血清LncRNA MYLK-AS1水平對早期肝癌的診斷效果

黃穎　季仙依　王欽君　季沈杰

【摘要】? 目的? 探討血清長鏈非編碼肌球蛋白輕鏈激酶反義RNA1（LncRNA MYLK-AS1）水平對早期肝癌診斷價值。方法? 選取2018年4月- 2021年4月醫院收治的72例早期肝癌患者為病例組，并選取同期70例肝炎以及肝硬化患者為對照組。比較兩組患者血清LncRNA MYLK-AS1水平，評價血清LncRNA MYLK-AS1水平對早期肝癌的診斷價值。結果? 病例組患者血清LncRNA MYLK-AS1水平高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。病例組患者不同年齡、性別、是否存在包膜、TNM分期之間血清LncRNA MYLK-AS1相對表達量比較，差異均無統計學意義（P>0.05）；而高分化和存在微血管侵犯的病例組患者血清LncRNA MYLK-AS1相對表達量升高，差異有統計學意義（P<0.05）。血清LncRNA MYLK-AS1對于早期肝癌診斷的AUC曲線下面積為0.827（95%CI：0.756～0.898），以血清LncRNA MYLK-AS相對表達量≥102為早期肝癌診斷標準，診斷的靈敏度=97.22%，特異度=91.43%，Kappa=0.893，其在早期肝癌診斷價值較高。結論? 早期肝癌患者血清LncRNA MYLK-AS1水平明顯升高，且與分化程度和微血管侵犯存在一定關系，其水平對于早期肝癌診斷的真實性及一致性均較高，具有較高的臨床應用價值。

【關鍵詞】? LncRNA MYLK-AS1；肝癌；診斷價值

中圖分類號? R446? ? 文獻標識碼? A? ? 文章編號? 1671-0223（2023）21--04

肝癌是臨床上較為多見的惡性腫瘤，具有發病快和惡性程度高的特點[1]。由于肝癌早期癥狀和體征并不明顯，多數患者出現癥狀就醫時已經進展至中晚期，錯失了最佳治療時期，因此早期診斷極為重要[2]。CT和磁共振成像是臨床上的常見診斷方式，但兩種方法的靈敏度和特異度并不高，容易出現漏診和誤診的情況[3]。目前血清學檢測已逐步運用在惡性腫瘤的早期篩查中。長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）是一種長度大于200的非編碼RNA，可通過蛋白質、信號通路以及MicroRNA（miRNA）等在肝癌的發展中起到關鍵作用[4]。相關的研究發現[5-6]lncRNAs參與蛋白質編碼基因的染色質修飾、轉錄和翻譯調節，或通過特異性結合調節蛋白質功能和活性。LncRNAs的表達失調與包括癌癥在內的多種疾病發生發展密切相關[7-9]，例如lncRNA與胰腺癌進展有關，lncRNAs表達異?？勺鳛橐认侔┰\斷和預后的良好生物標志物[10]。肌球蛋白輕鏈激酶反義RNA1（myosin light chain kinase antisense，MYLK-AS1）是信息轉導中的重要蛋白質，在腫瘤細胞和血管生成中起到關鍵的作用[11]。但尚未出現關于MYLK-AS1對于肝癌的早期診斷研究，因此本研究旨在探究血清長鏈非編碼肌球蛋白輕鏈激酶反義RNA1（LncRNA MYLK-AS1）水平對早期肝癌診斷價值。

1? 對象與方法

1.1? 研究對象

選取2018年4月- 2021年4月醫院收治的72例早期肝癌患者為病例組，并選取同期70例肝炎以及肝硬化患者為對照組。納入標準：①觀察組患者符合《現代肝癌診斷治療學》[12]中肝癌診斷標準，且以病理活體組織檢查為金標準；②觀察組患者均為BCLCA期肝癌；③患者神經意志正常。排除標準：①患者合并其他部位惡性腫瘤；②患者入院前已接受其他藥物治療；③患者合并血液系統嚴重病變。觀察組男性50例，女性22例；年齡35～70歲，平均52.77±4.38歲。對照組男性49例，女性23例；年齡34～71歲，平均52.13±4.46歲，兩組患者性別、年齡比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2? 資料收集

內容包括患者年齡、性別、是否存在包膜、TNM分期、分化程度和微血管侵犯情況等。

1.3? 實驗室檢測方法

入院后次日取空腹靜脈血5ml，高速離心分層取血清送實驗室檢查。采用RNA提取試劑盒（北京索萊寶科技公司）以及cDNA合成試劑盒（上海聯邁生物工程有限公司）進行逆轉錄合成第一鏈cDNA。通過熒光定量PCR儀（南京貝登醫療股份有限公司）完成擴增反應。采用引物（上海英駿生物技術有限公司），正向引物：5′-TTGCAGTGTTCAGCACTGGCACA-3′;反向引物：5′-ATTCGACGACCAGTGTTTCAGT-3′。反應條件：在95℃下反應3min，在95℃下反應30s，在60℃下反應30s，在72℃下反應40s，以上步驟連續完成38個循環。隨后通過２-ΔΔCt計算MYLK-AS1的相對表達量。

1.4? 數據處理方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析處理，計量資料用“±s”表示，組間均數比較用t檢驗；計數資料計算百分率，組間率的比較用χ2檢驗。采用ROC曲線評價血清LncRNA MYLK-AS1診斷早期肝癌的效能。P<0.05為差異有統計學意義。。

2? 結果

2.1? 兩組患者血清LncRNA MYLK-AS1水平比較

病例組患者血清LncRNA MYLK-AS1的相對表達量高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2? 病例組患者不同臨床特征血清LncRNA MYLK-AS1水平比較

病例組患者不同年齡、性別、是否存在包膜、TNM分期之間血清LncRNA MYLK-AS1相對表達量比較，差異均無統計學意義（P>0.05）；而高分化和存在微血管侵犯的病例組患者血清LncRNA MYLK-AS1相對表達量升高，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3? 血清LncRNA MYLK-AS1對于早期肝癌的診斷效能

ROC結果顯示（見圖1），血清LncRNA MYLK-AS1對于早期肝癌診斷的AUC曲線下面積為0.827（95%CI：0.756～0.898），表明血清LncRNA MYLK-AS1對于早期肝癌具有一定的診斷效能（P<0.05）。根據約登指數結合臨床需要，以血清LncRNA MYLK-AS相對表達量=102為診斷的界值。

2.4? 血清LncRNA MYLK-AS1對于早期肝癌的診斷效果

以血清LncRNA MYLK-AS相對表達量≥102為早期肝癌診斷標準，樣本的診斷結果顯示，血清LncRNA MYLK-AS診斷早期肝癌靈敏度及特異度均達到90%以上，并且與實際結果具有高度一致性（Kappa=0.893），表明血清LncRNA MYLK-AS對早期肝癌的診斷價值較高，見表3。

3? 討論

肝癌是我國常見的惡性腫瘤，由于該病初期并無明顯癥狀，多數患者確診時已經進展到中晚期[13]。雖然肝癌的治療已取得顯著進展，但總體發病率和死亡率尚無明顯改觀，進一步提高患者生存預后仍面臨嚴峻挑戰。目前早發現、早診斷、早治療是防治原發性肝癌的關鍵環節。臨床上肝癌診斷金標準是組織活檢，但這種方法有創傷性，尚需要更有效的診斷指標[14]。研究發現[15]甲胎蛋白、癌胚抗原、糖蛋白抗原199等生物標志物作為篩選原發性肝癌的重要指標，其靈敏度、特異性均不高，部分原發性肝癌患者用上述指標檢測無法確診。

LncRNA能夠在腫瘤的發生和發展中發揮關鍵的作用，是目前臨床上常見的抑癌或者抑癌基因，其可作為miRNA的“分子海綿”，與miRNA共同調控目的基因的表達，進而調控細胞增殖、炎性因子分泌、細胞凋亡、細胞遷移等細胞生物學行為，進而影響癌癥進展[16-18]。LncRNA MYLK-AS1處在第3號染色體上，最初被證實具有人類基因內替代啟動因子的功能，且在近幾年已被證實是人類的致癌基因[19]。相關研究發現[20]，較高MYLK-AS1表達的胃癌患者生存期明顯縮短，且其表達的上調明顯促進了胃癌的增殖和分化。本研究結果顯示，相較于對照組患者，觀察組患者血清LncRNA MYLK-AS1水平更高。提示，肝癌患者血清LncRNA MYLK-AS1存在明顯的升高。高度表達的LncRNA MYLK-AS1會促進肝細胞周期的發展，同時還能夠抑制肝癌細胞的凋亡，說明表示其水平在細胞增殖中起到一定的作用[21-22]。本研究結果顯示，中低分化和存在微血管侵犯患者血清LncRNA MYLK-AS1水平明顯高于高分化和不存在微血管侵犯患者。這也進一步證實了LncRNA MYLK-AS1與肝癌的增殖分化存在的關系。本研究發現，本研究進一步分析發現，血清LncRNA MYLK-AS1對于早期肝癌診斷的AUC曲線下面積為0.827（95%CI：0.756～0.898），以血清LncRNA MYLK-AS相對表達量≥102為早期肝癌診斷標準，診斷的靈敏度=97.22%，特異度= 91.43% ，Kappa= 0.893。說明LncRNA MYLK-AS1對于早期肝癌的診斷價值較高。

綜上所述，早期肝癌患者血清LncRNA MYLK-AS1水平明顯升高，且與分化程度和微血管侵犯存在一定關系，其水平對于早期肝癌診斷的真實性和一致性均較高，有臨床應用價值。但本次研究樣本量較小，且未進行外推實驗，需要繼續深入研究，進一步明確臨床應用效果。

4? 參考文獻

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[2023-07-05收稿]

作者單位：226200? 江蘇省啟東市人民醫院/啟東肝癌防治研究所/南通大學附屬啟東醫院檢驗科

*通訊作者