腸桿菌科細(xì)菌耐藥基因NDM和ESBLs的檢測及白頭翁湯增強(qiáng)其敏感性研究

摘 要：采用美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推薦的方法，檢測了臨床分離的44株腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（Extended-Spectrum Beta-Lactamases，ESBLs）的情況.利用PCR對臨床分離菌進(jìn)行新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶（New Delhi metallo-β-lactamase，NDM）以及ESBLs耐藥基因的檢測.用微量肉湯稀釋法測定了分離菌對阿莫西林等14種抗菌藥的敏感性，并統(tǒng)計(jì)其耐藥率.結(jié)果表明，臨床分離的44株腸桿菌科細(xì)菌中，有31株產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶，檢出率為70.5％.耐藥基因檢測結(jié)果顯示，耐藥基因NDM-1攜帶率為13.6%.ESBLs耐藥基因TEM，SHV，CTX-M，OXA的攜帶率分別為100%，43.2%，45.5%，6.8%.同時(shí)發(fā)現(xiàn)，有6株菌株同時(shí)檢出了含NDM-1和ESBLs的基因，有9株菌株同時(shí)檢出含有2 種ESBLs基因，3株同時(shí)檢出含有3種ESBLs基因.敏感性測定結(jié)果顯示，分離菌大多呈現(xiàn)多重耐藥，分離菌除對替加環(huán)素（18.2%）和阿米卡星（36.4%）的耐藥率較低外，對其他藥物呈現(xiàn)出較高的耐藥率，其中對阿莫西林的耐藥率高達(dá)97.7%，對頭孢曲松、環(huán)丙沙星、土霉素、四環(huán)素、紅霉素的耐藥率均在75.0%以上.此外發(fā)現(xiàn)，同時(shí)攜帶多個(gè)耐藥基因的菌株耐藥率較高.中藥復(fù)方白頭翁湯對分離菌表現(xiàn)出了一定的抑菌活性，其MIC值為204.8 g/L.14種抗菌藥分別與白頭翁湯聯(lián)用后，耐藥率均有不同程度下降，其中頭孢類藥物、氟喹諾酮類藥物與白頭翁湯聯(lián)用后，耐藥率下降較為明顯，如頭孢曲松由84.1%下降至56.8%，環(huán)丙沙星由75.0%下降至45.5%.綜上，NDM和ESBLs耐藥基因在腸桿菌科細(xì)菌中已有一定的流行，同時(shí)攜帶NDM和ESBLs多個(gè)耐藥基因的菌株耐藥較為嚴(yán)重.白頭翁湯與抗菌藥聯(lián)用能在一定程度增強(qiáng)耐藥菌株的敏感性，為臨床相關(guān)感染的防治提供理論依據(jù).

關(guān)鍵詞：腸桿菌科;超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；白頭翁湯；藥物敏感性

中圖分類號：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

腸桿菌科細(xì)菌是人體正常菌群的重要組成部分，多數(shù)為條件致病菌，廣泛存在于人體的體表和腸道中，它在維持腸道菌群平衡方面起著重要作用［1-2］.此外，這類菌也廣泛存在于醫(yī)院的環(huán)境中，它是引起醫(yī)源性感染的重要病原菌，研究發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致醫(yī)院病原菌感染的病例中，有近一半是腸桿菌科細(xì)菌導(dǎo)致的感染，可謂危害性極大［3］.2008年，首次在腸桿菌科細(xì)菌導(dǎo)致尿路感染的患者中發(fā)現(xiàn)了NDM，后被命名為NDM-1型，它屬于一種新型碳青霉烯酶，對包括碳青霉烯類在內(nèi)的所有β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥［4］.隨后，該酶在世界范圍內(nèi)快速播散，給臨床醫(yī)療及感染防控帶來了嚴(yán)重威脅.ESBLs主要由腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)生，大腸桿菌和肺炎克雷伯菌是典型代表，產(chǎn)ESBLs是腸桿菌科細(xì)菌對β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥的重要機(jī)制［5］.

當(dāng)前，產(chǎn)NDM和ESBLs的腸桿菌科細(xì)菌檢出率居高不下，菌株的耐藥問題變得日趨嚴(yán)峻［6］.尋找不易產(chǎn)生耐藥且能恢復(fù)耐藥菌株敏感性的藥物迫在眉睫.中藥為中國傳統(tǒng)特有藥物，具有毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn).同時(shí)，很多中藥還可以使已經(jīng)產(chǎn)生耐藥性的菌株耐藥性降低，從而能夠恢復(fù)耐藥菌株對治療藥物的敏感性.中藥復(fù)方白頭翁湯（Pulsatillae Decoction，PD），具有抗菌、消炎、鎮(zhèn)痛等藥理作用，可用于防治腸桿菌科細(xì)菌導(dǎo)致的感染性疾病.據(jù)體外抑菌試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，白頭翁湯具有明顯的抑菌作用［7-9］.目前，中藥復(fù)方在對產(chǎn)NDM和ESBLs腸桿菌科細(xì)菌作用機(jī)制方面鮮見報(bào)道［10］.此外，白頭翁湯在對產(chǎn)NDM和ESBLs 腸桿菌科細(xì)菌恢復(fù)敏感性方面缺乏系統(tǒng)研究.鑒于此，本試驗(yàn)開展腸桿菌科細(xì)菌NDM和ESBLs基因檢測、白頭翁湯對產(chǎn)NDM和ESBLs腸桿菌科細(xì)菌增強(qiáng)敏感性方面的研究，旨在闡釋白頭翁湯對產(chǎn)NDM和ESBLs 腸桿菌科細(xì)菌恢復(fù)敏感性的初步作用，為臨床抗感染治療、醫(yī)院源產(chǎn)NDM和ESBLs腸桿菌科細(xì)菌感染性疾病防控提供科學(xué)依據(jù).

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源

44株已鑒定的腸桿菌科細(xì)菌于2020年6至9月由河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科惠贈(zèng)，分離自ICU、神經(jīng)外科和急診科肺部感染患者的痰液標(biāo)本.菌株組成包括大腸桿菌13株（E1～E13），肺炎克雷伯菌15株（K1～K15），綠膿桿菌10株（P1～P10），不動(dòng)桿菌6株（A1～A6）.菌株鑒定采用德國布魯克microflex LT 臺式MALDI-TOF基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜儀及原裝進(jìn)口配套試劑，鑒定結(jié)果分值均大于2.00.

1.1.2 培養(yǎng)基和試劑

TSA（批號：200620），MH（批號：200426），LB（批號：210215）等培養(yǎng)基購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司；各種顯色培養(yǎng)基（貨號：PS820，EC166，AC092，TA870）購自法國科瑪嘉公司.2×Taq Master Mix（貨號：CW0682C）等購自北京康為世紀(jì)有限公司.

1.1.3 藥敏紙片及藥物

氨曲南（AZT，30 μg/片，批號：20200609）、頭孢他啶（CAZ，30 μg/片，批號：20200712）、頭孢曲松（CRO，30 μg/片，批號：20200910）、頭孢噻肟（CTX，30 μg/片，批號：20210115）、頭孢他啶/棒酸（CAZ/CA，30 μg/片，批號：20200918）和頭孢噻肟/棒酸（CTX/CA，30 μg/片，批號：20210204）購自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司.白頭翁、黃檗、黃連、秦皮均購自河南中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)代麗萍教授鑒定為毛茛科植物白頭翁Pulsatilliae Radix的 干 燥 根、蕓香科植物黃檗Phellodendri Chinrnsis Cortex的干燥根、毛茛科植物黃連Coptidis Rhizoma的干燥的根、木樨科植物苦櫪白蠟樹Fraxini Cortex的干燥的根.常用抗菌藥物阿莫西林（Amoxicillin，貨號：S26864）、頭孢曲松（Ceftriaxone，貨號：B24430）、頭孢他啶（Ceftazidime，貨號：B70108）、頭孢吡肟（Cefepime，貨號：T48283）、美羅培南（Meropenem，貨號：S31659）、環(huán)丙沙星（Ciprofloxacin，貨號：S17012）、左氧氟沙星（Levofloxacin，貨號：S17134）、阿米卡星（Amikacin，貨號：S37556）、土霉素（Terramycine，貨號：B34615）、多西環(huán)素（Doxycyclin，貨號：S27317）、四環(huán)素（Tetracycline，貨號：S17051）、替加環(huán)素（Tigecycline，貨號：S24031）、紅霉素（erythromycin，貨號：S17002）和林可霉素（Lincomycin，貨號：B33847）為標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌罚徸陨虾Ｔ慈~生物科技有限公司，均在有效期內(nèi).

1.2 方法

1.2.1 腸桿菌科細(xì)菌菌株復(fù)蘇以及ESBLs表型檢測

菌株復(fù)蘇：無菌劃線接種于血平板上，37 ℃培養(yǎng)12～16 h，后挑取單菌落接種LB肉湯培養(yǎng)基，再培養(yǎng)12～16 h，而后再次劃線接種于顯色培養(yǎng)基上純培養(yǎng)，作為受試菌株.

ESBLs檢測：按照CLSI［11］推薦的ESBLs初篩和表型確證試驗(yàn)，重復(fù)3次，取平均值.

1.2.2 耐藥基因NDM，ESBLs檢測

對NDM和ESBLs耐藥基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增（見表1）.反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性45 s，72 ℃延伸45 s，循環(huán)30次，最后72 ℃延伸10 min.PCR擴(kuò)增后分別取7 μL產(chǎn)物進(jìn)行電泳，利用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果.PCR擴(kuò)增陽性的基因，經(jīng)測序驗(yàn)證.

1.2.3 敏感性試驗(yàn)檢測

1.2.3.1 藥液配制

精確稱取各抗菌藥物溶解于無菌水中，配成質(zhì)量濃度為1 280 mg/L的儲備液，-20 ℃保存，備用.白頭翁湯儲備液的配制：按照白頭翁湯組方比例取4味藥材90 g，加入6倍體積水浸潤，然后添加10倍體積的水加熱煮沸，煮沸后改文火煎煮1 h;過濾，濾渣再加8倍體積水煎煮1 h;過濾，取上清液，合并2次藥液，減壓濃縮為43.95 mL，即質(zhì)量濃度為2 048 g/L的儲備液，5 000 r/min離心15 min;取上清液，再次離心取上清液，流通空氣滅菌20 min，-20 ℃保存，備用.

1.2.3.2 菌液準(zhǔn)備

挑取純培養(yǎng)菌液接種MH肉湯，于37 ℃過夜培養(yǎng)，挑取3～5個(gè)純菌落于5 mL去離子水中，經(jīng)比濁使其達(dá)到0.5麥?zhǔn)蠁挝唬s為1×108 cfu/mL），使用前將菌液稀釋1 000倍.

1.2.3.3 藥物敏感性測定

采用微量稀釋法，測定阿莫西林等14種抗菌藥物和白頭翁湯的最小抑菌濃度（MIC），再分別測定以上14種藥物與白頭翁湯（1/2MIC）聯(lián)用的MIC.替加環(huán)素耐藥臨界值按照歐洲藥物敏感性檢測委員會(huì)（EUCAST）標(biāo)準(zhǔn)［13］來判讀，其余抗菌藥物耐藥臨界值CLSI標(biāo)準(zhǔn)［11］來判讀.此后，進(jìn)行耐藥率統(tǒng)計(jì).

2 結(jié)果與分析

2.1 ESBLs檢測結(jié)果

根據(jù)初篩試驗(yàn)結(jié)果，13株大腸桿菌菌株均為疑似產(chǎn)ESBLs菌株；15株肺炎克雷伯菌菌株除K9外，其余14株為疑似產(chǎn)ESBLs菌株；10株綠膿桿菌菌株除P3外，其余9株為疑似產(chǎn)ESBLs菌株；6株綠膿桿菌菌株除A4，A5外，其余4株為疑似產(chǎn)ESBLs菌株.可見，44株受試菌株中除K9，P3，A4，A5菌株外，其余40株為疑似產(chǎn)ESBLs菌株.

40株疑似產(chǎn)ESBLs菌株的表型確證結(jié)果（表2）.40株疑似產(chǎn)ESBLs菌株中有31株被確認(rèn)為產(chǎn)ESBLs菌株，檢出率為70.5%.

2.2 耐藥基因NDM和ESBLs檢測結(jié)果

耐藥基因在44株腸桿菌菌株中有不同程度的檢出，金屬β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因NDM-1攜帶率為13.6%，其中，在大腸桿菌、綠膿桿菌、不動(dòng)桿菌菌株中均有檢出.ESBLs耐藥基因TEM，SHV，CTX-M，OXA的攜帶率分別為100%，43.2%，45.5%，6.8%，其中耐藥基因TEM在44株腸桿菌菌株中被全部檢出，耐藥基因OXA的檢出率較低（6.8%）.同時(shí)還發(fā)現(xiàn)有6株菌株同時(shí)檢出了含NDM-1，ESBLs的基因，有9株菌株同時(shí)檢出含有2 種ESBLs基因，3株同時(shí)檢出含有3種ESBLs基因.部分菌株耐藥基因檢測結(jié)果見圖1至圖4.

2.3 敏感性試驗(yàn)測定結(jié)果

MIC結(jié)果顯示，分離株大多呈現(xiàn)多重耐藥，尤其大腸桿菌、肺炎克雷伯菌和綠膿桿菌耐藥較為嚴(yán)重.中藥復(fù)方白頭翁湯對腸桿菌科細(xì)菌具有一定的抑菌活性，其MIC值為204.8 g/L.由表3可知，分離株除對替加環(huán)素（18.2%）和阿米卡星（36.4%）的耐藥率較低外，對其他藥物呈現(xiàn)出較高的耐藥率，其中對阿莫西林的耐藥率高達(dá)97.7%，對頭孢曲松、環(huán)丙沙星、土霉素、四環(huán)素、紅霉素的耐藥率均在75%以上，對林可霉素、多西環(huán)素、左氧氟沙星、美羅培南、頭孢他啶的耐藥率也在50%以上.此外發(fā)現(xiàn)，同時(shí)攜帶多個(gè)耐藥基因的菌株耐藥率較高.

由表3顯示，14種抗菌藥分別與白頭翁湯聯(lián)用后，耐藥率均有不同程度下降，其中頭孢類藥物、氟喹諾酮類藥物與白頭翁湯聯(lián)用后，耐藥率下降較為明顯，如頭孢曲松由84.1%下降至56.8%，環(huán)丙沙星由75.0%下降至45.5%.

3 討 論

腸桿菌科細(xì)菌是廣泛存在于自然界的條件致病菌，同時(shí)又是醫(yī)源性感染的重要病原菌.當(dāng)機(jī)體免疫功能受損或寄居條件發(fā)生改變時(shí)，腸桿菌科細(xì)菌便大量增殖，繼而能引起感染.據(jù)相關(guān)報(bào)道，腸桿菌科細(xì)菌中檢出率最高的是大腸桿菌和肺炎克雷伯菌，也是產(chǎn)ESBLs的常見菌株［14-15］.隨著抗菌藥物廣泛應(yīng)用于臨床，耐藥菌株日趨呈上升態(tài)勢，特別是腸桿菌科細(xì)菌中產(chǎn)NDM和ESBLs菌株日益增多，這給臨床感染的防治帶來了巨大挑戰(zhàn).因此，及時(shí)掌控產(chǎn)酶菌株的流行和耐藥特征，有效防止耐藥菌株在醫(yī)院的感染及流行具有重要意義.

本試驗(yàn)ESBLs檢測采用CLSI推薦方法，具有方便、快速、特異性較高等優(yōu)點(diǎn)，適合實(shí)驗(yàn)室和臨床推廣檢測使用.ESBLs是能水解青霉素類、頭孢菌素類等藥物，但能被β-內(nèi)酰胺酶抑制劑如舒巴坦、克拉維酸所抑制的一類酶［16-17］.本研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)ESBLs的檢出率70.5%，這高于文獻(xiàn)［18］報(bào)道的產(chǎn)ESBLs大腸桿菌檢出率42.19%.另據(jù)研究得知，從798株腸桿菌中檢出產(chǎn)ESBLs菌株160株，檢出率為20.05%.其中，大腸桿菌的檢出率為61.25%（98/160）［19］.

本研究顯示，耐藥基因NDM-1在大腸桿菌、綠膿桿菌、不動(dòng)桿菌菌株中均有檢出，攜帶率為13.6%，這與以往報(bào)道檢出結(jié)果相一致［20-21］.據(jù)崔小璠等［22］研究發(fā)現(xiàn)，從178株耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌菌株中檢出產(chǎn)NDM菌株22株，檢出率為12.4%.另有研究發(fā)現(xiàn)，從153株腸桿菌科細(xì)菌菌株中檢出產(chǎn)NDM菌株2株，檢出率為1.3%［23］.ESBLs的基因型種類較多，按照同源性可分為TEM，SHV，CTX-M，OXA等多種型別［24］.本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，ESBLs耐藥基因中檢出率最高的是TEM型（100%），這與曾利娟［2］研究報(bào)道檢出率最高的是CTX-M型（81%）有一定差異，推測可能是不同地區(qū)、不同醫(yī)院的菌株流行的ESBLs基因型存在一定差異，或可能與本試驗(yàn)受試菌株的數(shù)量以及與不同地區(qū)、不同醫(yī)院抗生素的使用情況不同有一定關(guān)系，后續(xù)應(yīng)加大樣本量進(jìn)一步研究.本研究還發(fā)現(xiàn)，有部分菌株同時(shí)攜帶了NDM-1和ESBLs的基因，在同一菌株發(fā)現(xiàn)了含2 種以上ESBLs基因，這從中揭示了產(chǎn)NDM和ESBLs腸桿菌科細(xì)菌所含耐藥基因存在一定的復(fù)雜性，這警示我們在臨床中應(yīng)合理用藥，并及時(shí)加強(qiáng)耐藥性檢測.

近年來，關(guān)于腸桿菌科細(xì)菌的耐藥性報(bào)道較多，本研究發(fā)現(xiàn)，分離菌株大多呈現(xiàn)多重耐藥，這與有關(guān)報(bào)道結(jié)果一致［25-26］.本研究顯示腸桿菌科細(xì)菌對常用抗菌藥物呈現(xiàn)出較高的耐藥率，這與文獻(xiàn)［18，27］結(jié)果一致.研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)ESBLs的腸桿菌菌株對阿莫西林、頭孢曲松的耐藥率達(dá)79%，產(chǎn)ESBLs的腸桿菌菌株出現(xiàn)多重耐藥的比例達(dá)47%［28］.另有研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)ESBLs菌株耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，其中大腸桿菌對四環(huán)素的耐藥率超過70%，肺炎克雷伯菌對氨芐西林耐藥率幾乎達(dá)100%［2］.同時(shí)，也警示我們在治療腸桿菌科細(xì)菌引起相關(guān)感染時(shí)應(yīng)慎用或停止使用這些藥物.研究發(fā)現(xiàn)用替加環(huán)素對多重耐藥的腸桿菌菌株進(jìn)行體外抗菌活性測定時(shí)，替加環(huán)素對肺炎克雷伯菌的耐藥率為6.7%［29］.產(chǎn)ESBLs菌株（大腸桿菌和肺炎克雷伯菌）對美羅培南和阿米卡星的耐藥率都在8%以下［2］.目前，雖然替加環(huán)素對多重耐藥的腸桿菌菌株具有良好的抗菌活性，也應(yīng)注意在使用時(shí)必須謹(jǐn)慎，同時(shí)做好耐藥性的監(jiān)測.此外，不同地區(qū)、不同醫(yī)院來源的病原菌分布存在一定差異，這可能與該地區(qū)、該醫(yī)院所使用的抗菌藥物種類有一定關(guān)聯(lián).同時(shí)，產(chǎn)NDM和ESBLs腸桿菌科細(xì)菌的分離率、耐藥率和攜帶基因因不同地區(qū)、不同醫(yī)院也存在一定差異［30］.本研究還發(fā)現(xiàn)，同時(shí)攜帶多個(gè)耐藥基因的菌株耐藥率較高.細(xì)菌攜帶多個(gè)耐藥基因，具有不同的耐藥表型，表現(xiàn)出一定的多種耐藥［31］.總之，產(chǎn)NDM和ESBLs菌株的出現(xiàn)給臨床治療帶來一定難度.

本研究發(fā)現(xiàn)，中藥復(fù)方白頭翁湯對腸桿菌科細(xì)菌表現(xiàn)出了一定的抑菌活性，與抗菌藥聯(lián)用能在一定程度增強(qiáng)耐藥菌株的敏感性.所以在臨床使用抗菌藥物防治相關(guān)感染性疾病效果不好或無效時(shí)，不妨考慮使用中藥與西藥聯(lián)合的方案，以求增效或恢復(fù)敏感性.此外，還可將β-內(nèi)酰胺類藥物與酶抑制劑，如克拉維酸、舒巴坦等聯(lián)合用藥.此外，在臨床用藥時(shí)要注意，盡量不要長期使用某一藥物，應(yīng)選用敏感或高敏的藥物，有條件時(shí)最好做藥敏試驗(yàn)，還應(yīng)考慮交叉用藥或定期輪換用藥等方法.

參 考 文 獻(xiàn)

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Detection of resistance gene NDM and ESBLs of Enterobacteriaceae and study on its sensitivity enhanced by Pulsatilla decoction

Xu Erping1a， Liu Baoguang1a， Dong Ying1a， Bai Ming1a， Xie Miao1b， Wang Baoying1a， Wu Hua2， Li Yongwei1c

（1. a. Academy of Chinese Medical Sciences; b. College of Traditional Chinese Medicine; c. The Second Affiliated Hospital，

Henan University of Chinese Medicine， Zhengzhou 450046， China; 2. College of Veterinary Medicine，

Henan Agricultural University， Zhengzhou 450002， China）

Abstract： Extended-Spectrum Beta-Lactamases（ESBLs）-producing from 44 strains of Enterobacteriaceae were detected by using the method recommended by the Clinical and Laboratory Standards Institute（CLSI）. New Delhi metallo-β-lactamase（NDM）and ESBLs resistance genes were detected in clinical isolates by PCR. The susceptibility of the isolates to 14 kinds of antibacterial drugs such as amoxicillin was determined by the micro-broth dilution method， and the resistance rate was calculated. The results showed that among the 44 strains of Enterobacteriaceae， 31 strains produced ESBLs， and the detection rate was 70.5%. The results of resistance gene detection showed that the carrier rate of resistance gene NDM-1 was 13.6%. The carrier rates of ESBLs resistance genes TEM， SHV， CTX-M and OXA were 100%， 43.2%， 45.5% and 6.8%， respectively. At the same time， it was found that 6 strains were detected with NDM-1 and ESBLs genes， 9 strains were detected with 2 ESBLs genes， and 3 strains were detected with 3 ESBLs genes. The results of susceptibility testing showed that most of the isolates showed multi-drug resistance， and the isolates showed high resistance rates to other drugs except for tigecycline（18.2%）and amikacin（36.4%）. Among them， the resistance rate to amoxicillin was as high as 97.7%， and the resistance rate to ceftriaxone， ciprofloxacin， oxytetracycline， tetracycline and erythromycin were all above 75.0%. In addition， it was found that the strains carrying multiple resistance genes at the same time had a higher resistance rate. The traditional Chinese medicine compound Pulsatilla Decoction showed a certain antibacterial activity against the isolated bacteria， and its MIC value was 204.8 g/L. After 14 kinds of antibacterial drugs were used in combination with Pulsatilla Decoction， the drug resistance rates decreased to varying degrees. Among them， cephalosporins and fluoroquinolones were used in combination with Pulsatilla Decoction， and the drug resistance rates decreased significantly. For example， ceftriaxone dropped form 84.1% to 56.8%， and ciprofloxacin dropped from 75.0% to 45.5%. In conclusion， NDM and ESBLs resistance genes have been prevalent in Enterobacteriaceae， and strains carrying multiple NDM and ESBLs resistance genes are more resistant. The combination of Pulsatilla Decoction and antibacterial drugs can enhance the sensitivity of resistant strains to a certain extent， providing a theoretical basis for the prevention and treatment of clinically related infections.

Keywords： Enterobacteriaceae; ESBLs; pulsatilla decoction; antimicrobial susceptibility

［責(zé)任編校 劉洋 楊浦］

收稿日期：2022-01-07;修回日期：2022-04-21.

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（81973739）；河南省中醫(yī)藥科學(xué)研究專項(xiàng)課題（2019ZY1019；20-21ZY2144）；河南省自然科學(xué)基金（222300420481）.

作者簡介：許二平（1962-），男，河南鄢陵人，河南中醫(yī)藥大學(xué)教授，博士，博士生導(dǎo)師，主要從事仲景方藥配伍及作用機(jī)制研究，E-mail：xuerping0371@163.com.

通信作者：許二平;劉保光，E-mail：liubaoguang83@sina.com.