥指標(biāo)的特異性都較低。已有研究證實(shí)，與KD 的炎癥程度呈正相關(guān)的指標(biāo)包括PCT、PLT、CRP、ESR 等[8-9]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，健康對(duì)照組炎癥指標(biāo)明顯低于KD 組急性期，CALs 組患兒CRP、PCT、ESR 水平均高于NCALs 組，KD 組急性期與健康對(duì)照組比較，這4 項(xiàng)指標(biāo)均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明KD 急性期時(shí)這些炎癥因子可作為評(píng)估指標(biāo)，同時(shí)也可作為診斷時(shí)的篩查指標(biāo)，但因?yàn)樘禺愋云?，必須具備典型的臨床癥狀并且結(jié)合其他相應(yīng)的臨床指標(biāo)才能確診KD。比較CALs 組與NCALs 組的PLT，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說明在冠狀動(dòng)脈病變的過程中血小板可能發(fā)揮了作用。大量的血小板可通過KD 激活免疫細(xì)胞，增強(qiáng)免疫應(yīng)答，進(jìn)而損傷血管內(nèi)皮，膠原蛋白暴露的方式刺激產(chǎn)生，KD 患兒通常可出現(xiàn)PLT 的異常增高，疾病早期，在血小板生成素、IL-6、IL-8 和IL-11 的介導(dǎo)作用下，血小板數(shù)量開始升高，最終導(dǎo)致血小板聚集形成[10-11]。聚集的血小板和受損的血管內(nèi)皮之間的相互作用更容易導(dǎo)致黏附，進(jìn)而激活凝血系統(tǒng)，引發(fā)一系列連續(xù)的反應(yīng)，血液因此處于高度凝結(jié)的狀態(tài)，增加了心肌梗死的可能性，以及冠狀動(dòng)脈瘤血栓形成和患兒死亡的風(fēng)險(xiǎn)。KD 患兒的血液高凝狀態(tài)與血管炎病變的活動(dòng)性和嚴(yán)重性密切相關(guān)。隨著血管炎癥病變的加劇，血液高凝狀態(tài)也逐漸加重?；純禾幱诟吣隣顟B(tài)和血管炎癥同時(shí)存在的情況下，極易出現(xiàn)冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張病變，以及由于冠狀動(dòng)脈瘤內(nèi)形成的血栓而導(dǎo)致的心肌梗死[12]。ZHOU 等[13]通過研究也證實(shí)了KD 患兒的冠狀動(dòng)脈病變與PLT 有著緊密的聯(lián)系。本研究通過Logistic 回歸分析，提示KD 患兒發(fā)生冠狀動(dòng)脈病變的獨(dú)立影響因素是PLT，PLT 的OR 值為1.898，表明患兒PLT 每增加100×109/L，其發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷的風(fēng)險(xiǎn)增加1.898 倍，提示當(dāng)PLT 異常升高時(shí)，KD 患兒發(fā)生CALs 的風(fēng)險(xiǎn)較高，需盡早使用抗血小板聚集、抑制血小板產(chǎn)生的相關(guān)性藥物。IL-6 是一種促炎因子，KD 發(fā)生后可導(dǎo)致體內(nèi)單核巨噬細(xì)胞和T 細(xì)胞過度活化，IL-6 大量合成與分泌，血管內(nèi)皮出現(xiàn)損傷等一系列炎癥反應(yīng)。LI等[14]研究發(fā)現(xiàn)，急性KD 患兒血清中IL-6 活性均升高，但是疾病恢復(fù)期患兒和對(duì)照組血清中IL-6 活性均未檢測(cè)到或較低。提示IL-6 可能參與了KD 的發(fā)病，并且IL-6 的水平在有無冠狀動(dòng)脈瘤患兒之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。IL-10 作為一種與炎癥以及自身免疫疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)的一種有效抗炎因子，可通過抑制先天性和獲得性免疫系統(tǒng)從而導(dǎo)致不同水平的免疫反應(yīng)來發(fā)揮作用。本研究結(jié)果顯示，比較KD 組急性期與健康對(duì)照組間的IL-10，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。那么在IL-10 異常升高時(shí)，需要關(guān)注患兒有無相關(guān)臨床表現(xiàn)，提高警惕，盡早對(duì)其進(jìn)行診斷和治療。文章中體現(xiàn)了《川崎病診斷指南第6 次修訂版》[15]中的臨床參考或執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，PLT 在預(yù)測(cè)川崎病的發(fā)生以及評(píng)估冠狀動(dòng)脈損傷的風(fēng)險(xiǎn)方面具有重要的臨床價(jià)值，緊密觀察相關(guān)指標(biāo)的變化有利于預(yù)判病情的發(fā)生和發(fā)展。