慢性乙型病毒性肝炎患者外周血Th1/Th2相關細胞因子表達的臨床意義

摘要：目的" 探討慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者外周血Th1/Th2相關細胞因子表達水平及臨床意義。方法" 選取2022年1月-2023年2月大理大學第二附屬醫院收治的56例CHB患者為研究組，另選取同時期31名體檢健康的同齡者為對照組；依據乙肝兩對半檢測結果將研究組分為HBeAg（+）組與HBeAg（-）組，以病毒載量104拷貝/ml為界值，將HBeAg（+）組進一步分為高病毒載量組（＞104拷貝/ml）與低病毒載量組（＜104拷貝/ml）。檢測研究組與對照組外周血Th1/Th2相關細胞因子表達水平，并比較研究組中HBeAg（+）組與HBeAg（-）組Th1/Th2相關細胞因子檢測結果，進一步分析HBeAg（+）組中的高病毒載量組與低病毒載量組Th1/Th2相關細胞因子水平差異。結果" 研究組外周血IFN-y、IL-2、IL-4、IL-5水平均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；研究組中HBeAg（+）組外周血IFN-γ和IL-2水平低于HBeAg（-）組，而外周血IL-4和IL-5水平高于HBeAg（-）組，差異有統計學意義（P＜0.05）；HBeAg（+）組中低病毒載量組外周血IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5水平均低于高病毒載量組，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論" CHB患者存在免疫調節功能紊亂，檢測CHB患者外周血Th1/Th2相關細胞因子表達水平對疾病的診斷、病情嚴重程度的判斷及預后具有重要的參考價值。

關鍵詞：乙型病毒性肝炎；IFN-γ；IL-2；IL-4；IL-5；免疫功能；Th1/Th2相關細胞因子

中圖分類號：R516.2+2" " " " " " " " " " " " " " "文獻標識碼：A" " " " " " " " " " " " " " " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.07.019

文章編號：1006-1959（2024）07-0102-04

Clinical Significance of Th1/Th2 Related Cytokines Expression in Peripheral Blood of Patients

with Chronic Hepatitis B

MAO Xiao-zhou，YANG Juan，ZHENG Sheng

（Department of Gastroenterology，the Second Affiliated Hospital of Dali University，Kunming 650011，Yunnan，China）

Abstract：Objective" To investigate the expression level and clinical significance of Th1/Th2 related cytokines in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B （CHB）.Methods" A total of 56 CHB patients admitted to the Second Affiliated Hospital of Dali University from January 2022 to February 2023 were selected as the study group， and 31 healthy peers at the same time were selected as the control group. The study group was divided into HBeAg（+） group and HBeAg（-） group according to the results of two pairs of semi-hepatitis B test. With the viral load of 104 copies/ml as the boundary value， the HBeAg（+） group was further divided into high viral load group （gt;104 copies/ml） and low viral load group （lt;104 copies/ml）. The expression levels of Th1/Th2-related cytokines in peripheral blood of the study group and the control group were detected， and the results of Th1/Th2-related cytokines in HBeAg（+） group and HBeAg（-） group were compared. The difference of Th1/Th2-related cytokine levels between high viral load group and low viral load group in HBeAg（+） group was further analyzed.Results" The levels of IFN-y， IL-2， IL-4 and IL-5 in peripheral blood of the study group were higher than those of the control group， and the differences were statistically significant （Plt;0.05）. In the study group， the levels of IFN-γ and IL-2 in peripheral blood of HBeAg（+） group were lower than those in HBeAg（-） group， while the levels of IL-4 and IL-5 in peripheral blood were higher than those in HBeAg（-） group， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. The levels of IFN-γ， IL-2， IL-4 and IL-5 in peripheral blood of low viral load group in HBeAg（+） group were lower than those in high viral load group， and the differences were statistically significant （Plt;0.05）.Conclusion" CHB patients have immune regulation dysfunction. The detection of Th1/Th2 related cytokines in peripheral blood of CHB patients has important reference value for the diagnosis， severity and prognosis of the disease.

Key words：Viral hepatitis B;IFN-γ;IL-2;IL-4;IL-5;Immune function;Th1/Th2 related cytokines

慢性乙型病毒性肝炎（chronic viral hepatitis B， CHB）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus， HBV）持續感染引起的慢性肝臟炎癥性疾病，是全球常見的慢性傳染病。近年來，國外研究發現[1]，HBV感染的發病機制與免疫介導的宿主-病毒相互作用密切相關，其中Th1/Th2細胞因子在免疫介導過程中尤為關鍵。“細胞因子平衡學說”認為正常生理狀態下Th1和Th2處于動態平衡狀態，當機體受到HBV感染時，Th1和Th2間平衡被打破，這種變化往往導致細胞因子網絡失調，機體免疫調節功能紊亂，導致病毒清除困難，疾病延長而難以治愈[2，3]。然而，目前國內關于慢性乙型病毒性肝炎患者外周血Th1/Th2相關細胞因子表達的研究較少。基于此，本研究結合2022年1月-2023年2月我院收治的56例CHB患者臨床資料，探討Th1/Th2相關細胞因子在CHB患者中的表達特征，以期為臨床CHB患者的診斷、治療提供一定參考，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料" 回顧性選取2022年1月-2023年2月大理大學第二附屬醫院收治的56例慢性乙型病毒性肝炎患者作為研究組，另選取同時期31例體檢健康的同齡者作為對照組。研究組男34例，女22例；年齡18～80歲，平均年齡（52.68±13.64）歲。對照組男22例，女9例；年齡12～75歲，平均年齡（47.42±14.61）歲。兩組性別和年齡比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。依據乙肝兩對半檢測結果將研究組分為HBeAg（+）組與HBeAg（-）組；HBeAg（+）組男20例，女14例；年齡18～72歲，平均年齡（50.32±13.29）歲；HBeAg（-）組中男14例，女8例；年齡32～80歲，平均年齡（56.32±13.66）歲。兩組性別和年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。以病毒載量104拷貝/ml為界值，將HBeAg（+）組分為高病毒載量組（＞104拷貝/ml）與低病毒載量組（＜104拷貝/ml），HBeAg（+）組低病毒載量組男10例，女8例；年齡23～71歲，平均年齡（52.28±11.19）歲；高病毒載量組男10例，女6例；年齡18～58歲，平均年齡（48.13±15.40）歲。兩組性別和年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，所有樣本采集及資料調查均取得患者及家屬知情同意并簽字確認，研究過程中嚴格保護患者隱私。

1.2納入和排除標準" 納入標準：符合中華醫學會肝病學分會發布的《慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）》[4]的慢性乙型病毒性肝炎患者。排除標準：①有重大疾病如：癌癥、急性心衰、腎衰；②合并人體免疫系統相關性疾病如：HIV。

1.3方法" 所有受試對象均清晨空腹靜脈采血5 ml，3000 r/min離心15 min，收集血清，－20 ℃保存待測。采用Luminex多重檢測技術檢測血清Th1相關細胞因子[白細胞介素-12（IL-12）、干擾素-γ（IFN-γ）]和Th2相關細胞因子[白細胞介素-4（IL－4）、白細胞介素-5（IL-5）]水平。按試劑盒（上海科美生物公司）要求進行操作；采用全自動免疫分析儀對乙肝兩對半定性檢測，包括乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、表面抗體（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗體（HBeAb）、核心抗體（HBcAb）水平進行檢測，儀器為東芝40全自動生化分析儀；采用熒光定量聚合酶鏈式反應（FQ-PCR法）進行定量檢測HBV DNA病毒載量。按試劑盒（中山達安熒光定量分析試劑）要求進行操作。

1.4觀察指標" 檢測研究組與對照組外周血Th1/Th2相關細胞因子表達水平，并比較研究組中HBeAg（+）組與HBeAg（-）組 Th1/Th2相關細胞因子檢測結果，進一步分析HBeAg（+）組中的高病毒載量組與低病毒載量組Th1/Th2相關細胞因子水平差異。

1.5統計學方法" 本研究的所有數據分析均采用SPSS 22.0統計軟件完成。計量資料進行正態性檢驗，符合正態分布的資料以（x±s）表示，不符合正態分布的資料用中位數（M）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數資料采用（%）表示，比較采用？字2檢驗。所有統計學分析均采用雙側檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1研究組和對照組外周血Th1/Th2相關細胞因子水平比較" 研究組外周血IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5均高于對照組（P＜0.05），見表1。

2.2 HBeAg（+）組和HBeAg（-）組外周血Th1/Th2相關細胞因子水平比較" HBeAg（+）組外周血IL-4、IL-5高于HBeAg（-）組（P＜0.05）；HBeAg（+）組外周血IFN-γ、IL-2低于HBeAg（-）組（P＜0.05），見表2。

2.3低病毒載量組和高病毒載量組外周血Th1/Th2相關細胞因子水平比較" 低病毒載量組外周血細胞因子IFN-γ、IL-2 IL-4及IL-5低于高病毒載量組（P＜0.05），見表3。

3討論

慢性乙型病毒性肝炎是我國常見的傳染病之一，可導致肝纖維化、肝硬化和肝細胞癌，發病機制復雜。目前認為[5]，慢性乙型病毒性肝炎的主要發病機制是免疫調節功能紊亂，其中先天性和適應性免疫被認為是HBV感染的主要促成因素。近年來，越來越多的研究表明[6-8]，Th1/Th2相關細胞因子在慢性乙型病毒性肝炎的發生和發展中起著重要的作用。Th1細胞因子主要包括IFN-γ、IL-2、TNF-α等，能夠促進細胞免疫應答，增強細胞毒性T淋巴細胞（CTL）殺傷HBV感染細胞，從而清除病毒。而Th2細胞因子主要包括IL-4、IL-5、IL-10等，能夠促進體液免疫應答，增強B淋巴細胞產生抗體的能力，從而中和病毒。因此，Th1/Th2細胞因子在慢性乙型病毒性肝炎的免疫調節中起著重要的作用。

Th1細胞分泌IL-2、INF-y等細胞因子，可誘導細胞免疫。長期以來，IL-2一直被認為是一種T細胞生長因子，它可以通過與細胞表面受體IL-2R結合發揮生物學效應，它對效應T細胞的增值和分化是必要的[9]。研究表明[10]，IL-2可以促進CD8+T細胞的生長和分化，對Treg細胞調節功能至關重要，并增強機體抗病毒感染能力。本研究中CHB患者高水平表達IL-2，有利于激活CD8+淋巴細胞從而清除病毒，近年來臨床研究[11]也證實外周血IL-2表達水平與CHB患者免疫應答水平相關，且對不同疾病分期的CHB患者具有較好的預測價值。IFN-γ屬于Ⅱ型干擾素，是病毒感染時誘導的重要細胞因子，具有抗腫瘤、抗增殖和免疫調節作用[12]。本研究中CHB患者IFN-γ水平高于對照組，推測長期持續的HBV感染使CHB患者免疫系統處于高反應狀態，進而增強細胞免疫，有利于乙型肝炎病毒清除。

Th2細胞與B細胞的增殖和分化以及抗體的產生有關，主要通過分泌細胞因子如IL-4、IL-5等介導體液免疫應答[13]。有研究報道[14]，IL-4可以抑制HBsAg的產生及HBV的復制，從而介導宿主的抗病毒反應。另一項基于病毒性肝炎的小鼠模型[15]證實IL-5可以通過刺激樹突狀細胞（DC）促進T細胞和NK細胞分泌IFN-γ。本研究分析了57例CHB患者外周血Th2相關細胞因子，結果顯示IL-4、IL-5水平均高于對照組。考慮原因：伴隨著HBV感染，機體應激性變化明顯，通過直接或間接誘導細胞因子和炎癥性肝臟環境相互作用，機體免疫系統紊亂加重，表現出Th2相關細胞因子相對突出，這與袁洪波等[16]研究結果一致。同時，肯定了對慢性乙型病毒性肝炎患者外周血Th2相關細胞因子的檢測價值。

此外，本研究通過對HBeAg陽性和陰性分組研究發現HBeAg（+）組外周血細胞因子IL-4、IL-5高于HBeAg（-）組，IFN-γ、IL-2低于HBeAg（-）組。在此之前，已有研究證實[17]，HBeAg具有免疫調節功能，CHB患者HBeAg水平與Th2相關細胞因子呈正相關[18]。因此，本研究就HBeAg（+）慢性乙型病毒性肝炎患者外周血Th1/Th2相關細胞因子與乙型肝炎病毒載量的關系進行進一步研究，結果顯示低病毒載量組外周血細胞因子IFN-γ、IL-2 IL-4及IL-5低于高病毒載量組（P＜0.05）。健康人群中的Th1/Th2相關細胞因子處于相對平衡狀態，然而，在慢性乙型病毒性肝炎患者免疫反應階段這種平衡被打破，身體免疫功能處于紊亂狀態，伴隨著病毒載量的增加，病毒復制活躍，Th1/Th2平衡紊亂加重，從而出現HBV感染慢性化。有研究證實[19]，HBV-DNA持續復制是慢性乙型病毒性肝炎患者Th1/Th2平衡中斷和肝臟持續損傷的關鍵因素。因此，這也提示臨床上需要對慢性乙型病毒性肝炎患者進行免疫監測及病毒載量調控的需求

綜上所述，Th1/Th2細胞因子在慢性乙型病毒性肝炎的發生和發展中起著重要的作用。在HBV感染初期，Th1細胞因子主導免疫應答，清除病毒。而在慢性乙型病毒性肝炎的發展過程中，Th2細胞因子逐漸占據了主導地位，抑制CTL的殺傷作用，減少病毒清除。因此，研究Th1/Th2細胞因子在慢性乙型病毒性肝炎治療中的應用具有重要的意義。目前，已經有一些研究表明，通過調節Th1/Th2細胞因子的平衡，可以有效地治療慢性乙型病毒性肝炎。未來需要進一步深入研究Th1/Th2細胞因子在慢性乙型病毒性肝炎的作用機制及其在治療中的應用，為開發新的慢性乙型病毒性肝炎治療方法提供更為可靠的理論基礎。

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收稿日期：2023-04-25；修回日期：2023-05-08

編輯/成森